临床分离产ESBLs大肠埃希菌药敏及结果分析

1、 论文评阅结果： 论文评阅人： 广州医科大学成人高等教育专升本毕业论文论文题目：临床分离产ESBLs大肠埃希菌药敏及结果分析 姓 名：梁颖仪年级专业班：2012级医学检验本科学 号：2012502022论文提交时间：2014年06月目 录摘 要1关键词1第一章 研究背景2第二章 研究对象及方法2.1 材料32.2 方法3第三章 研究结果3-43.1 大肠埃希菌生物学特性33.2 大肠埃希菌在临床标本中分布3-43.3 科室分布43.4 细菌感染产ESBLs及耐药情况.4第四章 讨论5-6第五章 结论6-7参考文献7 摘 要目的：探讨医院临床分离大肠埃希菌的检测及耐药情况,为临床耐药性监测和临床

2、用药提供指导。方法：采用常规方法进行细菌的分离及鉴定;运用VITEK-2 全自动细菌分析仪进行细菌的鉴定及药敏分析。结果：自2014年1 - 6 月分离出320 株大肠埃希菌,产ESBLs 菌229 株,占71.5 % ,非产ESBLs 菌91 株,占28.5 % ,痰中分离96 株,产ESBLs 菌79 株,非产ESBLs 菌17 株,尿中分离129 株,产ESBLs 菌84 株,非产ESBLs 菌45株;产与非产ESBLs 菌株间耐药性具有较大差异,不同来源的菌株对不同的抗菌药物耐药性也表现不同;所有分离菌株可首选哌拉西林/ 他唑巴坦、头孢替坦、美罗培南,亚胺培南,进行治疗。结论：医院产E

3、SBLs 大肠埃希菌耐药性较为严重（71.5%）;医院应加强抗菌药物使用的管理,提高抗菌药物的合理用,降低细菌耐药率的产生。关键词：大肠埃希菌 产超广谱-内酰胺酶 VITEK-2 药敏分析第一章 研究背景作为人类医疗史上一项重大发明，抗生素曾经为人类的健康做出过巨大的贡献。然而时至今日，抗生素滥用却成为当下一大难题，卫生部有关专家更是发出“抗生素毁掉中国一代人”的警示。 抗生素以前被称为抗菌素，事实上它不仅能杀灭细菌而且对霉菌、支原体、 衣原体等其它致病微生物也有良好的抑制和杀灭作用，近年来通常将抗菌素改称为抗生素。抗生素可以是某些微生物生长繁殖过程中产生的一种物质，用于治病的抗生素除由此直接

4、提取外；还有完全用人工合成或部分人工合成的。通俗地讲，抗生素就是用于治疗各种细菌感染或抑制致病微生物感染的药物。中国是抗生素使用大国，也是抗生素生产大国：目前，我国有6000多家药厂，生产各类抗菌药物1000多个品种、数万个产品,年产抗生素原料大约21万吨，出口3万吨，其余自用（包括医疗与农业使用)，人均年消费量138克左右(美国仅13克)。据统计，中国平均每年每人要“挂8瓶水”，远远高于国际上2.5瓶到3.3瓶的水平，而抗生素的使用人均年消费量在138克左右，是美国人的10倍。最常见的抗生素包括青霉素、头孢拉定和头孢曲松等，抗生素滥用对人的健康造成极大威胁。近年来，由于抗生素的广泛应用，新型

5、耐药菌株不断出现，严重的医院感染和细菌耐药性已成为全球关注的公共卫生问题, 严重威胁着病人的健康，同时也造成了卫生资源的浪费。目前,广谱高效的抗菌药物不断的开发和临床广泛的应用,使细菌感染性疾病的治疗取得了很大的进展,与此同时也产生了一些新的耐药菌株。尤其是-内酰胺酶类抗菌药物的大量应用,其选择性压力使革兰阴性杆菌的耐药性更加突出, 给临床治疗带来了新的困难。调查和了解医院感染病原菌分布特征及耐药谱,可以为临床合理使用抗菌药物提供科学的依据。对2014年1-6月的临床分离的大肠埃希菌进行药敏分析，以了解不同来源的大肠埃希菌产ESBLs的耐药性变化。第二章 研究对象及方法2.1 材料2.1.1

