饲料分析与质 检-实验指导-2011-LSM

1、饲料分析与饲料质量检测技术课程实验指导饲料分析与质检课程实验教学实验进度安排时 间组 别实 验 内 容样 品学 时10-27实验一饲料中真蛋白质的测定鱼 粉310-28实验二蛋白质溶解度的测定豆 粕2实验三饲料中钙含量的测定鱼 粉310-29实验四饲料中磷含量的测定豆 粕2实验五饲料中植酸磷的测定豆 粕2实验六油脂酸价的测定鱼 油210-30实验七油脂过氧化值的测定鱼 油3实验八饲料离体消化率的测定鱼 粉210-31实验九动物蛋白质掺假的鉴别（显微镜检测技术）鱼 粉4实验十颗粒饲料稳定性、悬浮性测定配合饲料211-1实验十一鱼粉质量的评判待测样品611-2实验十二鱼油品质的评判待测样品4实验十

2、三饲料分析与检测实验室的建制2实验地点：30教学楼102、215注意：1、该实验为开放性实验（每天早中晚以及周末）； 2、每个实验完成后需要及时上交实验原始记录。实验要求：操作规范，仔细观察，认真记录，准确测定，认真分析实验数据。 2014-10-26实验一、饲料中真蛋白质的测定一、实验目的饲料中蛋白质含量是判定饲料营养价值的一项重要指标，饲料中粗蛋白质包括真蛋白质和非蛋白质两部分含氮物质，后者主要包括游离氨基酸、硝酸盐、氨等，故不能反映出饲料蛋白质对动物的真正营养价值。通过对饲料真蛋白的测定，评价饲料原料如鱼粉等是否掺入非蛋白氮，以保证原料的质量和配合饲料的营养质量。真蛋白质，也叫纯蛋白质，

3、是指由氨基酸合成的一类高分子化合物。二、实验原理蛋白质是含氮的有机化合物。蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量可计算得样品之氮含量，再乘以一定的换算系数（6.25），即粗蛋白质含量。含氮量*6.25=蛋白含量蛋白质在一定碱性条件下，能与重金属盐类发生盐析作用而析出沉淀，此沉淀物不溶于热水，而非蛋白氮则易溶于水。用热水洗沉淀，将水溶性含氮物洗去，剩下的沉淀物再用凯氏定氮法测定，得出真蛋白质的含量。2 CH3 CH NH2COOH+13H2SO4 ( NH4)2SO4+6CO2+1

4、2SO2+16H2 O . 消化 (NH4)2SO4+2NaOH 2NH3+2H2O+Na2SO4H3BO3+NH3 NH4HB2O3 .蒸馏NH4HB2O3+HCl NH4Cl+H3BO3 .滴定三、试剂及配制（1）100g/L硫酸铜溶液：10g硫酸铜（CuSO4.5H2O）溶于100mL水中。（2）25g/L氢氧化钠溶液：2.5g氢氧化钠溶于100mL水中。（3）10g/L氯化钡溶液：1g氯化钡（BaCl2.H2O）溶于100mL水中。（4）2mol/L盐酸溶液（5）硼酸吸收液：10g/L硼酸溶液 1000ml，加入1g/L甲基红乙醇溶液7ml，与1g/L溴甲酚绿乙醇溶液 10 ml， 4

5、0 g/LNaOH溶液0.5ml，混合。（6）混合指示液：1g/L甲基红乙醇溶液与5g/L溴甲酚绿乙醇溶液，等体积混合。溴甲酚绿，0.5%乙醇溶液配置： 溴甲酚绿0.125g+25ml乙醇。 甲基红，1%乙醇溶液配置：甲基红0.025g+25ml乙醇。 （7） 盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB/T601制备。 0.02mol/L盐酸标准溶液：1.67ml盐酸，分析纯，注入1000ml蒸馏水中。 0.1mol/L盐酸标准溶液：8.3ml盐酸，分析纯，注入1000ml蒸馏水中。其他试剂同粗蛋白测定相同。四、测定步骤 试样的处理：准确称取试样1g（精确到0.1mg），置于200ml烧杯中，

