植物组织培养全过程

1、1蝴蝶兰植物组织培养全过程一实验目的：1掌握植物细胞组织培养的原理和方法；2了解植物组织培养的方法；3学习植物组织培养的原理；4了解不同浓度BA对蝴蝶兰生根的影响；5了解炼苗的作用；6掌握训化的方法步骤；7观察蝴蝶兰组织培养到种植的全过程，并注意其中出现的问题。二实验原理：蝴蝶兰为兰科蝴蝶兰届植物，因花型奇特、色彩艳丽、花期长久而享有“洋 兰皇后”的美誉。蝴蝶兰原产于缅甸、菲律宾、台湾、马来西业、印度尼西业等 热带业洲地区，具有极高的观赏和经济价值，是国际上最具商业价值的四大观赏 热带兰之一。蝴蝶兰届单茎性气生兰，再生能力弱，很难进行分株繁殖，且种子无 胚乳，自然条件下难以萌发，增殖系数低，难

2、以满足日益增长的市场需求。应用植 物组织培养技术进行蝴蝶兰快速繁殖可以缩短繁育周期，获得大量成株，并可以保持优良性状，维护种质资源，是蝴蝶兰快速繁殖的有效途径。在以蝴蝶兰根尖、 茎尖、叶片和花梗芽为外植体诱导原球茎时，由于根尖的诱导率低，摘取茎尖会损 失母株等原因，因此在蝴蝶兰组织培养中根和茎都不是诱导原球茎的理想材料。 而蝴蝶兰叶片和花梗芽作为外植体诱导圆球茎时，其诱导率较高、对母株伤害不 大，是较为理想的外植体材料。三材料与用具:蝴蝶兰的茎尖、1/ 2MS +BA2. 5 mg/L +NAA0. 2mg/L花梗腋芽诱导培养 基、1/ 2 MS+ BA3. 5 mg/L + KT1. 0 m

3、g/L + NAA0. 5 mg/L +椰乳10咐曾殖 培养基、母液、量筒、烧杯、玻璃棒、移液管、无菌水、高压灭菌器、容量瓶、pM式纸、75%酉精、2咖氯酸钠、镶子、解剖刀、超净工作台、95%酉精、穴盘等。四方法与步骤(1)母液的配制根据需要的母液量配制母液，配好后要贴好标签，以防弄错。标签上要注明是什 么母液和母液的稀释倍数。将配好的母液进行储藏，要用的时候可以方便使用。配制培养液时应注意：1在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放 母液的瓶子，2如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰 这种母液，重新进行配制；2用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的

4、母液将量筒 或移液管润洗2次；(2)培养基的配制花梗腋芽诱导培养基为1/ 2MS +BA2. 5 mg/L + NAA0. 2 mg/L增殖培养基为1/ 2 MS + BA3. 5 mg/L + KT1.0 mg/L + NAA0. 5 mg/L +椰乳10 %。3生根培养基为1/ 2MS + BA1.5 mg/L +NAA0. 3 mg/L + 80 g/L香蕉泥以上培 养基 p H 均为 5. 5注意事项:1、配制培养基时要注意母液的倍数，浓度；计算时要仔细不要看错。2、量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。3、 在加热琼脂、制备培养基的过程中，

5、操作者千万不能离开，否则沸 腾的久了，就需要重新称量、制备。4、 调pH用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaO唾液或1 mol/L的 稀盐酸，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用精密的pH试 纸(5.47.0)测培养基的pH,一直到培养基的pH为5.5为止。5、培养基的分装 溶化的培养基应该趁热分装。分装时，先将培养基 倒入烧杯中，然后将烧杯中的培养基倒入培养瓶中。注意不要让培养基沾 到瓶口和瓶壁上，培养基分装完毕后，应及时封盖瓶口。3、在高压灭菌时，要正确使用高压灭菌器。加水时水要没过电热丝，在第一次到108度时要进行放气，让锅里的冷空气放出。之后要将温度保持在121度,时间

6、为20分钟。20分钟后要等到指针为0时，才能打开锅盖。(3)材料消毒与接种1、 切下其带芽茎段，长约2 - 3cm ,用自来水活洗干净，再在75%酉精中浸泡40秒；然后用无菌水活洗一次；再在2%次氯酸钠中浸泡15分钟，浸泡时不断搅 动；再用无菌水活洗两次。2、 在整理活洗材料的同时对超净工作台进行消蠹，消蠹时间为20分钟。3、 消蠹完成后，将茎段置丁超净工作台上，先用75%勺洒精消蠹30s，无菌 水活洗2次。4、 经无菌水冲洗数次，将带芽茎段接种到经设计的不同激素组合的诱导培养 基上。5、接种好后，贴上标签，并将其放到培养室中进行培养。分别在不同培养条件每天光照12 h ,光强1 600Lx

