呼吸道感染病原体抗体(IgM)九联检检测及应用

1、呼吸道感染病原体抗体（IgM）九联检检测及应用云南省第二人民医院检验科高宗鹰概述n呼吸道病原多通过空气或唾液飞沫方式传播，非常容易传染他人，造成局部流行，甚至可导致爆发性流行。呼吸道感染病原体抗体IgM 九联检的应用有利于尽早快速准确地找到病原体，对疾病的诊断、确定正确治疗方案有重大意义。概述n呼吸道感染的病原体种类多且临床症状相似难以区分，因而快速检测、诊断、明确病原体感染对临床诊治工作有很大的帮助。应用呼吸道联合检测试剂盒可以提供快速诊断，对加强呼吸道疾病病原学诊断和合理使用抗生素可起到很好的指导作用。 概述n我科在实际检测和应用中积累了一定的心得和体会：各种病原体感染的临床意义，抗体检测

2、的最佳时间，试剂的灵敏度、特异性、精密度，交叉反应和检测中的技巧等，希望能和广大同行进行交流和学习。 社区获得性肺炎l社区获得性肺炎（社区获得性肺炎（community-acquired community-acquired pneumonia, CAPpneumonia, CAP）是指在非医院环境中）是指在非医院环境中受感染因子侵袭所发生的肺部炎症，以受感染因子侵袭所发生的肺部炎症，以及住院后及住院后4848小时内或特殊病原菌在潜伏小时内或特殊病原菌在潜伏期期1010天内所患肺炎，又称院外获得性肺天内所患肺炎，又称院外获得性肺炎。炎。lCAPCAP的发病率为的发病率为4.7%-11.6%4.

3、7%-11.6%，其中，其中22%-22%-51%51%的的CAPCAP需住院治疗；住院需住院治疗；住院CAPCAP死亡率死亡率7%7%，重症重症CAPCAP死亡率死亡率29%29%。社区获得性肺炎的分类 （一）细菌性肺炎（一）细菌性肺炎 1.1.需氧革兰染色阳性球菌，如肺炎链球菌需氧革兰染色阳性球菌，如肺炎链球菌（即肺炎球菌）、金黄色葡萄球菌、甲（即肺炎球菌）、金黄色葡萄球菌、甲型溶血性链球菌等。型溶血性链球菌等。 2 2需氧革兰染色阴性菌，如肺炎克雷白需氧革兰染色阴性菌，如肺炎克雷白杆菌、流感嗜血杆菌、埃希大肠杆菌、杆菌、流感嗜血杆菌、埃希大肠杆菌、绿脓杆菌、军团菌等。绿脓杆菌、军团菌等。

4、 3 3厌氧杆菌如棒状杆菌、梭形杆菌等。厌氧杆菌如棒状杆菌、梭形杆菌等。社区获得性肺炎的分类（二）病毒性肺炎如腺病毒、呼吸道合胞病毒、（二）病毒性肺炎如腺病毒、呼吸道合胞病毒、 流感病毒、麻疹病毒等。流感病毒、麻疹病毒等。（三）支原体肺炎由肺炎支原体引起。（三）支原体肺炎由肺炎支原体引起。（四）真菌性肺炎如白色念珠菌、曲菌、放线（四）真菌性肺炎如白色念珠菌、曲菌、放线 菌等。菌等。（五）其他病原体所致肺炎如立克次体（如（五）其他病原体所致肺炎如立克次体（如Q Q 热立克次体）、衣原体（如鹦鹉热衣原热立克次体）、衣原体（如鹦鹉热衣原 体）、弓形体（如鼠弓形体）、原虫（如体）、弓形体（如鼠弓形体）

