荧光分光光度计的应用ppt课件

1、荧光分光光度计的运用一、一、 荧光分光光度计荧光分光光度计荧光分光光度计既可用于定量分析，荧光分光光度计既可用于定量分析，也可用于测绘激发光谱和荧光光谱。也可用于测绘激发光谱和荧光光谱。第一单色器选择激发光波长第一单色器选择激发光波长250nm250nm的紫外光，故称为激发单色的紫外光，故称为激发单色器。第二单色器荧光单色器与器。第二单色器荧光单色器与激发光入射方向垂直，并选择荧光激发光入射方向垂直，并选择荧光波长，可提高方法的选择性和准确波长，可提高方法的选择性和准确度。度。 荧光分光光度法直接测定天然水中的酚 实验部分实验部分 1.仪器和主要试剂仪器和主要试剂 日立日立 F一一3000荧光

2、分光光度计、规范酚溶液、荧光分光光度计、规范酚溶液、0.200mol/L KH2PO40.275mol/L KHPO4缓冲溶液、饱和缓冲溶液、饱和Na2C2O4溶溶液液. 2.实验方法实验方法 3.结果与讨论结果与讨论3.2 Na2C2O4的用量的用量天然水中含天然水中含Ca2+，Mg2+较多，特别是海水，参与缓冲溶液会出现白色浑浊，使回收较多，特别是海水，参与缓冲溶液会出现白色浑浊，使回收率偏低，参与率偏低，参与1-2滴滴Na2C2O4可消除浑浊可消除浑浊.见表见表1 3.4 荧光强度的稳定性 取酚规范溶液及空白溶液，依实验方法进展荧光强度稳定性实验。测 定了2.5小 时内荧光 强度变化情况

3、，发现荧光强度在 1小时内根本不变。 3.5 样品分析 用流动注射在线富集分别荧光分光光度计测定渣滓渗 出液中的苯胺 实验部分实验部分 1.1 仪器和主要试剂仪器和主要试剂 1流动注射仪流动注射仪, 自装配自装配, 附具有富集作用的自填装微型柱附具有富集作用的自填装微型柱; 荧光分荧光分光光度计光光度计 R F- 540( 日本岛津公司日本岛津公司) , 附有自行研制的流通管附有自行研制的流通管;721 可见分光光度计可见分光光度计( 上海第三分析仪器厂上海第三分析仪器厂) 。 2苯胺规范贮备液苯胺规范贮备液( 10 g/ L) : 称取称取 2. 500 g 新蒸馏的无色分析纯苯胺新蒸馏的无

4、色分析纯苯胺, 用用 25 mL 的的 1 mo L/ L 盐酸溶解后盐酸溶解后, 移至移至 250 mL 容量瓶中容量瓶中, 用蒸馏水稀释至刻用蒸馏水稀释至刻 度度, 置于冰箱中保管。置于冰箱中保管。 3苯胺任务溶液苯胺任务溶液( 10 mg/ L) : 用移液管移取用移液管移取 1. 0 mL 的的 10 g/ L 苯胺苯胺规范贮备液于规范贮备液于 1 000 mL 容量瓶中容量瓶中, 用蒸馏水稀释至刻度用蒸馏水稀释至刻度, 运用时配制。盐酸溶液运用时配制。盐酸溶液( 0. 5 mo l / L) ; N H 3 H20- N H4Cl 缓冲溶缓冲溶 液液( pH= 10) 。 1.2 实

5、验方法实验方法 流动注射仪附填装有阳离子型大孔吸附树脂的微型柱流动注射仪附填装有阳离子型大孔吸附树脂的微型柱, 流动注射分流动注射分析过程由时序电路控制析过程由时序电路控制, 分为再生、分为再生、 进样、冲洗、洗脱进样、冲洗、洗脱 4 步步, 图图 1 是流动注射分析的流程图是流动注射分析的流程图, 旋转阀有旋转阀有 2 个任务形状个任务形状, 图中所示为图中所示为 A 形状形状, 箭箭 头所示为头所示为 B 形状。形状。 各步的阀位置为各步的阀位置为: 再生再生 V 1 ( A) 、V 2( A ) , 进样进样 V 1 ( B) 、 V 2 ( A) , 冲洗冲洗 V 1 ( A) 、 V

