nmh基因转染前后人大细胞肺癌细胞株蛋白质组差异表达研究

1、KAI1KAI1基因在人肺癌细胞株中表达水基因在人肺癌细胞株中表达水平及调控机制的研究平及调控机制的研究 一、研究不同组织学类型的人肺癌细胞株和正常一、研究不同组织学类型的人肺癌细胞株和正常人肺成纤维细胞株人肺成纤维细胞株MRC-5中中KAI1的的mRNA表达表达水平及其差异水平及其差异二、研究不同转移潜能的人大细胞肺癌细胞株中二、研究不同转移潜能的人大细胞肺癌细胞株中KAI1的的mRNA表达水平表达水平,探讨探讨KAI1与与nm23-H1在调在调控肺癌转移中的相互关系控肺癌转移中的相互关系三、研究甲基化抑制剂三、研究甲基化抑制剂5-杂氮脱氧胞苷杂氮脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对肺癌细胞株对

2、肺癌细胞株L9981、GLC-82和和NCI-H460中中KAI1的的mRNA表达水平和体外增殖能力的影响表达水平和体外增殖能力的影响 主要材料与方法主要材料与方法主要实验方法主要实验方法: 实时荧光定量实时荧光定量PCR MTT法绘制细胞生长曲线法绘制细胞生长曲线甲基化抑制剂甲基化抑制剂: 实 验 结 果比较MRC-5与不同组织类型肺癌细胞株间KAI1基因mRNA表达水平1. MRC-5 , 正常人肺成纤维细胞株;2. L9981, 人高转移大细胞肺癌细胞株;3. NL9980,人低转移大细胞肺癌细胞株;4. L9981-nm23-H1-pEGFP,稳定转染nm23-H1的L9981细胞株;

3、5. A549,6. GLC-82,7. A2,8. SPCA-1,肺腺癌细胞株;9. NCI-H460,人大细胞肺癌细胞株;10. SH-77,11. NCI-H446,人小细胞肺癌细胞株;12. LTEP-2,肺腺癌细胞株;13. YTMLC-90,肺鳞癌细胞株; P0.0000.002不同细胞株间KAI1基因表达水平比较的P值表CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP- -2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0

4、000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.

5、0010.0000.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP- -20.0121. MRC-5 , 正常人肺成纤维细胞株;2. L9981, 人高转移大细胞肺癌细胞株;3. NL9980,人低转移大细胞肺癌细胞株;4. L9981-nm23-H1-pEGFP,稳定转染nm23-H1的L9981细胞株;5. A549,6. GLC-82,7. A2,8. SPCA-1,肺腺癌细胞株;9. NCI-H460,人大

6、细胞肺癌细胞株;10. SH-77,11. NCI-H446,人小细胞肺癌细胞株;12. LTEP-2,肺腺癌细胞株; 13. YTMLC-90,肺鳞癌细胞株; 在L9981细胞中转染nm23-H1可显著上调KAI1的mRNA表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP- -2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.00

7、00.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.0000.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.

8、443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP- -20.0121. L9981;2. NL9980;3. L9981-nm23-H1-pEGFP比较L9981细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间KAI1的mRNA表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP- -2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.000

9、0.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.00

10、00.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP- -20.0121.L9981;2. A549;3. GLC-82;4. A2;5. SPCA-1;6. NCI-H460;7. SH-77;8. NCI-H446;9. LTEP-2;10. YTMLC-90 比较NL9980与不同组织学类型的人肺癌细胞株间KAI1的mRNA表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm

11、23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP- -2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A

12、5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.0000.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP- -20.0121. NL9980;2. L9981-nm23-H1-pEGFP;3. A549;4. GLC-82;5. A2;6. SPCA-1;7. NCI-

13、H460;8. SH-77;9. NCI-H446;10. LTEP-2;11. YTMLC-90 比较A549A549细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间KAI1KAI1的mRNAmRNA表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP- -2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.

14、6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.0000.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.

15、0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP- -20.0121.A549;2. GLC-82;3. A2;4. SPCA-1;5. NCI-H460;6. SH-77;7. NCI-H446;8. LTEP-2;9. YTMLC-90 比较GLC-82GLC-82细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间KAI1KAI1的mRNAmRNA表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP- -2YTML

16、C-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.

17、0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.0000.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP- -20.0121.GLC-82;2. A2;3. SPCA-1;4. NCI-H460;5. SH-77;6. NCI-H446;7. LTEP-2;8. YTMLC-90 比较A2A2细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间KAI1KAI1的mRNAmRNA表达水平Celll

18、inesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP- -2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.

19、0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.0000.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP- -20.0121. A2;2. SPCA-1;3. NCI-H460;4. SH-77;5.

20、NCI-H446;6. LTEP-2;7.YTMLC-90比较SPCA-1SPCA-1细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间KAI1KAI1的mRNAmRNA表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP- -2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.00

21、70.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.0000.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-7

22、70.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP- -20.0121. SPCA-1;2. NCI-H460;3. SH-77;4. NCI-H446;5. LTEP-2;6.YTMLC-90比较NCI-H460NCI-H460细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间KAI1KAI1的表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP- -2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.