5、、原虫（如 卡氐肺孢子虫）、寄生虫（如肺包虫、肺卡氐肺孢子虫）、寄生虫（如肺包虫、肺 吸虫、肺血吸虫）等。吸虫、肺血吸虫）等。嗜肺军团菌嗜肺军团菌lLPLP是社区获得性肺炎的重要致病菌。在欧洲和是社区获得性肺炎的重要致病菌。在欧洲和北美军团军肺炎占社区获得性肺炎前北美军团军肺炎占社区获得性肺炎前3 3，4 4位，位，ICU ICU 重症社区获得性肺炎的第三位。重症社区获得性肺炎的第三位。l对人致病的对人致病的LPLP有有1616个血清型，军团菌肺炎个血清型，军团菌肺炎8O%8O%由由LP1LP1引起。引起。l美国每年新发军团菌肺炎病例美国每年新发军团菌肺炎病例1 1万例，我国各万例，我国各省市

6、均有散发病例报告。省市均有散发病例报告。l夏秋季为军团菌肺炎流行高峰季节，散发病例夏秋季为军团菌肺炎流行高峰季节，散发病例全年均有发生。全年均有发生。嗜肺军团菌嗜肺军团菌n人感染军团菌主要是通过吸入被军团菌污染的人感染军团菌主要是通过吸入被军团菌污染的气溶胶而导致的，气溶胶是军团菌传播、感染气溶胶而导致的，气溶胶是军团菌传播、感染的重要载体。目前尚无人的重要载体。目前尚无人人之间直接接触传人之间直接接触传播军团菌病的报道。与其他介水传播疾病不同播军团菌病的报道。与其他介水传播疾病不同的是军团菌没有粪口传播途径，人们也不会的是军团菌没有粪口传播途径，人们也不会由于饮用了含有军团菌的水而感染。由于

7、饮用了含有军团菌的水而感染。嗜肺军团菌嗜肺军团菌 军团菌病因其无典型临床特征，很难与其他病军团菌病因其无典型临床特征，很难与其他病原体所致的肺炎相区别，又因其多系统受累还原体所致的肺炎相区别，又因其多系统受累还需与相关疾病鉴别，故临床诊断比较困难，早需与相关疾病鉴别，故临床诊断比较困难，早期常被误诊，导致病死率较高。因此早期诊断期常被误诊，导致病死率较高。因此早期诊断对于疾病的转归具有重要的意义。应结合流行对于疾病的转归具有重要的意义。应结合流行病学资料、临床表现和实验室检查结果进行综病学资料、临床表现和实验室检查结果进行综合分析。合分析。治疗建议使用红霉素治疗治疗建议使用红霉素治疗肺炎支原体

8、肺炎支原体l是介于病毒与细菌之间的一种没有细胞壁的病是介于病毒与细菌之间的一种没有细胞壁的病原体原体l40%40%的非典型肺炎病例是由肺炎支原体引起的，的非典型肺炎病例是由肺炎支原体引起的，同时由多达同时由多达18%18%的住院病例是儿童。发病率高的住院病例是儿童。发病率高发于发于5 5到到1515周岁之间。肺炎支原体感染最严重周岁之间。肺炎支原体感染最严重的结果是导致肺炎。的结果是导致肺炎。 儿童最典型的症状是气儿童最典型的症状是气管、支气管炎管、支气管炎 。l建议使用大环内脂类抗菌药物治疗建议使用大环内脂类抗菌药物治疗肺炎支原体肺炎支原体nMPMP肺炎在全球范围内均有发生，有年龄分布特征和

9、季肺炎在全球范围内均有发生，有年龄分布特征和季节高峰等。是各年龄段儿童急性呼吸道感染的常见病节高峰等。是各年龄段儿童急性呼吸道感染的常见病原，在我国社区获得性肺炎（原，在我国社区获得性肺炎（CAPCAP）中占据重要地位。）中占据重要地位。儿童社区获得性肺炎（儿童社区获得性肺炎（CAPCAP）中）中MPMP病原可占病原可占70%70%，国外，国外有文献报道为有文献报道为9.6%-66.7%9.6%-66.7%，在我国流行期间占小儿肺，在我国流行期间占小儿肺炎总数的炎总数的20%-30%20%-30%，另外有报道，另外有报道CAPCAP患儿患儿MPMP感染阳性率感染阳性率与年龄关系：与年龄关系：0