6、 2 ( A) , 洗脱洗脱V 1 ( B) 、V 2 ( B) 。首先用盐酸溶液再生树脂; 然后进样, 在 p H 3 的条件下, 苯胺主要以C6 H5 N H3+正离子形状存在, 被树脂吸附; 然后快速冲洗掉树脂颗粒间的残留样品; 最后进行洗脱, 在 p H = 10 的条件下, 苯胺主要以 C 6H5N H2 分子形状存在, 吸附的C6 H5 N H3+转变为C 6H 5 N H 2 后被洗脱至荧光分光光度计内的流通管中, 用时间扫描动态检测洗脱液荧光强度。1.3结果与讨论3.1 任务曲线 用移液管分别取 0. 0、 0. 5、0. 6、0 . 7、0. 8、0. 9、1. 0、2. 0

7、、3 . 0、4. 0、5. 0 、6. 0 m L 10. 0 mg/ L 的苯胺规范溶液于一组 100 mL 容量瓶中, 定容后配制成含苯胺分别为 0. 00、0. 05 、0. 06、 0. 07、0. 08、 0. 09、0 . 10、0. 20、0. 30、 0. 40、0. 50 、0. 60 mg/ L 的规范溶液, 按上述实验条件动态检测荧光强度, 绘制荧光强度和质量浓度的任务曲线为: F = 48. 9C+ 15. 2, r = 0. 999 9。 线性范围为 0. 070. 50 mg/ L 。3.2干扰在上述实验条件下研讨了 3 m g / L 的苯酚、 联苯胺、2, 4

8、- 二硝基苯胺、 对氨基苯甲酸、二苯胺等对 0. 30 mg/ L 的苯胺的干扰情况。 结果阐明: ( 1) 酚类物质、 联苯胺、 2, 4 - 二硝基苯胺、 二苯胺等胺类物质不干扰苯胺的测定, 这主要是因为它们不能以正离子的形状被树脂吸附; ( 2) 对氨基苯甲酸等也不干扰苯胺的测定。3.3水样的测定及显著性检验将此法运用于渣滓渗出液的测定。 取渣滓渗出液蒸馏, 得到1 L 蒸馏液, 然后用本法直接进样分析, 结果见表 1。 表 1 同时给出了对蒸馏液进展萃取后用 HPL C 测定的结果及 t 检验的结果。可以看出, 在 95% 的置信程度下, 两种方法没有显著性差别, 结果令人称心。 2.

9、4 回收率实验取 1 L 渣滓渗出液蒸馏, 向蒸馏液中分别参与含苯胺 0. 100、0. 200 mg 的规范溶液, 然后用蒸馏水稀释至2 L 后直接进样分析, 结果见表1。可以看出, 本法的回收率在 96% 104 % 之间。图 2 b、 c 是渣滓渗出液的加标回收荧光光谱。2.5流动注射- 荧光分光光度计联用的检测性能 荧光分光光度计法测定腊肉中维生素C C1 实验部分实验部分1.1仪器与试剂仪器与试剂 荧光分光光度计荧光分光光度计F7000 ( 日立公司日立公司) ；DHG9241A恒温培育箱；抗恒温培育箱；抗坏血酸、偏磷酸坏血酸、偏磷酸 、乙酸钠、乙酸钠 、硫脲、硫脲 、硼酸、硼酸;

10、2，6 二氯靛酚、盐酸邻苯二胺。二氯靛酚、盐酸邻苯二胺。1.2实验方法实验方法1.2.1样品前处置样品前处置准确称取匀浆后的腊肉准确称取匀浆后的腊肉25g置于烧杯中，参与置于烧杯中，参与20mL50g/ l偏磷酸，超声偏磷酸，超声20min后，过后，过滤至滤至100mL棕色容量瓶中，用棕色容量瓶中，用50g/ L偏磷酸定容汲取滤液偏磷酸定容汲取滤液1.00mL于试管中于试管中,参参与与0.1ml2g/l二氯靛酚二氯靛酚( 使使VC氧化成脱氢氧化成脱氢VC) ，混匀，混匀( 此时溶液呈微红色此时溶液呈微红色) 再参与再参与0.10ml 30g/ l硫脲摇匀，使红色褪去硫脲摇匀，使红色褪去( 复原

