作业指导书--医疗器械无菌检测操作指引,直接接种法,薄膜过滤法

1、XXX文件褊虢XXXPage 1 of 8工作指引名称:无菌检测方法操作指引1适用范围Scope适用于对产品及BI的无菌检测及评估.2参考文件Normative reference2.1ISO 11737-2, Sterilization of medical devices Microbiological methods Part 2: Tests of sterilityperformed in the definition, validation and maintenance of a sterilization process2.2ISO 13485 Medical devices

2、Quality management systems Requirements for regulatory purposes2.3中华人民共和国药典2021年版 二部 附录XI H无菌检查法2.4COP093定义Definitions3.1无菌sterile:无存活的微生物.3.2无菌测试test of sterility:开发，确认或重新确认的一部份，确定产品上是否存在活微 生物的技术操作.3.3生物指示剂biological indicator(BI):对特定灭菌过程具有确定抗力的染菌测试系统.3.4样品份额sample item portion(SIP):从产品上取的用于测试的规定局部

3、.4职责Responsibility4.1实验员:具备微生物方面知识，熟悉测试操作，负责产品的测试及报告.4.2实验工程师：熟悉测试，指导实验员测试，检查测11t报告.4.3质量主管/经理:负责审批测试报告.5检测程序Test procedure5.1测试准备5.1.1检测设备A.洁净工作台B.超声清洗机C.细菌过滤器D.生化培养箱E.高压蒸汽灭菌锅制定:XXX确咕日期：2-Mar-19修定版次：2XXX文件褊虢XXXPage 2 of 8工作指引名称:无菌检测方法操作指引5.1.2检测用品A.稀释液，冲洗液:0.1%蛋白陈水溶液，0.9 %NaCl,PH7.0氯化钠-蛋白冻缓冲液；B.营养肉

4、汤或胰蛋白陈大豆肉汤，胰蛋白陈大豆琼脂培养基；C.剪刀，镶子，微孔滤膜0.45叩；D.酒精灯,75%酒精,培养皿，培养缸/管，试管；5.1.3根据检测需要，按规定要求配制好培养基，稀释液和冲洗液；5.1.4将配制好的培养基，稀释液和冲洗液分装到三角瓶中密封并用白纸包住封口，微孔滤膜用水润湿放入培养皿中，剪刀，银子，培养皿，培养缸/管，试管，细菌过滤器不锈钢杯用分别用白纸包好，所有物品经121c高压蒸气灭菌30min;5.1.5超声清洗机和细菌过滤器用75%酒精擦洗干净；5.1.6实验前两小时翻开洁净工作台，无菌室，更衣室的紫外灯进行环境消毒30min,在开启紫外灯时人员必须远离，以免灼伤眼睛和

5、皮肤造成人身伤害；5.1.7所有检测用品，样品由传递窗递入无菌室.5.2测试样品份额SIP的选择:假设验证生物负载在产品上是均匀分布的，SIP可以是该产 品的任何部份，否那么样品应包含能代表所制产品的每种相应材质而随机选取的产品 部位.假设生物负载分布，可以从认为对灭菌工艺最有挑战性的产品部份选取SIP.可在长度，质量,体积或外表积根底上计算SIP:SIP的类型产品类型外表积植入类无渗透吸收型质量粉尘类衣服类植入类可渗透吸收型长度管道类管径 T体积液体奥5.3样品测试前包装应完整，应先用75%酒精对包装外表进行清洁再传入传递窗；5.4在无菌测试前，应先验证测试方法的适用性，以证明所采用的方法适

6、合于样品的无菌 检测,检测方法参照?抑余田菌抑真菌就;5.5方法验证试验可与样品的无菌检测同时进行，或外发至具有微生物检验资质的实验 室进行；5.6阳性对照：应根据样品的特性选择阳性对照菌：制定:XXX确咕日期：2-Mar-19修定版次：2XXX文件褊虢XXXPage 3 of 8工作指引名称:无菌检测方法操作指引5.6.1无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主的样品，以金黄色葡萄球菌为对照菌；5.6.2抗革兰阴性菌为主的样品，以大肠埃希菌为对照菌；5.6.3抗压氧菌的样品，以生抱梭菌为对照菌；5.6.4抗真菌的样品，以白色念珠菌为对照菌；5.6.5阳性对照试验的菌液制备方法同?抑余田菌抑真菌就?；5.

