羊肚菌院创新基金项目申报书上传

1、院创新基金项目申报书项 目 名 称 羊肚菌野生资源采集、分离纯化和出菇试验 项 目 类 别 院创新基金 起 止 年 限 2016-2018 部 门 负 责 人 （签字）项目负责人 （签字）填 报 日期： 2016 年 5 月 8 日 一、 项 目 的 立 题 依 据（1000字以内）说明项目研究、应用的目的、意义以及国内外研究应用概况，产业化需求分析和发展趋势：项目研究、应用的目的、意义： 羊肚菌 ，俗称羊肚子、羊肚菜、阳雀菌、包谷菌，属于子囊菌亚门、盘菌纲、 盘 菌 目 、羊 肚 菌 科、羊肚菌属 ，因其菌盖有不规则的凹陷且多有褶皱，外形似羊肚而得名。羊肚菌肉质鲜美脆嫩，营养和药用价值极高。

2、在保健、制药方面具有广阔的应用前景。作为一种子囊菌，羊肚菌尚未真正实现大面积的人工栽培，其中还有许多科学问题有待解决，如完善准确的遗传多样性，详细明晰的生活史周期，野生采集到仿生栽培到人工栽培的产量稳定问题等，这些都有待进一步探究。本研究对羊肚菌野生资源采集、分离、发菌和出菇试验进行系统实验，奠定生物中心食用菌研究基础，适应目前市场对食用菌发展的需要，为我院食用菌服务于产业化打下基础。国内外研究应用概况： 人类认识羊肚菌已有上百年的历史，对于羊肚菌的人工栽培也做了大量研究工作，其中不乏成功的实验，但是重复性普遍不高，产量不稳定。时至今日，仍然没有大规模人工栽培出现。羊肚菌广泛的自然分布、多样的

3、种类，使得其生长环境有较大的差异，加之生物学特性易受不定因素的影响，这都使羊肚菌的人工栽培困难重重。另一个影响栽培的重要原因是人们对于羊肚菌生活史周期尚未完全明了，这使栽培过程许多人工处理缺乏科学依据。人们对于羊肚菌生长状况已经进行了大量的观察研究，为羊肚菌栽培提供了一定数据支持。总结得出羊肚菌对生长地域并没有严格的要求，除冷热差异较大的地区外一般都能正常生长。羊肚菌仿生栽培已经取得一定的成果。通过设置仿生条件，以消除一些不易考虑到因素的影响，从而为羊肚菌栽培提供便利。一些学者进行了林下羊肚菌栽培技术探索，实验采用改良的土豆培养基制作母种，选择以杨树或桦树为主的针阔叶林作为播种场地，种植羊肚菌

4、获得成功。仿生栽培的优点显而易见，同时，也有不少因素制约着这项技术的推广，通过仿生消除了很多未知的影响因素，但一旦操作出现问题，往往不能及时发现，将给生产带来毁灭性影响，而人们对于仿生栽培研究的最终目的，是要实现羊肚菌的完全人工栽培。美国学者 Ower于 1986 年成功进行了羊肚菌的人工栽培，2004 年，Miller等申请了羊肚菌人工种植的专利 ，其栽培方法的显著特点就是在羊肚菌菌丝生长阶段必须与植物相互作用，才能形成羊肚菌子实体。我国自上世纪 80 年代至今不时有羊肚菌栽培成功的报道。产业化需求分析和发展趋势：羊肚菌是一种食用菌种，其营养价值非常高，深受群众的喜爱，但因为受各种因素的制约

5、，稳产情况不容乐观等，一直制约着羊肚菌行业发展，没有发挥其应有的市场价值。羊肚菌能作为林区的一个特色产业加以开发。第一， 有国家林业政策的支持，出台了一系列非常优惠的政策， 大力支持积极发展后续产业， 这为我们大力发展食用菌种植提供了一个千载难逢的机会。第二、有得天独厚的自然条件。四川林区资源辽阔， 自然条件得天独厚， 非常适宜羊肚菌的生长。第三， 有广阔的市场。羊肚菌在四川、贵州、云南均有生长， 而人工培育开发的还很少，如今羊肚子蘑菇的市场价格是干品每公斤 1000 元。如果我们对羊肚菌进行开发利用， 用科技手段和人工培育使其走下山来， 走进普通人家的餐桌上， 快速抢占市场， 让工薪阶层都能