11、过量的二氯靛酚复原过量的二氯靛酚).向试管中参与向试管中参与1.00mL3%硼酸硼酸50%乙酸钠乙酸钠摇匀摇匀,室温下静置室温下静置15min 在暗室中迅速向试管中参与在暗室中迅速向试管中参与5.00mL0.2g/ l盐酸邻苯二盐酸邻苯二胺，摇匀胺，摇匀,在室温下反响在室温下反响30min 同时做试剂空白同时做试剂空白.1.2.2抗坏血酸规范溶液准确称取60真空枯燥2h的0.0500g抗坏血酸，用50g/L偏磷酸溶解并定至50mL棕色容量瓶中，即为1mg /L的抗坏血酸规范贮藏液.用偏磷酸逐级稀释，配置成0 0.2 1 5 10 20mg /L规范溶液，其他步骤同样品前处置.1.2.3荧光光度

12、计参数条件丈量方式: 光度丈量法，激发波长350nm，发射波长430nm，积分时间0.1s，延迟时间按0.1s，激发波长狭缝宽度5.0nm，发射波长狭缝宽度5.0nm，光电倍增管电压250V.2 结果与讨论2.1 方法的检出限 规范曲线和相关系数延续11次进空白样品，根据3倍规范偏向计算得出本方法VC检出限为0.95mg/kg 回归方程为Y=0.0073X0.029，相关系数为0.9996。可见本方法检出限较低，在丈量浓度020mg /L范围内线性良好。2.2样品的测定及回收率按本方法测定腊肉中VC，同时在待测样品中参与知量抗坏血酸规范溶液，按测定步骤进展加标回收实验，结果见表2 方法的回收率

13、在87.2%94.3%之间，测定结果满足分析要求。2.3荧光分光光度计法与2，4二硝基苯肼比色法比较肉类中VC测定常采用传统的2，4二硝基苯肼比色法，荧光分光光度计法那么很少见报道。肉制品中VC含量都很低，2，4二硝基苯肼法的检出限较高 、反复性也较差，而荧光分光光度计法检出限低 精细度较高 故将荧光分光光度计法与2，4二硝基苯肼比色法对腊肉中VC的测定结果相比较，结果见表3 。从表3可知，这两种方法测定腊肉中VC含量，其结果无显著差且荧光分光光度计法精细度更好。 可见，荧光分光光度计法测定肉制类样品中VC具有快速准确 精细度高等优点。 H P L C - R F H P L C - R F

14、法快速测定水中苯并( a ) ( a ) 芘利用高效液相色谱仪利用高效液相色谱仪( HP LC ) , 将样品中苯并将样品中苯并( a) 芘与其他芘与其他 有机物分别有机物分别, 并同并同 荧荧光分光光光分光光 度计度计( R F) 的微的微 流动池相联流动池相联, 作荧光测定作荧光测定, 组成了组成了 HPL C - RF 测定体系测定体系, 进进 行饮用行饮用 水检测。该水检测。该 方法相方法相 对规范对规范 差为差为 4.5 % 7.2% , 回收回收 率为率为8 6 .5% 93.5% , 检测限为检测限为 0. 0009g/ L 。1 背景引见背景引见苯并苯并( a ) 芘是多环芳烃

15、中致癌性最强的化合物之一。环境中多环芳烃主要来自煤芘是多环芳烃中致癌性最强的化合物之一。环境中多环芳烃主要来自煤和石油的和石油的熄灭以及裂解过程。在热电厂、熄灭以及裂解过程。在热电厂、 煤气厂、煤气厂、 焦化厂以及石油化工企业的消费中焦化厂以及石油化工企业的消费中, 都有多环芳都有多环芳烃排入大气烃排入大气, 这些企业的废水中也都含有多环芳烃。我国地表水环境质量规范规这些企业的废水中也都含有多环芳烃。我国地表水环境质量规范规定定类水类水苯并苯并( a ) 芘含量为芘含量为 2.810-6mg/ L。因此。因此, 对水体中苯并对水体中苯并( a) 芘的日常检测具有重芘的日常检测具有重要意义。要意