7、6.6加菌量小于100cfu,样品用量同样品的无菌测试每份培养基接种的样品量；5.6.7阳性对照管培养4872小时应生长良好.5.7阴性对照：样品的无菌测试时，应取相应培养基，稀释液，冲洗液同法操作，作为阴性对 照.阴性对照不得有菌生长.5.8无菌测试有以下两种方法：5.8.1直接接种法：将样品直接接种到培养基中或将可生长培养基参加到样品里进行培养，观察是否有菌生长；5.8.2薄膜过滤法：将微生物从样品上移除别离后，再接种到培养基中进行培养，观察是否 有菌生长；5.9直接接种法5.9.1医疗器械的无菌检测方法应首选直接接种法；5.9.2将样品或SIP接种于含有足以浸没样品的适量培养基的无菌容器

8、中直接培养；5.9.3培养基的用量应能浸没整个样品或SIP;5.9.4假设样品无法直接放入容器中，可在灭菌前对产品进行拆分单独包装，或在测试培养 前进行拆分；5.9.5样品放入培养基后可适当的搅拌；5.9.6假设样品具有抑菌作用，可参加适量的无菌中和剂或外表活性剂，或加大每个容器的 培养基用量.5.10薄膜过滤法5.10.1由于某些医疗器械的特性如具有抑细菌抑真菌的作用，而不能选用直接接种法 时，可选择薄膜过滤法；5.10.2在选用薄膜过滤法时应注意洗提技术，洗提能力和操作过程中的污染对测试结 果的影响；5.10.3无菌测试样品的洗提技术应与该样品的生物负载测试技术一致，检测方法可参照品生物H

9、载检测?；制定:XXX确咕日期：2-Mar-19修定版次：2XXX文件褊虢XXXPage 4 of 8工作指引名称:无菌检测方法操作指引5.10.4操作步骤：a将样品包装去除，用无菌银子将样品放入超声清洗机中，如样品过大而无法放 入可将样品进行适当拆分；b将样品浸入含有适量洗脱液的超声清洗机中，参加适量的稀释液和外表活性齐I以洗脱液浸没样品外表为准；c翻开超声清洗机，清洗5min,超声清洗频率不应过高，以免造成微生物死亡；d清洗结束后将样品取出，洗脱液在细菌过滤器上进行过滤，应注意滤膜在使用 前后的完整性；e洗脱液经薄膜过滤后，可用PH7.0气化钠-蛋白冻缓冲液冲洗滤膜，每张滤膜每 次冲洗量为

10、100ml;f过滤完成取出滤膜，将其分成2等份，置于含培养基的容器中，其中一份作阳性 对照用.5.11培养及观察：5.11.1将上述含培养基的容器按规定温度培养，培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长；样品类型A 口加工培疗温度培疗时间火菌产品营养肉汤/胰蛋白陈大豆肉汤30 35 c14天生物指示剂营养肉汤/胰蛋白陈大豆肉汤30 35 c7天5.11.2如在参加样品后或在培养过程中，培养基出现浑浊，培养7天或14天后，不能从外 观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种至同各新鲜培养基中，细菌培 养2大，真菌培养3天，观察接种的同种新鲜培养基是否再出现浑浊，或取培养液 涂片,染色,镜检,判断是

