小鼠染色体染色观察

1、题目：小鼠细胞染色体染色观察Objectives:1. Learn the method of preparation of mouse chromosome from marrow.学习制备从骨髓中制备小鼠染色体的方法。2. Understand the morphology and amount of mouse mitotic.了解小鼠有丝分裂期细胞染色体的形态和数量。二实验原理1. 秋水仙碱，一种生物碱，因最初从百合科植物秋水仙中提取出来，故名，也称秋水仙素。纯秋水仙碱呈黄色针状结晶，熔点157 C。易溶于水、乙醇和氯仿。味苦，有毒。秋水仙碱能抑制有丝分裂， 破坏纺锤体，使染色体停滞在

2、分裂中期。这种由秋水仙碱引起的不正常分裂，称为秋水仙碱有丝分裂。在这样的有丝分裂中，染色体虽然纵裂，但细胞不分裂，不能形成两个子细胞，因而使染色体加倍。2. 现今微丝标记方法分为在细胞中标记微丝和活体细胞中标记微丝。固定细胞中的微丝主要是用带荧光探针的抗体或鬼笔环肽标记， 需要对样品进行 化学固定和膜的通透。活体标记常采用荧光类似 物标记的方法和GFP标记方法。三. 实验材料及设备1. 实验材料：a）秋水仙素稀释液b）小鼠一只c）75mM KCI低渗溶液d）固定液e）Giemas 染液2. 实验设备：a）普通光学显微镜b）载玻片若干，注射器。c）酒精灯d）离心管若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板

3、等四. 实验方法及步骤1. 提前3-4h向小鼠腹腔中注射秋水仙素，然后用引颈法处死 小鼠。2. 完整取出小鼠股骨（胫骨），取出骨骼表面肌肉和其他结缔 组织。3. 将胫骨两端剪开，用注射器吸取适量75mMKCI将骨髓冲洗 到离心管中。4. 低渗处理：用约6ml的75mM KCI在37C下低渗骨髓细胞20mi n。5. 预固定：加入1-2ml新配制的固定液，用吸管混合均匀， 1000r/min离心8分钟6. 固定：吸去上清液，沿离心管壁缓缓加入6ml固定液，立即用吸管吹打成细胞悬液，在室温下静置固定15min。然后，1000r/min离心8分钟。重复该步骤一次。7. 制细胞悬液：吸去上清液，加入

4、0.3-0.5ml固定液，用吸 管吹打成细胞悬液。8. 制片：用吸管吸取上述细胞悬液，在距离载玻片约40cm高 度将适量细胞悬液（根据浓度）滴在在载玻片上，在酒精 灯上威威加热，使载玻片完全干燥。9. 染色：新配置的 Giemsa染液染色10-15min，自来水缓缓 冲洗，干燥。（不要倾倒染色液，避免染色液氧化膜黏附。）10. 镜检：低倍镜下找到处于中期分裂相的染色体，高倍镜油镜下观察。五. 实验结果图1小鼠骨髓干细胞染色体制片 ，100倍光镜下可见被染成紫色的细胞内容物，其中紫色细小棒状的为小鼠染色体，紫色圆球状的为细胞核。染色体分离状况有很大差别，如下图J。查询资料可知 是因为低渗溶液处理

5、的效果不同导致的，可见19对+X+Y共40条染色体。小鼠为雄性。图2不同分离程度的染色体六. 实验讨论1. 实验结论:本实验使用低渗处理技术使小鼠染色体分散良好，再经过Giemas染液充分染色，能清晰观察到小鼠细胞染色体组。观察结果为19对+X+Y共40条染色体。且经过多次观察统计与染色体配 对，该观察结果真实有效。2. 讨论一：根据你对染色体的观察 结果，你所用的小鼠是雌性还是 雄性？观察结果中可见小鼠染色体组中有丫染色体，所以该小鼠为 雄性3. 讨论二：根据你的实验结果，小鼠 有多少条染色体？如何保证你的 数据是真实有效的?根据我的观察结果，小鼠有 40条(20对)染色体。数据有效的证据：

6、(1) 在对玻片上10个以上清晰可见的单个细胞小鼠染色体分布区进行统计，虽然有部分细胞可见染色体数少于40，但没有多于40条的情况发生。可基本排除偶然性造成的影响。(2) 根据染色体的长度、形态和着丝粒位置进行配对， 除性染色 体组差异较大外，其他染色体均可找到它的同源染色体。证明这是一套完整的染色体组。4. 讨论三：假设某病人有血液肿瘤，需要分析其染色体，你 该如何取材制备染色体标本以分析其染色体水平的变化？分析染色体组需要标本保留分裂能力并且处于细胞分裂期，常用的取样部位有骨髓、 外周血淋巴细胞、生殖腺、羊水；考虑到 病人的实际情况，可选用取用外周血淋巴细胞的方法。外周血淋巴细胞在正常条件

7、下不具有有丝分裂的能力，但是在植物凝集素(PHA刺激下，能转变为具有分裂能力的母细胞。实验步骤包括1.抽取静脉血2.置于加入了 PHA的胎牛血清培 养基中培养72h 3.离心、固定、染色等制片步骤。5. 讨论四：在动物中，血液是制备染色体标本的重要材料来 源，但并不是任何情况下都是这样。有的情况下需要用其 他组织来源的细胞制备染色体，请举例说明。制备染色体的关键是能制备处于分裂期的细胞，如果因为种种原因无法从血液中分离到能诱导产生分裂能力的细胞，则需要从其他组织中制备染色体。可能的原因有：(1) 动物没有血液，如线虫动物门，部分软体动物门。(2) 血液中无法诱导出有分裂能力的细胞，如部分昆虫(3) 血液细胞不进行有丝分裂，如蛙的红细胞。七. 参考文献1 DOS REMEDIOS CG, CHHABRA D, KEKIC M, et al. Actin binding proteins: regulation of cytoskeletal microfilam