6、吃到味美、口感好、营养高的菌类， 这样，既发展了林业企业的多种经营， 又为后续产业增加了新项目， 提高了经济效益。国家、集体、个人均受益， 经济效益非常可观， 后续产业前景非常乐观。第五， 有一定的社会效益，减少对森林植被的破坏。羊肚菌的完全人工栽培尚未完全成熟，其中很多影响因素都不确定，还有很多问题需要解决，随着研究的深入，相信完全的人工栽培会取得进展，巨大的生态效益和经济效益也会随之而来。二、项目的技术路线、技术关键及解决措施（800字以内）项目的技术路线：在北川、平武等山区采集野生羊肚菌子实体，室内无菌操作切取部分组织接种于马铃薯培养基中得到羊肚菌菌丝，经过提纯得到母种，经过原种扩繁后接

7、入栽培种培养基，待羊肚菌菌丝长满栽培袋后，接入大棚土壤中做出菇试验。栽培种出菇试验原种菌丝提纯分离羊肚菌菌丝采集野生羊肚菌栽培方法比较菌丝培养基优化原料配方优化栽培料配方优化技术关键及解决措施：接种与培养： 将灭过菌的平板培养基和酒精灯 、尖嘴镊子、打火机一起放入接种箱内，用消毒盒对接种箱内空气进行消毒。 40 min 后，先点燃酒精灯，把尖嘴镊子的尖端部放在酒精灯火焰上烧红，置放一边，冷却待用。将采集的野生食用菌标本用75%的酒精棉球轻擦子实体表面后，用无菌解剖刀纵切菌柄，接着把平板培养基倒置，并倒置着揭开平板培养基，用尖嘴镊子夹一块羊肚菌子实体组织置于培养皿盖的中央，然后倒置着盖上平板培养

8、基， 在接种箱内如此重复多次， 完成多个平板培养基的接种工作。 把接种后的培养皿倒置放入 10的冰箱内培养。连续观察记录。防止感染，获得无杂菌的羊肚菌菌丝。母种培养： 将羊肚菌试管种转接于F1平板中，25培养4 d制成平板菌种，取直径为3 mm的菌块分别接到直径为9 cm的M1、M2和M3平板中央，25培养，每隔12 h观察1次，观测菌丝生长速度，长势，菌核形成时间及大小。每处理5个重复。三、现有工作基础和条件（600字以内） 说明现有的研究开发工作基础、设施及装备状况、技术力量：生物中心组织培养室有20余年的组培历史，有成熟的组织培养技术。现有超净工作台10个，可满足14人同时操作，光培养室

9、300多平方米，摆放光培养架100个，分析天平、灭菌锅、人工气候箱、光照培养箱、纯水仪等设备配备齐全。生物中心现有组织培养技术人员3人，均有着丰富的组织培养、生物技术方面经验，完全能保证项目的顺利完成。四、试验内容、规模及分年度进展（800字以内） 试验内容及规模：收集野生羊肚菌资源2个，室内野生菌丝分离，提纯，研制不同的分离，提纯培养基，接种于母种培养基，母种培养基用麦粒培养基，分别制出原种和栽培种，制出不同的栽培种培养基，比较效果，并作大棚出菇试验。菌种的分离： 采用组织分离法中的子实体分离法对菌株进行组织分离培养:将采集的野生食用菌标本用75%的酒精棉球轻擦子实体表面后，用无菌解剖刀纵切