23、0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.0000

24、.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP- -20.0121. NCI-H460;2. SH-77;3. NCI-H446;4. LTEP-2;5.YTMLC-90比较SH-77SH-77细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间KAI1KAI1的mRNAmRNA表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH

25、-77NCI-H446LTEP- -2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.005

26、0.0780.392GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.0000.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP- -20.0121. SH-77;2. NCI-H446;3. LTEP-2;4.YTMLC-90比较NCI-H446、 LTEP- -2和YTMLC-90细胞株间KAI1的mRNA表达水平CelllinesCell lines

27、L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP- -2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.

28、0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.0000.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP- -20.0121. NCI-H446;2. LTEP-2;3.YTMLC-905-Aza-CdR上调了NCI-H460 和L

29、9981细胞中KAI1的mRNA表达水平1. Control ;2. 2mol/L 5-Aza-CdR ;3. 10mol/L 5-Aza-CdRGroupsNCI-H4605-Aza-CdR(2mol/L)5-Aza-CdR(10mol/L)NCI-H4600.0010.0005-Aza-CdR(2mol/L)0.005NCI-H460NCI-H460和和L9981L9981细胞株对照组与实验组间细胞株对照组与实验组间KAI1KAI1基因表达水平比较的基因表达水平比较的P P值表值表1. Control ;2. 2mol/L 5-Aza-CdR ;3. 10mol/L 5-Aza-CdRGr

30、oupsL99815-Aza-CdR(2mol/L)5-Aza-CdR(10mol/L)L99810.0000.0005-Aza-CdR(2mol/L)0.016NCI-H460 cellsL9981 cells5-Aza-CdR对GLC-82细胞中KAI1的mRNA表达水平无显著影响1. 对照组 ;2. 2mol/L 5-Aza-CdR ;3. 10mol/L 5-Aza-CdRGroupsGLC-825-Aza-CdR(2mol/L)5-Aza-CdR(10mol/L)GLC-820.7241.0005-Aza-dR(2mol/L)0.724GLC-82细胞株对照组与实验组间细胞株对照组与

31、实验组间KAI1基因表达水平比较的基因表达水平比较的P值表值表012345670.00.40.81.21.62.0A570 nm ODNCI-460 cell line t/d 对照组 实验组(5-Aza-CdR/2umol/L) 实验组(5-Aza-CdR/10umol/L)5-Aza-CdR能够抑制人肺癌细胞株能够抑制人肺癌细胞株NCI-H460、L9981的增殖的增殖1234560.00.20.40.60.81.01.21.41.61.82.0A570 nm ODL9981 cell line (t/d) 对照组 实验组(5-Aza-CdR/2mol/L) 实验组(5-Aza-CdR/1

32、0mol/L)01234567890.00.20.40.60.81.01.21.41.61.8A570 nm ODGLC-82 cell line (t/d) 对照组 实验组(5-Aza-CdR/2mol/L) 实验组(5-Aza-CdR/10mol/L)5-Aza-CdR对人肺对人肺癌细胞株癌细胞株GLC-82的的增殖无显著影响增殖无显著影响结结 论论1、不同组织学类型人肺癌细胞株中、不同组织学类型人肺癌细胞株中KAI1基因基因mRNA表达水平均显著低于表达水平均显著低于正常人肺成纤维细胞株正常人肺成纤维细胞株MRC-5;2、不同转移潜能人大细胞肺癌细胞株中、不同转移潜能人大细胞肺癌细胞株中

33、KAI1基因基因mRNA表达水平有明显表达水平有明显差异差异,nm23-H1基因转染能显著上调人高转移大细胞肺癌细胞株中基因转染能显著上调人高转移大细胞肺癌细胞株中KAI1基基因因mRNA表达水平表达水平;3、5-Aza-CdR能显著上调人肺癌细胞株能显著上调人肺癌细胞株L9981和和NCI-H460中中 KAI1基因基因mRNA表达水平表达水平,并能够抑制其体外增殖能力。并能够抑制其体外增殖能力。实 验 结 果比较L9981细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间KAI1的mRNA表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82

34、A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP- -2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.

35、1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.0000.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H4460.0000.037LTEP- -20.0121.L9981;2. A549;3. GLC-82;4. A2;5. SPCA-1;6. NCI-H460;7. SH-77;8. NCI-H446;9. LTEP-2;10.

36、YTMLC-90 比较A549A549细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间KAI1KAI1的mRNAmRNA表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP- -2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.

37、0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.0000.0000.5880.040SPCA-10.0000.0000.1670.0020.443NCI-H4600.0000.0000.0020.000SH-770.0000.0000.000NCI-H446

38、0.0000.037LTEP- -20.0121.A549;2. GLC-82;3. A2;4. SPCA-1;5. NCI-H460;6. SH-77;7. NCI-H446;8. LTEP-2;9. YTMLC-90 比较GLC-82GLC-82细胞与不同组织学类型的人肺癌细胞株间KAI1KAI1的mRNAmRNA表达水平CelllinesCell lines L9981NL9980L9981-nm23-H1A549GLC-82A2SPCA-1NCI-H460SH-77NCI-H446LTEP- -2YTMLC-90MRC-50.0000.0020.0020.0000.0000.0000.

39、0000.0000.0000.0000.0000.000L99810.0000.0000.0000.0000.0020.0000.6510.0000.0000.0070.000NL99800.8920.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0080.0000.000L9981-nm23-H10.0000.0000.0000.0000.0000.0000.0120.0000.000A5490.7170.2110.1110.0000.0000.0050.0780.392GLC-820.3680.0540.0000.0000.0020.1550.227A20.0070.0010.0000.0000.5880.04