11、否有菌.5.12结果判断5.12.1阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长，否那么试验无效；5.12.2假设样品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判样品符合规定；5.12.3假设样品管中任何一管显浑浊并确证有菌生长，判样品不符合规定，除非能充分证 明试验结果无效，即生长的微生物非样品所含；5.12.4当符合以下至少一个条件时，方可判试验结果无效：a无菌测试所用的设备及环境的微生物监控结果不符合无菌测试的要求；b回忆无菌测试过程，发现有可能引起微生物污染的因素；制定:XXX确咕日期：2-Mar-19修定版次：2XXX文件褊虢XXXPage 5 0f 8工作指引名称:无菌检测方法操作指引

12、c样品管中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌测试中所使用的物品或无菌 操作技术不当引起的.5.12.5测试假设经确认无效，应重试.重试时，重新取同量样品，依法检查，假设无菌生长，判样 品符合规定；假设有菌生长，判样品不符合规定.5.13检测报告编号规那么：5.13.1Sterility Testing Report For Sterile ProductsTL-YY-XXYY:年份XX:流水号5.13.2Biological Indicator Sterility test ReportBI_S_YY-XXXYY:年份XXX:灭菌批流水号6文件保存期限：相关检测报告保存10年.7附录7.1St

13、erility Testing Report For Sterile Products7.2Biological Indicator Sterility test Report制定:XXX确咕日期：2-Mar-19修定版次：2XXX文件褊虢XXXPage 6 of 8工作指引名称:无菌检测方法操作指引附录7.1 Sterility Testing Report For Sterile ProductsSterility Testing Report For Sterile Products(Ref： IS011/37-2； G日15驼阴Report No:Sans e Inlonution.P

14、roduct Lot ND.:SanipieSanipie Qty.:Qty.:SterilzationSterilzation No.:No.:NegativeNegative oortrol:oortrol:SarpinqSarpinq Date:Date:siUve oontrol:S4PTstTst TemperatureTemperature：RH:Mt*diaMediaMedia LolLolNoIncubation Tf?irpe Fai LireIncubnlion Period：ItemsQuantityTeal resultCDncIbisJonNegativeNegati

15、ve ConlrolConlrolPositive ConlTQlSten ec ProductsNote. 1 Qcstr,白：represent have Groaniirn gron： 2. wprcstni no organism grown.Conclusion:TestedTested：CheckedChecked：ApprovedApproved：Date.Date.Date:Date:DateDateMMEB明山E制定:XXX确滥日期：2-Mar-19修定版次：2XXX文件褊虢XXXPage 7 of 8工作指引名称:无菌检测方法操作指引附录7.2 Biological Ind

16、icator Sterility test ReportBiological Indicator Sterility Test Report( (Ref:Ref: I ISO11737-Z*GBSO11737-Z*GB 1 155805580 ) )ReportReport No.No.Bl orcarisrr:B Lot No.：FILill、,LI廿IF川Bl EXDVVtiBtESteriled Bl qusnhK:PDstVECDnzrol 31 quant ty:M M单tjveconutjveconu。!A A归口3 3 qjaitihqjaitih1 1: :resting bn

17、vironmem.i fiHi:Steriliziriiun prudde!rrodcct Lot No.:tefllizanontefllizanon RunRun No.:No.:Tesii ! starbna Cate.oad.oad NumbersNumbers andand CvclcCvclc Number:Number:Incubat-or tcin0crati.rcr jedis/Lot Ko ,incLtiatian period:FTEMFTEMSAMPLESAMPLE Qty.Qty.TESTTEST RESULTRESULTCONCLUSIONCONCLUSIONIpflss/rejecflIpflss/rejecflStenlied BlBl Positive ControlMHim Ne归tve controlNote:Note: 1 1 PositlK.PositlK. lepfesenllepfesenl rwerwe oigaoiga】困T Tgrowngrown, , 2.2. NegafiveNegafive i i印i i 6 6 1 111m m organisnnorganisnn gra*ngra*n. .FINALFINAL CONCLUSIONCONCLUSIO