6、加蒸馏水50ml煮沸，加入100g/L硫酸铜溶液20ml和25g/L氢氧化钠溶液20ml，边加边搅拌，放置1h以上或静置过夜，沉淀物以中速定性滤纸过滤，用60-80热水反复洗涤沉淀5-6次，直至滤液无SO42- 为止（取10g/L氯化钡溶液5滴和2mol/L盐酸1滴检查滤液，至不生成白色沉淀为止）。将沉淀与滤纸包好，放在65烘箱干燥2h。 试液的消化：将烘干的试样连同滤纸一起放入凯氏烧瓶中, 加入硫酸铜0.4g,无水硫酸钾6g, 与试样混匀，再加浓硫酸10ml和2粒玻璃珠，在电炉上消化直至溶液呈透明的蓝绿色。以下操作同粗蛋白质的测定。 空白的测定：除不加试样外，其余操作同粗蛋白质的测定。五、结

7、果计算真蛋白（%）= (V1-V2)×C×0.0140×6.25×100m×V/V 式中：V1滴定试样时所需标准溶液的体积，ml； V2滴定空白时所需标准溶液的体积，ml； C盐酸标准溶液的浓度，mol/L； V试样分解液的总体积，ml； V试样分解液蒸馏用体积，ml； 0.0140每毫克当量氮的克数（1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数）； m：样品的质量（体积），g（ml）；6.25氮换算成蛋白质的平均系数。蛋白质中氮的含量一般为1517.6%，按16%计算乘以6.25即为蛋白质，乳制品为6.38，面粉为5.70，玉米、高粱为6.24，

8、花生为5.46，米为5.95，大豆及其制品为5.71，肉与肉制品为6.25，大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83，芝麻、向日葵为 5.30。实验二、饲料钙的测定（乙二胺四乙酸二钠法）一、实验目的：通过对饲料中钙含量的测定，保证饲料原料和配合饲料的营养质量二、实验原理：将试样中有机物破杯，钙变成溶于水的离子，用三乙醇胺、乙二胺、盐酸羟胺和淀粉溶液消除干扰离子的影响，在碱性溶液中以钙黄绿素为指示剂，用乙二胺四乙酸二钠标准溶液络合滴定钙，可快速测定钙的含量。三、实验试剂 实验用水应符合GB/6682 中三级用水规格，使用试剂除特殊规定外均为分析纯。 盐酸羟胺。 三乙醇胺。 乙二胺。 盐酸水溶液，1+3。

9、 氢氧化钾溶液(200g/L)：称取20g 氢氧化钾溶于100mL 水中。 淀粉溶液(10g/L)：称取1g 可溶性淀粉入200mL 烧杯中，加5mL 水润湿，加95mL 沸水搅拌，煮沸，冷却备用(现用现配)。 孔雀石绿水溶液( 1g/L)。 钙黄绿素-甲基百里香草酚蓝指示剂：0.10g 钙黄绿素与0.10g 甲基麝香草酚蓝与0.03g 百里香酚酞、5g 氯化钾研细混匀，贮存于磨口瓶中备用。 钙标准溶液(0.001g/mL)：称取2.497g 至105110干燥3h 的基准物碳酸钙，溶于40mL 盐酸水溶液(1+3)中，加热赶除二氧化碳，冷却，用水移至1000mL 容量瓶中，稀释至刻度。 乙二