16、义。目前苯并目前苯并( a)芘的检测主要芘的检测主要 采用层析采用层析- 荧光分光光度法和高效液相色谱法。今运荧光分光光度法和高效液相色谱法。今运用高效液用高效液相色谱仪和荧光分光光度计对日常饮用水中苯并相色谱仪和荧光分光光度计对日常饮用水中苯并( a ) 芘进展检测芘进展检测, 满足了地表水满足了地表水的测定要的测定要求。求。2 实验部分实验部分2.1 主要仪器及试剂主要仪器及试剂高效液相色高效液相色 谱仪谱仪, 51 0 泵泵, Wa t e r s 公司公司;Rheodyne 7725 i 六通进样六通进样阀阀, 带带 20 L 进样进样定量管定量管; R F- 53 01 荧光分光光度

17、计荧光分光光度计, 带带 12 L 液相微流动池，日本液相微流动池，日本 岛岛 津津 公公 司司; C18色谱柱色谱柱150 mm 3 . 9 mm 5m。石油醚。石油醚( 沸程沸程 60 90 重重 蒸蒸 馏馏 ) ; 甲醇。甲醇。0.05 mg / L 苯并苯并( a) 芘规范溶液芘规范溶液: 临用时临用时, 用甲醇稀释用甲醇稀释 0.040 g / L 苯苯并并( a) 芘规范贮藏液芘规范贮藏液.2.2 测定条件测定条件流动相流动相 甲醇甲醇 ：水：水= 90：10 , 0 .7 mL/ mi n;RF5301PC任务站任务站; 波长波长 激激发发 36 8 nm, 发射发射 4 07

18、nm; 狭缝宽激发狭缝宽激发5 nm, 发射发射 5 nm; 数据采集间隔数据采集间隔0 .02 min 。2.3 微流动池校正微流动池校正在激发波长在激发波长 400 nm 、 发射波长发射波长 450 nm 的条件下的条件下, 将将 10g/ L 硫酸硫酸奎宁溶液奎宁溶液 5 mL 由微流由微流动池流动相进口处注入管道动池流动相进口处注入管道, 调理前后左右旋钮使荧光值达最大。调理前后左右旋钮使荧光值达最大。2.4 校准曲线绘制校准曲线绘制分别汲取一系列分别汲取一系列 0 05 m g/ L 苯并苯并 ( a) 芘芘 规范溶液盛于有规范溶液盛于有 500 mL 水的分液漏斗中水的分液漏斗中

19、, 参与参与石油醚石油醚10 mL , 用力震荡用力震荡 40 0 次次, 静置分层后静置分层后, 弃去水相弃去水相,经无水硫酸经无水硫酸钠脱水后钠脱水后, 移入自制浓移入自制浓缩瓶中缩瓶中( 图图 1 ) ,以高纯氮气吹至近干以高纯氮气吹至近干, 用甲醇定容至用甲醇定容至 0.5 mL , 进样进样20L 测定。测定。以浓度与荧光强度作线性回归以浓度与荧光强度作线性回归, 回归方程为回归方程为 y = 357.9 2 x + 3.685, r = 0.9998。色谱图见图。色谱图见图 2.2.5 水样测定水样测定取水样取水样 500 mL 于分液漏斗中于分液漏斗中, 以下按绘制校准曲线步骤进

20、展以下按绘制校准曲线步骤进展, 进样进样 20 L 测定。测定。3 结果与讨论结果与讨论3.1萃取溶剂的选择萃取溶剂的选择用石油醚、用石油醚、 环己烷和苯环己烷和苯 3 种溶剂萃取水中苯并种溶剂萃取水中苯并( a) 芘的效率无明显差别芘的效率无明显差别, 从溶剂毒性和挥从溶剂毒性和挥发性思索发性思索, 选用石油醚作为萃取溶剂。选用石油醚作为萃取溶剂。3.2精细度精细度对两种模拟水样作精细度实验对两种模拟水样作精细度实验, 每个水样平行测定每个水样平行测定 6 次次, 每次进样每次进样 2 0 L, 结果见表结果见表 1 3.3加标回收率加标回收率分别取不同含量的模拟水样进展加标回收实验分别取不