7、,温度25 2C下培养后观察 结果。(4)生根壮苗接种在1/ 2MS +BA2. 5 mg/L + NAA0. 2 mg/L培养基. 上的外植体在培养320 d后开始初步形成原球茎，此时进行第1次转接。接下来较长时间(约40 d)内，原球茎进一步发育完全，此过程也需转接2次。从茎尖培养开始至60 d后观察发现，污染率为零，外植体成活率高达90. 9，原球茎的诱导率为87.6.培 养60 d，转接3次后，将初代培养中未形成原球茎的植株去掉，将诱导生成的 生长较快的原球茎分割成小的组织块。小的组织块经过12个月培养后乂形成原球茎，将其接种在相同的N培养基上进行继代培养。如此反复切割增殖，实 现了原

8、球茎的增殖。此过程需约30 d的时间，其间需要3次转接。实验观察发 现，原球茎的再生能力很强，经过切割后的原球茎在新的培养基上实现了增殖， 不但每个外植体平均分化出3. 4个植株，并且形成3. 4个原球茎，原球茎的形 成率达到100。生根壮苗阶段关键在丁严格筛选激素的种类和浓度，一般需降低培养基的 激素含量，以便形成健壮苗。常用的生长素有IBA(0.31.5mg/L)、NAA(0.10.8mg/L)。添加GA30.1mg/L + NAA0.1mg/L的组合能明显提高生根率，且植株健壮，长势好。蝴蝶兰届热带气生兰，具气生根栽培上要求根部通气良 好。现在蝴蝶兰移栽常用基质有水苔、椰糠、蛇木、树皮等

9、 ，以水苔效果较好。 综上所述，用组培方法快繁蝴蝶兰较传统繁殖方法有3个明显的优点：节省育苗用地；节省繁殖材料，提高繁殖系数；利用茎尖脱蠹培养，挽救因受 病蠹侵染而退化的优良品种，提高质量和欣赏价值。总之，组培快繁技术可大大 提高生产效益和经济效益。(5)炼苗经过长时间的温室培养，必须经过炼苗后才能移栽盆中.炼苗的目的是促使 幼苗适应外界气候环境，使移栽苗的成活率增高。其方法为，在蝴蝶兰成苗时， 移栽前5天左右，在要进行移栽的温室内将封口膜打开1/3左右，使幼苗与空气 有一定接触。2天后，移栽到驯化温室内，使幼苗完全暴露在空气中，要适当遮 阳，避免高温和强光直接照射，3天后即可移栽。移栽时将幼

10、苗取出，放在1000倍的多菌灵水溶液中小心洗去根部的培养基，去掉老叶，放入铺有湿报纸的盒子， 要注意保湿。栽培基质为经过高温消蠹后的苔鲜，用镶子划痕后，火住幼苗根部， 插入至第1轮叶，用手小心压紧，用薄膜覆盖，保持温度在21一25C,相对湿 度60% 80%控制好水分和温度，移栽成活率可达90%以上。(6)洗苗经过炼苗后，还要进行洗苗。洗苗需要用20 C左右的温水，认真活洗2 3遍，保证将培养基等物质冲洗干净。苗洗净后，要晾干。(7)移栽与管理1、栽培基质：由丁兰花大多数都喜润而畏湿，要求通气通风和适当的水分， 因此，基质要用蝴蝶兰的组织培养与快速繁殖能吸水，乂能排水， 既能透气乂有 养分的材

11、料。常用基质有：水苔、泥碳土、椰糠、珍珠岩、木炭等.栽培蝴蝶兰 以水苔为最佳，其成分比例为泥炭薛3/4、珍珠岩和木炭1/4。将基质洗净后， 用洁净温水浸泡1 d,使其充分吸水膨胀，柔软舒展。移苗前轻轻挤出水苔中的 部分水分，以颜色发白为度。2、温度多数洋兰适温为1522 C,而蝴蝶兰的最适温度为2028 C;兰花既怕高 温，乂怕严寒，因此对其温度一定要重视，不宜过高，但也不宜过低。3、光照光照、温度和湿度为兰花生长的三要素，它对兰花生长发育的影响是很重要 的兰花的4需光量也是随种类而异。此外，在兰花的培养中，均需适宜的遮阴。季 节不同，遮阴度也不同，春、秋季需遮50的光，夏天需遮70 9/6的光，而在 冬季则不需遮。.4、水分大多数兰花生丁多雨但排水良好的环境中，故性喜湿润而怕过多的水分滞 留。但不同种类的兰花对水分的需求并不相同， 在栽培时不可混在一起。蝴蝶兰 是一种厚叶的附生兰，具有耐旱的生理特点。对丁这一类兰花，只要水温适宜， 浇灌得法，白天和黄昏浇水都是可以的。浇水应以能湿润根为度，不可多水，即 使是水苔失水发白，也不应急丁浇水。总之，要适合兰花既怕久旱乂忌积水，喜 欢湿润，干而不燥的特性。5、湿度刚出瓶的兰苗对空气湿度的要求较高，一般应控制在8090 9/6以上， 可在浴器上再加上塑料薄膜，其目的是保持湿度。但是，长期高湿对形成壮苗不 利，可逐渐增大覆盖缝