10、胺四乙酸二钠(EDTA)标准滴定溶液：称取3.8gEDTA 入200mL 烧杯中，加200mL水，加热溶解冷却后转至1000mL 容量瓶中，用水稀释刻度。四、测定步骤 称取试样2g5g 于坩埚中，精确至0.0002g，在电炉上小心炭化，再放入高温炉于550 下灼烧3h(或测定粗灰分后连续进行)，在坩埚中加入10mL 盐酸溶液和浓硝酸数滴，小心煮沸，将此溶液转入100mL 容量瓶中，冷却至室温，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。准确移取试料分解液5mL25mL(含钙量2mg25mg)。加50mL 水，加10mL 淀粉溶液、2mL 三乙醇胺、1mL 乙二胺、1 滴孔雀石绿，滴加氢氧化钾溶液至

11、无色，再过量10mL， 加0.1g 盐酸羟胺(每加一种试剂都须摇匀)，加钙黄绿素少许，在黑色背景下立即用EDTA 标准滴定溶液滴定至绿色荧火消失呈现紫红色为滴定终点。同时做空白实验。附：高锰酸钾法草酸铵定量沉淀，用高锰酸钾法间接测定钙的含量。实验步骤包括甲基红指示剂和高锰酸钾标准溶液的配制、标定，饲料的选取和制备，将得到的饲料样本称取3-5g于坩埚中，采用干法将其分解，得到分解液；准确移取分解液10-20ml于烧杯中，加蒸馏水100ml，指示剂2滴，滴加氨水至溶液成橙色。再加盐酸使溶液变成红色，小心煮沸。缓慢加入草酸铵10ml，放置过夜，生成沉淀；滤纸过滤沉淀，将得到的沉淀连同滤纸一起转入原烧

12、杯，加硫酸10ml，蒸馏水50ml，加热，用高锰酸钾标准液滴定，同时进行空白测定。 五、结果计算 X=100T×V0×V2/ (V1×m) 式中：X以质量分数表示的钙含量，%; TEDTA 标准滴定溶液对钙的滴定度，g/mL; V0试样分解液的总体积，mL; V1分取试样分解液的体积，mL; V2试样实际消耗EDTA 标准滴定溶液的体积，mL实验三、饲料磷的测定一、实验目的： 通过对饲料中总磷的测定，保证饲料原料和配合饲料的营养质量。二、实验原理：将试样中的有机物破坏，使磷游离出来，在酸性溶液中，用钒钼酸铵处理，生成黄色的磷钼黄（NH4）3PO4VO3.16MoO

13、3，在波长420nm下进行比色测定。三、实验试剂：钒钼酸铵显色剂：称取偏钒酸铵1.25克，加浓硝酸250毫升。另取钼酸铵25克，加蒸馏水400ml加热溶解，冷却后，将此溶液倒入上溶液，加蒸馏水定容至1000ml，避光保存。磷标准溶液：将磷酸二氢钾在105干燥1小时，在干燥器中冷却后称0.2195克，溶于蒸馏水中，转入1000ml容量瓶中，加浓硝酸3ml，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即成50ug/ml的磷标准溶液。四、 实验步骤1、试样分解（干法）：主要适用于含有有机物的饲料和原料。称取25g试样放入已坩埚中，准确至0.0002g，在电炉上炭化至无烟为止，再放入高温炉中，在550±20温

14、度下灼烧3小时，取出冷却，在坩埚中加入10mL 盐酸溶液和浓硝酸数滴，小心煮沸10分钟，将此溶液转入100mL 容量瓶中，冷却至室温，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。2、标准曲线的绘制：准确移取磷标液（50ug/ml）0、1.0、2.0、5.0、10.0、15.0 mL于50 mL容量瓶中，各加钒钼酸铵显色剂10 mL，用水稀释至刻度，摇匀，放置10分钟以上，以0 mL溶液为参比，用10mm比色池，在420纳米波长下，用分光光度计测定各溶液的吸光度。以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。3、试样的测定：准确移取试样分解液110 ml（含磷量50750微克）于50 ml容量瓶中