10、606月月1.21%1.21%，11岁岁5.08%5.08%，33岁岁14.23%14.23%，55岁岁18.95%18.95%，1010岁岁28.13%28.13%，1010岁岁30.27%30.27%。总体以学。总体以学龄儿童为主，但现在年幼儿发病率有所增加。龄儿童为主，但现在年幼儿发病率有所增加。MPMP主要主要通过呼吸道飞沫传播。通过呼吸道飞沫传播。MPMP感染暴发流行多见在一个密感染暴发流行多见在一个密闭环境中，如学校、幼托机构、夏令营等，密切接触闭环境中，如学校、幼托机构、夏令营等，密切接触是重要因素。而且临床症状不典型，是重要因素。而且临床症状不典型，MPMP感染重症病人感染重症

11、病人增多，难治性增多，难治性MPMP肺炎增多。肺炎增多。肺炎支原体肺炎支原体n潜伏期约为潜伏期约为2 23 3周，一般起病较缓慢，但亦有周，一般起病较缓慢，但亦有急性起病者，常以发热、热型不定、热程急性起病者，常以发热、热型不定、热程1 13 3周、多为弛张热及不规则发热，平均周、多为弛张热及不规则发热，平均4-5 d4-5 d；刺激性咳嗽为突出表现，有的酷似百日咳样咳刺激性咳嗽为突出表现，有的酷似百日咳样咳嗽，多见干嗽，多见干 咳，可咳少量黏稠痰，甚至痰中咳，可咳少量黏稠痰，甚至痰中带血丝。伴喘息。婴幼儿起病急、病程长，可带血丝。伴喘息。婴幼儿起病急、病程长，可表现喘憋、呼吸困难；年长儿可伴

12、咽痛、胸闷、表现喘憋、呼吸困难；年长儿可伴咽痛、胸闷、胸痛等症状，胸痛等症状，肺部常在整个病程中无任何阳性体征，这是本病的特点之一。少数病例呼吸音少数病例呼吸音减弱，双肺可闻及干湿性音，这些表现常在减弱，双肺可闻及干湿性音，这些表现常在X X线改变之后发现线改变之后发现. .肺炎支原体肺炎支原体n小龄儿童（小龄儿童（5 5岁岁中肺炎支原体感染经常无中肺炎支原体感染经常无症状而消失或只导致轻度呼吸道感染。由于感症状而消失或只导致轻度呼吸道感染。由于感染后没有足够的免疫力存在，会出现需要长时染后没有足够的免疫力存在，会出现需要长时间康复期并不断加重的再感染（多次）。间康复期并不断加重的再感染（多次

13、）。肺炎支原体肺炎支原体n支原体肺炎后遗问题是由于疾病的严重损害，支原体肺炎后遗问题是由于疾病的严重损害，致使气道、肺组织的完全修复已不可能而造成致使气道、肺组织的完全修复已不可能而造成的，已逐渐引起人们的重视。后遗问题最严重的，已逐渐引起人们的重视。后遗问题最严重的是出现弥漫性肺间质纤维化、肺功能衰竭。的是出现弥漫性肺间质纤维化、肺功能衰竭。其他后遗问题还有反复呼吸道感染、支气管哮其他后遗问题还有反复呼吸道感染、支气管哮喘等。喘等。Q热立克次体热立克次体lQ Q热是由热是由Q Q热立克次体引起的全身疾病，会造成热立克次体引起的全身疾病，会造成发热、非典型性肺炎、肝炎或心内膜炎。由于发热、非典