6、临床菌株来源 320 株的大肠埃希菌分离自2014 年1-6月,临床送检的各类型标本,包括血液、尿液、痰液、脓液、胸水、腹水、分泌物等。2.1.2药敏纸片与培养基 M-H 培养基和药敏纸片为北京天坛药物生物试剂有限公司的产品。头孢噻肟、头孢他啶、头孢噻肟/ 克拉维酸、头孢他啶/ 克拉维酸纸片由英国Oxoid 公司生产。2.1.3质控菌株 大肠埃希菌A TCC25922 和肺炎克雷伯菌A TCC700603 。2.1.4统计分析 利用VITEK22 全自动细菌分析仪中的数据储存系统的统计软件进行统计。2.2 方法2.2.1菌株培养、鉴定及药敏试验 大肠埃希菌的分离培养、鉴定均严格按照全国临床检验

7、操作规程第3 版进行【1】;药敏试验则采用美国临床实验室标准化研究所(CL SI) 推荐的K-B 法; ESBL s 检测按美国临床实验室标准化委员会(NCCL S) 1999 年版推荐的双纸片协同试验和确证试验进行。2.2.2 ESBL检测 分别测量头孢他啶、头孢噻肟和头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟/克拉维酸的抑菌环直径,其中任意一种抗生素加克拉维酸的抑菌环直径大于不加克拉维酸的抑菌环直径5mm或> 5mm即可确认该试验菌株为产ESBL s菌株。3I第4页第三章 研究结果3.1 大肠埃希菌生物学特性 革兰阴性杆菌，在血平板上35培养18-24小时，呈灰白色菌落，在麦康凯平板上形成不透明，

8、粉红色或者无色菌落，少数呈粘稠状菌落。本菌特征：KSI或KIA为A/A,发酵葡萄糖，乳糖，甘露醇等多种糖类，产酸产气。常规借种KIA,MIA管。3.2大肠埃希菌在临床标本中分布 从临床各类标本中共分离出大肠埃希菌ESBLs+菌株229 株,其中尿液中分离率最高,占36.7 %;痰液和咽拭子中分离率第2位,占34.5 %。见表1 。表1 大肠埃希菌在标本中ESBLs+分布构成比(%)标本株数构成比痰及咽拭子7934.5尿液8436.7脓液、分泌物3716.2胆汁、胸腹水引液198.3血液104.3合计2291003.3 科室分布 呼吸科12株、ICU 16株、泌尿外科68株、普通外科18株、干部

9、病房16株、门诊29株、肿瘤科12株、消化科9株、妇产科2株、儿科13株、骨科9株、胸外科7株。3.4 细菌感染产ESBLs及耐药情况见表2.表2 大肠埃希菌产ESBLs情况及药敏率（%）抗菌药物临床分离菌株(n=229)痰液及咽拭子(n=79)尿液(n=84)氨苄西林/舒巴坦1.621.961.31哌拉西林/他唑巴坦89.2288.9197.62头孢唑林15.840.000.00头孢曲松1.320.000.00头孢他啶3.122.133.62头孢吡肟3.762.464.06头孢替坦89.6588.7694.34氨曲南2.122.431.17亚胺培南86.5292.2195.34环丙沙星8.1

10、28.784.32左氧氟沙星9.238.564.12复方新诺明16.5414.3418.94美罗培南100100100第四章 讨论检测大肠埃希菌是否产生ESBLs 主要是通过CL SI 推荐的双纸片扩散法进行的;另一种方法是仪器通过自带的特殊软件对相关药物的MIC 值进行分析,然后通过专家系统分析,推断出是否产生了ESBLs。使用的VITEK-2 全自动细菌分析仪就属于后者,仪器通过对头孢吡肟、头孢他啶、头孢噻肟及加克拉维酸的MIC 值进行测定,如鉴定的细菌为大肠埃希菌,仪器的高级专家系统(AES) 将根据内定的标准对细菌是否产生了ESBLs 进行判断,如产生了ESBLs ,则仪器的AES 将

11、对药敏结果进行修正,即青霉素类、头孢菌素类和单环类的药敏结果都改为耐药。有文献显示,VITEK-2 全自动细菌分析仪对ESBLs 的检测结果值得信赖,特异性、敏感性分别为99.7%和98.1% 。大肠埃希菌为人体肠道正常菌群,对入侵人体肠道的少量致病菌可起到拮抗作用,能维持肠道菌群的生态平衡。但在人体因长期应用激素、肿瘤化疗、器官移植应用免疫抑制剂、AIDS 等原因导致机体免疫状态低下的情况下;长期大量应用广谱抗菌药物或创伤性医疗操作等情况下;或者改变了寄生部位时可成为机会致病菌,引起人体各部位内源性医院感染【2】。目前,大肠埃希菌已成为医院感染的重要机会致病菌之一。表2 大肠埃希菌产ESBL