15、，加入钒钼酸铵显色剂10 ml，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，放置10分钟以上，以0 mL溶液为参比，用10mm比色池，在420纳米波长下，用分光光度计测得试样分解液的吸光度。用标准曲线查得试样分解液的含磷量。五、结果计算 磷含量（）(a×10-6)/m × V/V1 a：由标准曲线查得的试样分解液磷含量，ug/50 mL；V：试样分解液的总体积，mL；m：试样的质量，gV1：试样测定时移取试样分解液的体积，mL。附 饲料中植酸磷的测定（三氯乙酸法）1、原理试祥用30g/L三氯乙酸作浸提液提取植酸盐，然后加入铁盐使植酸盐生成植酸铁沉淀, 与氢氧化钠反应转化为可溶性植酸鈉和棕色氢

16、氧化铁沉淀，用钼黄法直接测定植酸磷含量。2、试剂（1）30g/L三氯乙酸溶液 （2） 三氯化铁溶液（1ml相当于 2mg铁）：称取三氯化铁（FeCl3.6H2O）0.97g,用30g/L三氯乙酸溶液溶解至100ml，混匀。（3）60g/L氢氧化钠溶液（4）浓硝酸：煮沸去除游离NO2,使其成为无色。（5）硝酸溶液：1+1，V+V,用浓硝酸（4）配制。（6）硝酸溶液：1+3，V+V,用浓硝酸（4）配制。（7）混合酸：硝酸+高氯酸=2+1，V+V（8）显色剂：、100g/L钼酸铵三溶液：称取钼酸铵10克，加入少量水，加热至5060溶解。冷却后，用水稀释至100ml，混匀。B、3g/L偏钒酸铵溶液：称

17、取偏钒酸铵0.3克，溶于50 ml水中，再50 ml硝酸溶液（1+3，V+V）溶解，混匀。使用时，将溶液A缓慢倒入B中，边加边搅拌，然后再加入浓硝酸（煮沸去除NO2）18ml，混匀.（9）磷标准溶液：将磷酸二氢钾在105干燥1小时，在干燥器中冷却后称0.4349克，溶于蒸馏水中，转入1000ml容量瓶中， 用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即成100ug/ml的磷标准溶液。3、 步骤(1)、标准曲线的绘制：准确移取磷标液（100ug/ml）0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 、5.0、6.0、7.0 mL于50 mL容量瓶中，用水稀释至20 mL，各加4 mL硝酸溶液（1+1,V+V）和显色剂

18、10 mL，用水稀释至刻度，摇匀，放置20分钟，以0 mL溶液为参比，用10mm比色池，在420纳米波长下，用分光光度计测定各溶液的吸光度。以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。（2）、试样的测定A：称取试样36g于干燥的250 mL具塞三角瓶中，准确加入30g/L三氯乙酸溶液50 mL，浸泡2h，机械振荡浸提30min，进行过滤。B：准确吸取上层清液10 ml于50 ml离心管中，迅速加入4 ml三氯化铁溶液（1ml相当于 2mgFe2+）,置于沸水浴中加热45min，冷却后3000r/min离心10min，除去上层清液，加入30g/L三氯乙酸溶液2025 mL，进行洗涤（沉淀必须

19、搅散），水浴加热煮沸10 min，冷却后3000r/min离心10min，除去上层清液，如此重复2次，再用2025 mL水洗涤1次。C: 洗涤后的沉淀加入35 mL水及60g/L氢氧化钠溶液3 Ml,摇匀，用水稀释至30 mL左右，置沸水中煮沸30min，趁热用中速定量滤纸过滤，滤液用100mL容量瓶盛接，再用热水6070 mL分数次洗涤沉淀。滤液冷却至室温后定容至刻度。D: 准确吸取510mL滤液于100 mL凯氏烧瓶中，加入混合酸3mL,于电炉上低温消化至冒白烟，使于0.5mL左右溶液为止（切记蒸干）。E：冷却后用30mL水，分数次洗入50mL容量瓶中。然后，加入3 mL硝酸溶液（1+1,