10、菌柄，用接种针将菌肉小块接入试管斜面PDA培养基上，于培养箱中培养。培养基：分离培养基： 每升用杨树枝、杨树根浸出液200 mL，枝条70 g，滇杨根30 g，水500 mL ，煮沸5 min ，冷却过滤)，葡萄糖10 g，蔗糖5 g，麦芽糖1 g，牛肉膏1 g，酵母膏1 g，KH2PO40.1 g，(NH4)3PO40.5 g，MgSO40.05 g，烟酸2Lg，琼脂20g。母种培养基：M1(/L):麦粒200g，葡萄糖10g，维生素B1 0.1g，琼脂15g。M2(/L):马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g。M3(/L):葡萄糖10g，蔗糖5g，麦芽糖1g，牛肉膏4g，酵母膏4g，

11、KH2PO41g，(NH4)3PO40.5g，MgSO40.5g，维生素B1 0.1g，烟酸2Lg，琼脂15g。原种培养基：Y1:麦粒100% ，含水量55%。Y2:棉子壳70%，木屑25%，麦麸4%，Ca(OH)21%，含水量60%。Y3:木屑70%，秸秆粉25%，麦麸4% ，Ca(OH)21%，含水量60%。Y4:草糠70%，秸秆粉25%，麦麸4%，Ca(OH)21%，含水量60%。栽培料处理：按比例取稻草粉、干大粪、米糠、千鸡粪、麦秸粉、高粱粉、米糠、木屑粉、红薯叶粉、花生饼粉全部组合到一起，倒入粉碎机中粉碎成140目左右的颗粒，取出后按比例加入过磷酸钙、多菌灵、维生素、白糖，然后全部倒

12、入搅拌机中搅拌100分钟取出，按比例加入1:1.5的水拌匀，全部放入发酵池中堆成堆，用塑料布盖紧，压实，发酵72小时即成合格配养料。出菇实验：菌袋定期划线观测菌丝长速，长势、颜色、自溶情况、气生菌丝状况、菌丝满袋和菌核形成时间和菌核大小、数量。腐殖土在0. 10 MPa下灭菌10 min和30 min，冷却后分别覆盖于已长满菌丝的菌袋表面(5 cm厚)，以不覆土的菌袋为对照，做不同的温度、湿度、光照处理，观察菌丝生长情况、菌核形成及变化，最终统计出菇情况。分年度进展：第1阶段 从2016-03-01到2016-12-31预期目标：在北川、平武海拔1500米以上的半阴半阳的潮湿地方寻找到2种以上

13、不同类型的健壮羊肚菌。作为供室内菌丝分离提纯材料。第2阶段 从2017-01-01到2017-05-31 预期目标：研制出适宜的羊肚菌菌丝培养基配方，得到活力强、生长健壮的羊肚菌菌丝。第3阶段 从2017-06-01到2017-12月 预期目标：研制出适宜的母种培养基配方，找到适宜的栽培种培养基配方。第4阶段 2018-01-01到2018-12-30预期目标：出菇试验，完成相关论文，完成项目验收报告及总结。五、经济、技术指标（400字以内）要达到的主要技术经济指标：1、找到比较理想氮羊肚菌菌丝培养基。2、获得纯种羊肚菌菌丝。观察到的现象为：初期为浅灰色、淡黄色或白色，后随菌龄的增加而逐渐加深

14、，经乳黄色、深黄色变化，最后为黄褐色或褐色。幼嫩菌丝有光泽，细直，壁薄质少，分枝少，具横隔，尖端分泌有针尖大的无色露珠。3、筛选出一种低成本的原种培养料配方。4、配制的羊肚菌配养料污染率低、发菌快、发育出的菌棒质量好，菌丝生长浓密，生长力强，接收光度高，防病性能好。5、选出一种培养料费用低廉，材料易取，配方及制备方法简单的栽培料配方。6、出菇实验能顺利长出羊肚菌子实体，生产出的羊肚菌个头大，重量足，生长速度快。7、发表相关论文1-2篇。 六、经费预算 金额单位：万元序号科目名称预算金额预算依据说明1设备费1购一台秸秆粉碎机、一台搅拌机2材料费1购买试验试剂及栽培料添加物3测试化验加工费4燃料动力费5差旅费0.5寻找野生资源、同行业交流