14、型性肺炎、肝炎或心内膜炎。由于从临床标本中分离病原体困难，其诊断基于血从临床标本中分离病原体困难，其诊断基于血清学方法。常用的检测方法是补体结合（清学方法。常用的检测方法是补体结合（CFCF）和和IFAIFA。IgMIgM检测中检测中IFAIFA是特异性最好的。是特异性最好的。 l绵羊，牛和少数的山羊是人类的主要传染源。绵羊，牛和少数的山羊是人类的主要传染源。感染的污染物的吸入是人类接触到感染的污染物的吸入是人类接触到Q Q热立克次热立克次体病菌的主要方式。体病菌的主要方式。l大部分病例发于春天或是初夏。大部分病例发于春天或是初夏。 Q热立克次体热立克次体 多在宿主细胞空泡内繁殖多在宿主细胞空

15、泡内繁殖n不含有与变形杆菌不含有与变形杆菌X株起交叉反应的株起交叉反应的X凝凝集原集原n对实验室动物一般不显急性中毒反应对实验室动物一般不显急性中毒反应n对理化因素抵抗力强。在干燥沙土中对理化因素抵抗力强。在干燥沙土中46可存活可存活79个月，个月，-56能活数年，能活数年，加热加热60703060分钟才能灭活。分钟才能灭活。Q热立克次体热立克次体n感染后潜伏期感染后潜伏期12-39天，突然发作，伴天，突然发作，伴发热、剧烈头疼、寒颤、严重乏力。发热、剧烈头疼、寒颤、严重乏力。nQ热的诊断为临床和实验室检查结合。热的诊断为临床和实验室检查结合。n建议使用氯霉素，四环素类抗生素治疗。建议使用氯霉

16、素，四环素类抗生素治疗。肺炎衣原体肺炎衣原体衣原体是一类严格真核细胞内寄生，具有衣原体是一类严格真核细胞内寄生，具有独特发育周期，并能通过细菌滤器的原独特发育周期，并能通过细菌滤器的原核细胞型微生物。核细胞型微生物。肺炎衣原体肺炎衣原体肺炎衣原体肺炎衣原体l肺炎衣原体极易造成呼吸系统感染，特肺炎衣原体极易造成呼吸系统感染，特别是支气管炎和肺炎。该种属在呼吸道别是支气管炎和肺炎。该种属在呼吸道感染中常见的是肺炎衣原体和鹦鹉热衣感染中常见的是肺炎衣原体和鹦鹉热衣原体。在老年人中发病率较高，所引起原体。在老年人中发病率较高，所引起的肺炎占所有肺炎病例的的肺炎占所有肺炎病例的10%10%。l肺炎衣原体

17、感染后无特异性的临床表现，肺炎衣原体感染后无特异性的临床表现，其诊断主要依靠实验室诊断。其诊断主要依靠实验室诊断。l建议使用红霉素、四环素或其他大环内建议使用红霉素、四环素或其他大环内脂类药物治疗。脂类药物治疗。腺病毒腺病毒腺病毒对腺病毒对呼吸道呼吸道、胃肠道、胃肠道、尿道和膀胱尿道和膀胱、眼、肝、眼、肝脏脏等均等均可感染可感染呼吸道感染的典型症状是咳嗽、鼻塞和咽炎，同时伴有呼吸道感染的典型症状是咳嗽、鼻塞和咽炎，同时伴有发热、寒战、头痛和肌肉发热、寒战、头痛和肌肉 痛等，包括以下痛等，包括以下4种不同的种不同的综合征。综合征。 n1急性发热性咽喉炎急性发热性咽喉炎 通常为婴儿和儿童发病，通常

