艾滋病抗体检测技术免疫印迹法及质量控制黎俊宏学习教案

1、会计学1艾滋病抗体检测技术免疫印迹法及质量控制艾滋病抗体检测技术免疫印迹法及质量控制黎俊宏黎俊宏第一页，编辑于星期日：十九点 三十分。4.3 4.3 补充试验检测策略补充试验检测策略补充试验分为补充试验分为抗体确证抗体确证试验和试验和HIV-1核酸核酸试验。抗体确证试验试验。抗体确证试验包括免疫印迹试剂（包括免疫印迹试剂（WB）和条）和条带带/线性免疫试验（线性免疫试验（RIBA/LIA）， 特定条件下的替代检测（三特定条件下的替代检测（三种酶联免疫试验、三种快速试种酶联免疫试验、三种快速试验或者酶联免疫加快速试验）验或者酶联免疫加快速试验），免疫层析或免疫渗滤试验。，免疫层析或免疫渗滤试验。

2、HIV-1核酸试验包括定性和定量核酸试验包括定性和定量试验。试验。 *两种试剂可以是原有试剂加另一种试剂，两种试剂可以是原有试剂加另一种试剂， 也可以是两种不同试剂。也可以是两种不同试剂。第1页/共68页第二页，编辑于星期日：十九点 三十分。第2页/共68页第三页，编辑于星期日：十九点 三十分。第3页/共68页第四页，编辑于星期日：十九点 三十分。 2 3 1 4LIA 条带免疫试验条带免疫试验RIPA 放射免疫沉淀试验放射免疫沉淀试验IFA 免疫荧光试验免疫荧光试验HIV抗体抗体WB试验具有很高的敏感性和特异性，是国内试验具有很高的敏感性和特异性，是国内HIV抗体确证的金标准。抗体确证的金标

3、准。RIBA/LIA 条线条线/线性免疫试验线性免疫试验第4页/共68页第五页，编辑于星期日：十九点 三十分。及其生物学活性不变。以固相及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。异性目的基因表达的蛋白成分。第5页/共68页第六页，编辑于星期日：十九点 三十分。特异性结合的抗体再通过与带特异性结合的抗体再通过与带有碱性磷酸酶

4、的羊抗人有碱性磷酸酶的羊抗人IgG抗体抗体结合，加入结合，加入BCIP/NBT底物等底物等一系列反应即可显色。一系列反应即可显色。全病毒裂解液电泳得到的膜条全病毒裂解液电泳得到的膜条第6页/共68页第七页，编辑于星期日：十九点 三十分。第7页/共68页第八页，编辑于星期日：十九点 三十分。HIV模型图模型图脂双层膜脂双层膜gp120gp41包膜糖蛋白包膜糖蛋白p24衣壳蛋白衣壳蛋白p17内膜蛋白内膜蛋白p7核衣壳蛋白核衣壳蛋白逆转录酶逆转录酶蛋白酶蛋白酶整合酶整合酶第8页/共68页第九页，编辑于星期日：十九点 三十分。env编码编码 外膜蛋白外膜蛋白gp120 跨膜蛋白跨膜蛋白gp41（包膜蛋

5、白前体（包膜蛋白前体gp160为为gp41聚合体）聚合体）env基因的结构及基因的结构及env蛋白蛋白第9页/共68页第十页，编辑于星期日：十九点 三十分。gag基因的结构及基因的结构及gag蛋白功能蛋白功能 gag基因编码病毒核心蛋白基因编码病毒核心蛋白 前体蛋白前体蛋白p55（p39为为p55的碎的碎片）片）、衣壳蛋白、衣壳蛋白p24、内膜、内膜蛋白蛋白p17第10页/共68页第十一页，编辑于星期日：十九点 三十分。pol基因的结构及基因的结构及pol蛋白蛋白 pol基因编码的酶类基因编码的酶类p66和和p51蛋白为逆转录酶蛋白为逆转录酶p32蛋白则为整合酶蛋白则为整合酶P11蛋白为蛋白酶