21、同含量的模拟水样进展加标回收实验, 结果列表结果列表 2, 回收率为回收率为 86.5% 93.5% 。3.4方法检测限方法检测限将仪器调到最正确形状将仪器调到最正确形状, 测出测出 3 倍噪声的荧光强度值为倍噪声的荧光强度值为 4.210 , 代入校准曲线代入校准曲线, 得浓缩液得浓缩液 的检测限为的检测限为 0.0009mg / L, 以以 500 mL 水样浓缩至水样浓缩至 0.5 m L计算计算, 方法的检测限为方法的检测限为 0.0009 g/ L .该方法灵敏度高该方法灵敏度高, 操作简便、操作简便、 快速快速, 适宜于环境水样中苯并适宜于环境水样中苯并( a ) 芘的分析。芘的分

22、析。生活饮用水中痕量砷和汞的氢化物双道原子荧光测定法1 背景引见背景引见砷、砷、 汞是生活饮用水中常见的污染物汞是生活饮用水中常见的污染物, 水中的砷、汞主要来自于工、水中的砷、汞主要来自于工、 农业农业废水及自然污染。污废水及自然污染。污染的水经过食物链的传送和富集进入机体染的水经过食物链的传送和富集进入机体, 并在机体内蓄积并在机体内蓄积, 引起慢性中毒引起慢性中毒, 所以对生活饮用水所以对生活饮用水中砷、中砷、 汞的监测具有重要意义。通常测定砷、汞的监测具有重要意义。通常测定砷、 汞的方法主要有比色法、汞的方法主要有比色法、 分分光光度法、光光度法、 原子荧原子荧光法等光法等, 但是这些

23、方法都是对砷、但是这些方法都是对砷、 汞分别进展测定。采用汞分别进展测定。采用 AF S- 23 0 双道原双道原子荧光光度计建立同子荧光光度计建立同时测定的方法。时测定的方法。2 实验部分实验部分2.1实验原理实验原理样品参与硫脲样品参与硫脲- 抗坏血酸后抗坏血酸后, 样品中样品中As( V) 被复原成被复原成 A s ( ) 。样品中的。样品中的 As( Hg) 与硼与硼氢化钾反响生成挥发性的氢化物氢化钾反响生成挥发性的氢化物, 以氩气为载气以氩气为载气, 将氢化物在石英电热原子将氢化物在石英电热原子化器中原化器中原子化子化, 在特制的在特制的 As( Hg) 空心阴极灯照射下空心阴极灯照

24、射下, 基态原子被激发而跃迁基态原子被激发而跃迁, 再回到基再回到基态时发态时发射出特征波长的荧光射出特征波长的荧光, 其荧光值其荧光值( I f ) 与与 As ( Hg ) 含量成正比含量成正比, 根据规范系列根据规范系列进展定量。进展定量。2.2 仪器与试剂仪器与试剂AF S - 230a 型双道原子荧光光度计，型双道原子荧光光度计， 规范溶液规范溶液 A s 1 mg/ ml, Hg 1 mg/ ml; 砷砷汞混合规范贮藏液汞混合规范贮藏液 A s 1g/ ml, Hg 0. 1g/ ml; 砷汞混合规范运用液砷汞混合规范运用液 As 100 n g/ ml , Hg 10 n g/ ml; 规范溶液稀释均用蒸馏水；复原剂规范溶液稀释均用蒸馏水；复原剂( 5% 硫脲硫脲- 抗坏血抗坏血酸溶液酸溶液) ；5% HCl 溶液溶液 ； 0. 01 mo l/ L N a O H 溶液；溶液；1% K HB4 - Na O H 溶液溶液2.3 分析步骤分析步骤 3 结果与讨论结果与讨论3.1负高压的选择负高压的选择 在实验条件下在实验条件下, 选择不同的光电倍增管负高压选择不同的光电倍增管负高压 300、 290、 28 0、 260 V 时测定和时测定和绘制规范曲线绘制规范曲线, 实验阐明负高压在实验阐明负高压在 290 V 时时, 砷、砷、