18、为婴儿和儿童发病，由由C组病毒引起，出现咳嗽，鼻塞、发热和咽喉部溃疡组病毒引起，出现咳嗽，鼻塞、发热和咽喉部溃疡等症状，这些表现难以与其他病毒引起的轻型呼吸道等症状，这些表现难以与其他病毒引起的轻型呼吸道感染鉴别。感染鉴别。 n2咽结膜热（咽结膜热（pharyngoconjunctival fever）症状与急性发热性咽喉炎相似，但常同时发生结膜炎。症状与急性发热性咽喉炎相似，但常同时发生结膜炎。咽结膜热有暴发流行倾向，如游泳池结膜炎，多由咽结膜热有暴发流行倾向，如游泳池结膜炎，多由B组腺病毒组腺病毒3和和7型所致，愈后尚好，一般无后遗症。型所致，愈后尚好，一般无后遗症。 腺病毒腺病毒n3急性

19、呼吸道疾病（急性呼吸道疾病（acute respiratory diseases，ARD）这一综合征由咽炎、发）这一综合征由咽炎、发热、咳嗽和全身不适为特点，常在军队的新兵热、咳嗽和全身不适为特点，常在军队的新兵中流行，多因突然紧张、劳累、聚集等所致。中流行，多因突然紧张、劳累、聚集等所致。此感染多由腺病毒此感染多由腺病毒4、7型引起，也可见于型引起，也可见于3型。型。 n4、腺病毒肺炎约占儿童期肺炎的、腺病毒肺炎约占儿童期肺炎的10%，多由，多由腺病毒腺病毒3、7型引起；在青年人腺病毒肺炎的病型引起；在青年人腺病毒肺炎的病死率为死率为8%10%；肺炎也是新兵急性呼吸；肺炎也是新兵急性呼吸道疾

20、病的一种严重表现。道疾病的一种严重表现。腺病毒腺病毒l腺病毒是一种重要的呼吸道病原体，可腺病毒是一种重要的呼吸道病原体，可引起低龄儿童的肺炎和细支气管炎。引起低龄儿童的肺炎和细支气管炎。l在集体儿童机构中往往同时发生腺病毒在集体儿童机构中往往同时发生腺病毒上呼吸道感染及肺炎。腺病毒肺炎上呼吸道感染及肺炎。腺病毒肺炎80%80%发发生于生于7 72424月婴幼儿。腺病毒肺炎约占病月婴幼儿。腺病毒肺炎约占病毒性肺炎的毒性肺炎的20%20%30%30%。 l建议抗病毒药物治疗并注意继发细菌感染的防建议抗病毒药物治疗并注意继发细菌感染的防治。治。 呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒n呼吸道合胞病毒是导致婴幼

21、儿下呼吸道感染的重要原因，大约有65%的1岁儿童感染了呼吸道合胞病毒，几乎所有儿童在2岁时至少感染过1次，呼吸道合胞病毒感染引发的支气管炎的住院儿童可增加其以后发生反复喘息和哮喘的风险，而且，感染后机体获得的免疫反应维持时间不长，仍可再次感染。呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒l呼吸道合胞病毒是一种呼吸道合胞病毒是一种RNARNA病毒，属于副病毒，属于副粘液病毒。粘液病毒。l感染后临床症状不典型感染后临床症状不典型。 l建议抗病毒治疗，重症病人可以使用三建议抗病毒治疗，重症病人可以使用三氮唑核苷做雾化治疗。氮唑核苷做雾化治疗。流感病毒流感病毒l该病毒呈季节性周期性流行爆发（该病毒呈季节性周期性流行爆

22、发（1212月月- -4 4月）月） l甲型流感的流行每年都会发生。甲型流感的流行每年都会发生。 l乙型流感的流行只在每乙型流感的流行只在每3-63-6年爆发一次，年爆发一次，感染人数超过总人口的感染人数超过总人口的25%25%。l流感病毒降低了人体抵御呼吸道感染的流感病毒降低了人体抵御呼吸道感染的能力，因此流感经常会造成继发性感染。能力，因此流感经常会造成继发性感染。l建议使用干扰素、金刚烷胺、奥司他韦建议使用干扰素、金刚烷胺、奥司他韦等药物进行治疗。等药物进行治疗。副流感病毒副流感病毒l副流感病毒副流感病毒1 1、2 2和和3 3型在型在2-42-4岁儿童中能岁儿童中能引起喉气管支气管炎（