12、s情况及药敏率（%）抗菌药物临床分离菌株(n=229)痰液及咽拭子(n=79)尿液(n=84)氨苄西林/舒巴坦1.621.961.31哌拉西林/他唑巴坦89.2288.9197.62头孢唑林15.840.000.00头孢曲松1.320.000.00头孢他啶3.122.133.62头孢吡肟3.762.464.06头孢替坦89.6588.7694.34氨曲南2.122.431.17亚胺培南86.5292.2195.34环丙沙星8.128.784.32左氧氟沙星9.238.564.12复方新诺明16.5414.3418.94美罗培南100100100ESBL s 是常见的广谱-内酰胺酶,其编码基因位

13、于质粒并通过质粒传播。该酶除可水解青霉素类、第一、二代头孢菌素类抗菌药物,还能水解第三代头孢菌素和单环2内酰胺类抗菌药物使之失活。其广谱多药耐药性及在菌株间的传播性已引起全球关注,ESBL s 主要由肠杆菌科细菌产生,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌是产ESBLs 的最重要代表菌种【3、4】。第五章 结论5I第10页本调查中统计发现,2014 年1 - 6 月分离的320 株大肠埃希菌中, 产ESBL s 菌株高达71.56%,远高于先前文献的报道【5、6】。这种耐药性的差别除与地域有关外【7】,与-内酰胺类抗菌药物的过多使用及滥用不无关系。在统计中我们还发现,不同科室分离的大肠埃希菌产ESBL s

14、并不相同,泌尿外科最高。5I第10页所有菌株中,对氨苄西林/ 舒巴坦、头孢唑林、头孢曲松、头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南、环丙沙星、左氧氟沙星、复方新诺明共计9 种抗菌药物的敏感性< 40. 0 % ,故不应凭经验将这些药物作为大肠埃希菌临床感染的治疗。哌拉西林/ 他唑巴坦、头孢替坦、亚胺培南、美罗培南的敏感性> 85. 0 % ,故可选择这些药物进行临床大肠埃希菌感染的治疗,但要注意的是头霉素类(如头孢替坦) 的过多使用容易引起细菌产生头孢菌素酶(AmpC 酶) 。产ESBL s 的菌株中,氨苄西林/ 舒巴坦、头孢唑林、头孢曲松、头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南、环丙沙星、左氧氟沙星敏感性

15、< 10. 0 % ,特别是氨苄西林、头孢唑林、头孢曲松未出现敏感性菌株。产ESBLs 大肠埃希菌是临床感染及治疗中非常头疼的问题,因为该类菌不但对许多抗菌药物具有耐药性,同时也表现为对其他不同作用机制的抗菌药物耐药性也会产生影响；另外,该类菌容易产生其他类型的耐药基因突变,如染色体或质粒介导的AmpC 酶,高水平青霉素酶,碳青酶烯酶等【8】。综上,亚胺培南和美罗培南仍是治疗产ESBL s大肠埃希菌的首选药物,三代头孢菌素类抗生素对于大肠埃希菌感染仍然具有较好的疗效,但随着产ESBLs菌的日益增多,应该从两方面着手控制其感染流行: 严格落实临床抗生素管理规范,对临床抗生素的应用实行监管,

16、减少来自过量或不合理应用抗生素的选择性压力; 研发针对产ESBLs耐药菌的新型抗生素,通过对此类耐药菌耐药机制的研究,寻找新的抗生素作用靶点,防止“无药可救”现象的发生。总之，抗生素类药物有利有弊，我们要正确的认识这种药物的利弊，让它发挥有利的一面，为我们减轻痛苦，为医疗事业继续发光发热。而怎样把握利弊，最关键的，是要把握适度原则。参考文献1 中华人民共和国卫生部医政司. 全国临床检验操作规程M.第3版.南京:东南大学出版社,2006.736-822.2 李智山,周乐翔,赵建忠,等. 大肠埃希菌新的氨基糖苷类修饰酶基因研究J . 中华医院感染学杂志,2007,17(8):914-916.6I第8页3 马越,李锦云,张新妹,等. 2002 年临床常见细菌耐药性监测J . 中华检验医学杂志,2004,27(1):38-45.4 陈慧红,韩立中,余素飞,等. 大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌超广谱2内酰胺酶基因型研究J.中华医院感染学杂志,2008,18(2):160-162.5 陈民钧,王辉. 中国重症监护病房革兰阴性菌耐药性连续7 年监测研究J . 中华医学