6、蛋白为蛋白酶第11页/共68页第十二页，编辑于星期日：十九点 三十分。严格按照试剂盒说明书操作严格按照试剂盒说明书操作严格控制防止样品间的交叉污染严格控制防止样品间的交叉污染第12页/共68页第十三页，编辑于星期日：十九点 三十分。第13页/共68页第十四页，编辑于星期日：十九点 三十分。实验蓝图实验蓝图第14页/共68页第十五页，编辑于星期日：十九点 三十分。实验原始记录实验原始记录第15页/共68页第十六页，编辑于星期日：十九点 三十分。按照试剂盒说明书判定标按照试剂盒说明书判定标准，判断待测样品为阳性、阴准，判断待测样品为阳性、阴性或不确定。性或不确定。第16页/共68页第十七页，编辑于

7、星期日：十九点 三十分。足以判断为阳性足以判断为阳性第17页/共68页第十八页，编辑于星期日：十九点 三十分。第18页/共68页第十九页，编辑于星期日：十九点 三十分。条带条带第19页/共68页第二十页，编辑于星期日：十九点 三十分。第20页/共68页第二十一页，编辑于星期日：十九点 三十分。孕妇第一次确证孕妇第一次确证MSM第一次确证第一次确证第21页/共68页第二十二页，编辑于星期日：十九点 三十分。孕妇孕妇4周后随访确证结果周后随访确证结果MSM4周后随访确证结果周后随访确证结果第22页/共68页第二十三页，编辑于星期日：十九点 三十分。第23页/共68页第二十四页，编辑于星期日：十九点

8、 三十分。第24页/共68页第二十五页，编辑于星期日：十九点 三十分。WBWB法法HIVHIV抗体确证实验质控抗体确证实验质控第25页/共68页第二十六页，编辑于星期日：十九点 三十分。试剂盒内提供的阳性阳性和阴性阴性对照：判断每次实验的对照：判断每次实验的有有效性效性，不能作为室内质控品不能作为室内质控品使使用；每次须有，且只能同用；每次须有，且只能同批号试剂盒用；如无效，批号试剂盒用；如无效，须重做。须重做。非试剂盒组份的外部外部质控品：监控检测的重复性，且须为弱阳性；判断该批临床样品检测的可信性；每次须有每次须有；失控须重做须重做。可买或自制：稳定稳定、无菌无菌、不含影响试剂反应不含影响

9、试剂反应的防腐剂防腐剂。第二章第二章 HIV抗体检测抗体检测第26页/共68页第二十七页，编辑于星期日：十九点 三十分。第27页/共68页第二十八页，编辑于星期日：十九点 三十分。外部质控品？实验操作？不同人员？仪器？（如加样枪？洗板机堵孔？酶标仪未每年校准？）绘制质控图错误？第28页/共68页第二十九页，编辑于星期日：十九点 三十分。第29页/共68页第三十页，编辑于星期日：十九点 三十分。（1）当SI上限和SI下限 n3s值时说明该值已在3s范围之外，属“失控失控”。“即刻法”只能在前20次内使用，超出即可采用L-J质控图方法。 第30页/共68页第三十一页，编辑于星期日：十九点 三十分。

10、质控窗口内的质控带，试剂自带内部过程质控：实验操作全部完成且实验所用材料处于工作状态；清洁的检测区背景是内部阴性过程质控；如未有红色质控带：试剂盒内质控无效，该结果无效，须重做。外部外部质控品可商用或自制质控品：抗体阳性和阴性样品；下列情况需做质控：更换试剂批号、检测人员、包装、试剂厂家。除此之外，建议每个检测日检测一次阳性和阴性质控品；如果日检测量大于50份样品，至少应作2次质控。出现以下问题，提示存在质量隐患，应引起重视：运输包装、内盒或试剂盒的物理损伤；在单包装内存在混杂物质；标签出现错误、缺失或字迹模糊 （特别是产品名称或出产厂家名称，批号和货号，失效期或/和生产日期）；缺失目录；泄漏

11、或污染；不适宜的存放条件；保护包装纸破损或污染；未达到质量控制标准 （阳性/阴性控制结果以及质控条带出现与否等标志）；试剂质量问题须报告省确证中心实验室。第31页/共68页第三十二页，编辑于星期日：十九点 三十分。第32页/共68页第三十三页，编辑于星期日：十九点 三十分。第33页/共68页第三十四页，编辑于星期日：十九点 三十分。第34页/共68页第三十五页，编辑于星期日：十九点 三十分。早期感染带型？（疑似）早期感染带型？（疑似）第35页/共68页第三十六页，编辑于星期日：十九点 三十分。早期感染带型？（疑似）早期感染带型？（疑似）第36页/共68页第三十七页，编辑于星期日：十九点 三十分