20、V+V）和显色剂10 mL，用水稀释至刻度，摇匀，放置20分钟，以0 mL溶液为参比，用10mm比色池，在420纳米波长下，用分光光度计测定吸光度。4、结果计算 植酸磷含量（）a×50×10-6/m a：由标准曲线查得的含磷含量，ug/50 mL；50：为试样溶液的稀释倍数；m：试样的质量，g实验四、饲料中水溶性氯化物的测定一、实验目的 掌握用莫尔法测定饲料中盐分（氯）含量的原理和方法。二、实验原理 在中性溶液中，Ag+ 能分别与C1- 与CrO42-形成溶解度较小的AgCl白色沉淀和溶解度相对较大的砖红色Ag2CrO4沉淀。因此，在滴入AgNO3标准溶液的过程中；只要溶液

21、中有适量的K2CrO4，首先析出的是溶解度较小的AgCl沉淀，而当快达到等当点，Ag+浓度随溶液中C1-的减少而迅速增加，当增加到Ag2CrO4沉淀所需要的Ag+浓度随溶液中c1-的减少时，便析出Ag2CrO4沉淀，使溶液呈浅砖红色，其反应式如下： 等当点前：Ag+C1- = AgCl(白色) 等当点时：2Ag+CrO42- = Ag2CrO4(砖红色)三、实验设备 瓷坩埚(2530ml)，玻棒，试管，滴定管（棕色），漏斗，容量瓶(250m1)，吸管(1m1)，电炉，移液管（10ml）。四、实验试剂(1) 硝酸银标准溶液，c(AgNO3)=0.02mol/L，称取3.4g 硝酸银溶于1000m

22、L 水中，贮于棕色瓶内。(2) 铬酸钾指示剂：称取10g铬酸钾，溶于100mL水中。五、实验步骤称取试样5-10g,准确至0.001g,于400mL烧杯中，准确加蒸馏水200ml,搅拌15min，放置15min,准确移取上清夜20ml于150mL三角瓶中,加蒸馏水50ml,10%铬酸钾指示剂1ml,用硝酸银溶液滴定,呈现砖红色,且30s不褪色,为终点. 空白试剂 除用蒸馏水10ml代替样本液外，其他同样本液测定。六、结果计算试样中氯化物含量用氯元素的质量分数来表示： NaCl=(V-V0)×C×200×0.05845/(m×20) 式中：m-样品质量，g

23、; V-滴定消耗的硝酸银标准溶液体积，mL; V0-滴定空白液消耗AgNO3ml数；c-硝酸银标准溶液的摩尔浓度，mol/L; 200为试样溶液的总体积；20为滴定时移取的试样溶液体积； 0.05845为与1.00mL 硝酸银标准溶液c(AgNO3)=1.0000mol/L相当的以g表示的氯元素的质量。 所得结果表示至二位小数。实验五 油脂酸价的测定一、试验目的进一步熟悉酸价测定的原理，掌握酸价测定的方法。二、实验原理油脂暴露于空气中一段时间后，在脂肪水解酶或微生物繁殖所产生的酶作用下，部分甘油酯会分解产生游离的脂肪酸，使油脂变质酸败。通过测定油脂中游离脂肪酸含量反映油脂新鲜程度。游离脂肪酸的

24、含量可以用中和1g油脂所需的氢氧化钾mg数，即酸价来表示。通过测定酸价的高低来检验油脂的质量。酸价越小，说明油脂质量越好，新鲜度和精炼程度越好。 典型的测量程序是，将一份分量已知的样品溶于有机溶剂，用浓度已知的氢氧化钾溶液滴定，并以酚酞溶液作为颜色指示剂。酸价可作为油脂变质程度的指标。 油脂中的游离脂肪酸与KOH发生中和反应，从KOH标准溶液消耗量可计算出游离脂肪酸的量，反应式如下： RCOOH+KOH RCOOK+H2O三、实验试剂1、氢氧化钾标准溶液 c（KOH）=0.1mol/L：称取5.61g干燥至恒重的分析纯氢氧化钾溶于100ml蒸馏水（此操作在通风橱中进行）；2、中性乙醚乙醇（2:

25、1）混合溶剂：乙醚和无水乙醇按体积比2:1混合，加入酚酞指示剂数滴，用0.3%氢氧化钾溶液中和至微红色； 3、1% 酚酞指示剂：称取1g酚酞溶于100 mL95%乙醇中。四、操作方法 准确称取油样3g5g，置于烧杯中，加入混合溶剂50ml，振摇溶解（必要时温热），加入酚酞指示剂3滴，用0.1N氢氧化钾标准溶液滴定至淡红色于 0.5min内不褪色为终点。五、计算： 酸价（N×V×56.1）/W 式中： N氢氧化钾的当量浓度； V消耗标准碱溶液的量（ml）； 56.1氢氧化钾的mg当量； W样品的重量（g）实验六 油脂过氧化值的测定一、目的熟悉油质的卫生标准，掌握反映油质酸败指

26、标的测定方法。二、原理油脂氧化过程中，产生的过氧化物为氢过氧化物，氢过氧化物的进一步分解主要有1.烷氧游离基的生成，2.醛、酮、酸、醇的生成，3.丙二醛的生成。因此，测定脂肪中氢过氧化物的量，可以评价脂肪的氧化程度。实验中过氧化值的测定采用碘量法，即在酸性条件下，脂肪中的过氧化值与过量的KI反应生成I2，用Na2S2O3滴定生成的I2，求出每千克油中所含过氧化物的毫摩尔数，称为脂肪的过氧化值（POV）。三、试剂1、饱和碘化钾溶液：称取14g碘化钾，加10ml水溶解，必要时微热加速溶解，冷却后贮于棕色瓶中。现用现配 。2、三氯甲烷冰乙酸混合液：量取40ml三氯甲烷，加60ml冰乙酸，混匀。3、0

27、.02mol/L硫代硫酸钠标准溶液：称取5g硫代硫酸钠（Na2S2O3 5H2O）（或3g无水硫代硫酸钠），溶于1000ml水中，缓缓煮沸10分钟，冷却。放置两周后过滤备用。4、1% 淀粉指示剂：称取可溶性淀粉0.5g，加入少许水调成糊状倒入50ml沸水中调匀，煮沸，现用现配。四、测定步骤精确称取23g混匀的样品 ，置于250ml碘量瓶中，加30ml三氯甲烷冰乙酸混合液；加入1.00ml饱和碘化钾溶液。紧密塞好瓶塞，并轻轻振摇0.5min，然后在暗处放置5min，取出加75ml水，摇匀。立即用硫代硫酸钠标准溶液滴定，至淡黄色时，加1ml淀粉指示剂，继续滴定至蓝色消失为终点。同时作空白试验。五、

28、结果计算X=（V-V0）×N×0.1269/m式中：X样品的过氧化值，%。V样品消耗硫代硫酸钠溶液的体积，ml。V0空白消耗硫代硫酸钠溶液的体积，ml。N硫代硫酸钠标准溶液的麾尔浓度，mol/L。0.12691N硫代硫酸钠1ml相当于碘的克数。油脂新鲜，其过氧化值不应大于0.15%。实验七 油脂TBA值的测定 一、原理油脂受到光、热、空气中氧的作用，发生酸败反应，分解出醛、酸之类的化合物。丙二醛就是分解产物的一种，它能与TBA（硫代巴比妥酸）作用生成粉红色化合物，在532nm波长处有吸收高峰，利用此性质即能测出丙二醛含量，从而推导出油脂酸败的程度。二、试剂2.1TBA水溶液

