STP-V-计数培养基适用性检查验证方案

1、STP-V-计数培养基适用性检查验证方案计数培养基适用性检查验证方案 STP-7第1页共6页计数培养基适用性检查验证方案 起草部门质量部标题计数培养基适用性 检查验证方案起草人日期审核人日期批准人日期编号STP-V-原编号分 发部门质量部目录1 .验证目的2 .参照标准3 .验证项目4 .验证小组及职责5 .合格标准6 .试验材料：7 .菌液制备8 .菌液计数9 .适用性检查10 .结论计数培养基适用性检查验证方案 STP-V-第2页共6页1.验证目的：细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。本次验证的 目的是确认营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基适合细菌、霉菌及酵母菌数测

2、定。2.参照标准:2010版中国药典二部附录 XI J微生物限度检查法。3.验证 项目：营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查。4.验证小组人员及职责:4.1 验证小组人员:小组人员职务姓名所在部门职务组长魏质量部经理组员钱质量部质量管理员组员袁质量部检验员4.2 验证人员职责及要求4.2.1 按验证方案及相关文件实施验证。4.2.2 认真观察并做好验证原始记录。4.2.3 对实施验证的结果负责。4.3 验证中各部门的职责4.3.1 验证领导组职责4.3.1.1 制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理4.3.1.2 确定验证项目及验证项目负责人。4.3.1.3 负责验证方案的批准工作

3、。4.3.1.4 负责验证资料及结果的审核工作。4.3.1.5 负责验证报告的批准工作。4.3.2 验证工作小组职责4.3.2.1 负责验证方案的起草工作。4.3.2.2 参与验证方案的讨论、确认工作。4.3.2.3 负责验证方案的实施。4.3.2.4 负责验证结果的分析、统计、报告工作。4.3.2.5 参与验证结果的评价工作。计数培养基适用性检查验证方案STP-7第3页共6页4.3,3.1负责公司验证日常管理工作。4.3.3.2 负责验证方案的审核工作。4.3.3.3 负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。4.3.3.4 负责检验仪器及检验方法的验证。4.3.3.5 负责验证中各项检

4、测工作，提供验证的检验记录、检验报告，对验证 过程中的各项检验工作负责。4.3.3.6 负责对验证人员的培训、考核工作。4.3.3.7 负责验证资料和报告的审核工作。4.3.3.8 负责验证文件回收、归档管理工作。5 .合格标准：被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。6 .试验材料：6.1. 被验证产品：营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基6.2. 仪器设备：6.2.1. SYQ-DSX-280B型手提式压力蒸汽灭菌器6.2.2. SW-CJ-2A双人净化工作台6.2.3. XSW-CJ-1A单人净化操作台6.2.4. HZMJ型霉

5、菌培养箱（23,28?）6.2.5. JC303-4 电热恒温培养箱（30,35?）6.2.6. 不锈钢远红外烘箱6.2.7. 101-2A 电热鼓风干燥箱6.2.8. 波炉6.3. 验证用培养基名称生产厂家批号营养琼脂培养基营养肉汤培养基玫瑰红钠琼脂培养基改良马丁培养基改良马丁琼脂培养基营养琼脂对照培养基计数培养基适用性检查验证方案 STP-Y-第4页共6页玫瑰红钠琼脂对照培养基酵母浸出粉陈葡萄糖琼脂培养基6.4. 验证用菌株:（第代）验证菌株 培养基 培养温度 培养时间（小时）大肠埃希菌 营养肉汤30-35? 18-24金黄色葡萄球菌 营养肉汤30-35?1824枯草芽抱杆菌 营养肉汤30

6、35? 18-24白色念珠菌 改良马丁培养基2328? 24-48黑曲霉菌 改良马丁琼脂培养基2328? 57（天）7 .菌液制备7.1. 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、与枯草芽抱杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30,35?培养18,24小时。取经30,35?培养1824小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、与枯草芽抱杆菌营养肉汤新鲜培养物1ml加入到9m10.9%无菌氯化钠溶-6-7液中，10倍稀释至1010约为50100cfu?m1的菌悬液备用。7.2. 接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，于23,28?培养2448小时。取经23,28?培养2448小时的白色念珠菌改良马丁液

7、体培养物1ml加入到9ml0.9%-5无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10约为50100cfu?ml的菌悬液备用。7.3. 接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，于 23,28?培养5,7 天,加入3,5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨脂80的0.9%无菌氯化钠溶液，将抱子洗 脱。然后，用适宜方法吸出抱子悬液至无菌试管内，用含 0.05%(ml/ml)聚山梨脂 80的0.9%无菌氯化钠?§液制成每1ml含抱子数50,100cfu?ml的菌悬液备用。8.菌液计数:(每种菌液接种2个平皿)大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽抱杆菌分别取 1ml接种至营养琼脂培养 基中，置3

8、0,35?培养48小时；白色念珠菌、黑曲霉分别取1ml接种至玫瑰红钠琼 月旨培养基, 置23,28?培养72小时。菌落计数结果(2个平皿计数取平均值)见下表计数培养基适用性检查验证方案 STP Y第5页共6页菌落计数结果(cfu?ml)-5-6-710稀释10稀释10稀释试验次数1 2 3 1 2 3 1 2 3大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽抱杆菌白色念珠菌黑曲霉9 .适用性检查：9.1. 取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌的菌液(50,100cfu/ml)各1ml,分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30,35?培养48小时，计数；取

9、白色念珠菌、黑曲霉菌的菌 液(50,100cfu/ml)各1ml,分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基， 每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置23,28?培养72小时，计数。9.2. 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌的菌液(50,100cfu/ml)各1ml,分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30,35?培养48小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉菌的 菌液(50,100cfu/ml)各1ml,分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂对照培 养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置23,28?培养72小时，计 数。9.3. 结果见附表10 .结论：计数培养基适用性检查验证方案 STP Y第6页共6页附表1:计数培养基适用性检查验证记录试验时间年 月曰完成时间年 月曰供试品组对照培养基组回收率验证菌