12、。第37页/共68页第三十八页，编辑于星期日：十九点 三十分。第38页/共68页第三十九页，编辑于星期日：十九点 三十分。第39页/共68页第四十页，编辑于星期日：十九点 三十分。第40页/共68页第四十一页，编辑于星期日：十九点 三十分。第41页/共68页第四十二页，编辑于星期日：十九点 三十分。急性期急性期无症状期无症状期窗口期窗口期HIV抗原、抗体变化图抗原、抗体变化图Anti-P24Anti-gp41/120(anti-gp36)HIV RNAAnti-Ag1周周 2周周.1月月 2月月.1年年 2年年 3年年.10年年.艾滋病期艾滋病期Anti-Ab第42页/共68页第四十三页，编辑

13、于星期日：十九点 三十分。备注：备注：献血，酶免阴性，核酸阳性。献血，酶免阴性，核酸阳性。检测，酶免阳性，核酸阳性。检测，酶免阳性，核酸阳性。建议仔细询问发生高危行为的时间。建议仔细询问发生高危行为的时间。第43页/共68页第四十四页，编辑于星期日：十九点 三十分。第44页/共68页第四十五页，编辑于星期日：十九点 三十分。第45页/共68页第四十六页，编辑于星期日：十九点 三十分。第46页/共68页第四十七页，编辑于星期日：十九点 三十分。工欲善其事工欲善其事必先利其器必先利其器第47页/共68页第四十八页，编辑于星期日：十九点 三十分。第48页/共68页第四十九页，编辑于星期日：十九点 三

14、十分。第49页/共68页第五十页，编辑于星期日：十九点 三十分。第50页/共68页第五十一页，编辑于星期日：十九点 三十分。第51页/共68页第五十二页，编辑于星期日：十九点 三十分。第52页/共68页第五十三页，编辑于星期日：十九点 三十分。贴壁贴壁第53页/共68页第五十四页，编辑于星期日：十九点 三十分。贴壁贴壁按压至第一停点后，再按压第二停点按压至第一停点后，再按压第二停点，排尽吸头残余液体，排尽吸头残余液体第54页/共68页第五十五页，编辑于星期日：十九点 三十分。第55页/共68页第五十六页，编辑于星期日：十九点 三十分。第56页/共68页第五十七页，编辑于星期日：十九点 三十分。

15、正向加样法正向加样法反向加样法反向加样法第57页/共68页第五十八页，编辑于星期日：十九点 三十分。日本日本WATSON ：低吸附、高精度、无：低吸附、高精度、无RNA酶、无酶、无DNA酶、无热源、加长吸头酶、无热源、加长吸头 、带滤芯已消毒、带滤芯已消毒第58页/共68页第五十九页，编辑于星期日：十九点 三十分。连续可调式移液器不可在无吸头连续可调式移液器不可在无吸头时使用，吸头时使用，吸头有液体有液体时时不可平放不可平放或倒置或倒置。第59页/共68页第六十页，编辑于星期日：十九点 三十分。加样器加样器-注意事项注意事项 第60页/共68页第六十一页，编辑于星期日：十九点 三十分。加样器加

16、样器-注意事项注意事项 第61页/共68页第六十二页，编辑于星期日：十九点 三十分。定期校准定期校准：有资质的服务商提供校准服务，并贴已校准标签。：有资质的服务商提供校准服务，并贴已校准标签。第62页/共68页第六十三页，编辑于星期日：十九点 三十分。AIDSconfirmation laboratory 艾滋病确证实验室第63页/共68页第六十四页，编辑于星期日：十九点 三十分。AIDSconfirmation laboratory 艾滋病确证实验室第64页/共68页第六十五页，编辑于星期日：十九点 三十分。“每一起严重事故的背后，必然有每一起严重事故的背后，必然有2929次轻微事故和次轻微事故和300300起未遂先兆以及起未遂先兆以及10001000起事故隐患。起事故隐患。” 德国人德国人帕布斯帕布斯海恩海恩（德国飞机涡轮机的发明者（德国飞