23、哮吼）。血清引起喉气管支气管炎（哮吼）。血清3 3型型是引起是引起1 1岁以下儿童肺炎的重要病原体，岁以下儿童肺炎的重要病原体，且具有流行性；血清且具有流行性；血清1 1型和血清型和血清2 2型常与型常与哮吼有关。哮吼有关。l建议使用病毒唑、双黄莲抗病毒治疗。建议使用病毒唑、双黄莲抗病毒治疗。 诊断总则诊断总则l对于肺炎的诊断，血清学检测是所有实对于肺炎的诊断，血清学检测是所有实验室诊断的一部分，其他诊断还包括培验室诊断的一部分，其他诊断还包括培养和抗原养和抗原或核酸检测。每种方法都是对或核酸检测。每种方法都是对其它诊断方法的一种证实和有效的确认。其它诊断方法的一种证实和有效的确认。l像肺炎这

24、样难以诊断的临床病例，应该像肺炎这样难以诊断的临床病例，应该使用不同的诊断方法同时检测，以获得使用不同的诊断方法同时检测，以获得最佳的诊断结果，最佳的诊断结果，各种方法之间是一种各种方法之间是一种互补的关系互补的关系。检测原理载玻片检测注意事项n1.试剂复温n2.血清IGG吸附n3.加样n4.温育n5.荧光二抗n6.封片检测注意事项n检测结果出现假阴现象：n（1）检查阴阳性对照实验结果，以确认试剂盒是否在有效期；n（2）检查实验记录，是否严格按照操作规程，是否漏加、错加酶结合物或样本；n（3）是否洗涤时正对孔冲洗、水流过猛，使固相化的复合体被冲洗掉；n（4）加样量、反应时间、温度不够；n（5）

25、没有及时观察结果或判断有误。 检测注意事项n检测结果出现假阳性现象：n（1）加样时操作不规范造成加样污染；n（2）洗涤时发生交叉污染或洗涤不彻底； n（3）检查实验记录，是否严格按照操作规程，是否忘记加IgG吸附剂；n （4）判断有误；n （5）试剂盒过期抗原抗体检测nIgMnIgG病原体潜伏期病原体潜伏期 IgM抗体产生时间抗体产生时间病原体潜伏期IgM产生时间Igm存在存在时间时间嗜肺军团菌2-10天1周左右3-6个月肺炎支原体14-21天1周左右3-6个月Q热立克次体12-19天2周左右3-4个月肺炎衣原体30天左右2-3周2-6个月腺病毒2-14天1周左右2-3个月呼吸道合胞3-7天1

26、周左右2-3个月流感病毒1-7天1周左右2-3个月副流感2-7天1周左右2-3个月 试剂性能指标灵敏度和特异性：灵敏度和特异性：l验证方法：方法学对比；验证方法：方法学对比；l灵敏度：检测感染样本的阳性率灵敏度：检测感染样本的阳性率 DS (%)= (TP/TP+FN) x 100 ；l特异性：检测未感染样本的阴性率特异性：检测未感染样本的阴性率 ED (%)= (TN/TN+FP) x 100 ；对比试剂及样本数量病原体病原体方法方法厂家厂家腺病毒腺病毒ELISAELISAVirotechVirotech立克次体立克次体IFAIFABiomerieuxBiomerieux衣原体衣原体IFAIFAFOCUSFOCUS甲型流感病毒甲型流感病毒ELISAELISAVirotechVirotech乙型流感病毒乙型流感病毒ELISAELISAVirotechVirotech嗜肺军团菌嗜肺军团菌IFAIFAMarDXMarDX支原体支原体ELISAELISAVIRC