29、：准确称取TBA0.288g溶于水中，并稀释至100ml（如TBA不易溶解，可加热至全溶澄清，然后稀释至100ml），相当于0.02M；2.2三氯乙酸混合液：准确称取三氯乙酸（分析纯）7.5g及0.1gEDTA，用水溶解，稀释至100ml；2.3氯仿（分析纯）；2.4丙二醛标准溶液：称取0.315g1，1，3，3-四乙氧基丙烷，溶解后稀释至1000ml，此溶液每ml相当于丙二醛100g，置于冰箱内保存。准确吸取10ml，稀释至100ml，此溶液每ml相当于丙二醛10g，备用。三、操作步骤（1）标准曲线的绘制准确吸取每相当于丙二醛10g的标准溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0

30、.6ml置于纳氏比色管中，加水至总体积为5ml，加入5mlTBA溶液，然后按样品测定步骤进行，测得光密度绘制标准曲线。（2）样品测定：准确称取融化均匀的油脂样品30g，置于100ml有盖三角瓶内，加入20ml三氯乙酸混合液，振摇半小时（保持油脂融溶状态，如冷结即在70水浴上略微加热使之融化后继续振摇）用双层滤纸过滤，除去油脂。滤液重复用双层滤纸过滤一次。准确移取上述滤液5ml置于25ml比色管内，加入5mlTBA溶液，混匀，加塞，置于90水浴内保温40min，取出，冷却1h，移入小试管内，离心5min，上清液倾入25ml纳氏比色管中，加入5ml氯仿，摇匀，静置，分层，吸出上清液于532nm波长

31、比色，对照标准曲线得到微克数（同时作空白试验）。4四、计算 丙二醛含量（mg/kg）= C×10×20/5m式中C从标准曲线查得丙二醛的微克数(ug)m-样品质量（g）实验八 挥发性盐基氮（TVB-N）测定反映水产品腐败程度的指标1. 原理挥发性盐基氮是指动物性食品中由于酶和细菌的作用，在腐败过程中，使蛋白质分解而产生氨以及胺类等碱性含氮物质，此类物质具有挥发性，可在37碱性溶液中释出，挥发后吸收于吸收液中，用标准酸滴定，计算含量。2. 试剂(1)1氧化镁。(2) 吸收液：2硼酸溶液。(3)甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：0.2甲基红乙醇溶液1份与0.2溴甲酚绿乙醇溶液5份混合

32、。(4)0.01N盐酸标准溶液。3. 仪器(1)半微量定氮器。(2)微量滴定管：最小分度0.01ml。4.操作方法(1) 样品处理：(鱼品用水冲洗待干后，沿鱼脊椎切开约5cm，再切开两端使两块背肌分别向两侧翻开，取肌肉于研钵中研碎)，称取样品(鱼品或鱼粉）10g于锥形瓶中，加水100ml（V总），振摇、浸渍30min后过滤、滤液待测。(2) 测定：将盛有吸收液20ml并加有混合指示剂56滴，锥形瓶置于冷凝管下端，并使冷凝管下端插入吸收液的液面下。精密吸取上述样品滤液10ml（V取）于蒸馏器反应室内，加1氧化镁10ml，迅速夹紧进样液的胶管，并在进样液的漏斗内加水防漏气，进行蒸馏，由冷凝管出现第

33、一滴冷凝水开始计算，蒸馏57min停止。吸收液用 0.01N盐酸标准溶液滴定。终点呈红色。同时做平行试验与试剂空白试验。2.1.5 计算TVBN（mg100g）（V1V2）× N×14W×（V取/V总）×100 式中：TVB-N挥发性盐基氮，mg100g； V1被测样液消耗盐酸标准溶液的体积，ml； V2试剂空白消耗盐酸标准溶液的体积，ml； N盐酸标准溶液的当量浓度； W样品重量，g； 141N盐酸标准溶液1ml相当氮的毫克数。 挥发性盐基氮是反映水产品腐败程度的指标，这项指标越高，水产品腐败越严重，新鲜程度越低。采用自动凯氏定氮仪代替半微量定氮法用碳酸钾溶液代替氧化镁混悬液，经比较两者无显著性差异，采用仪器法操作简单，快速，且数据准确可靠；采用碳