科研论文模版2016

1、论文“页面设置”为上2.5厘米，下2.5厘米，左2.5厘米，右2厘米。页眉1.5厘米，页脚1.7厘米。全文字数不少于8000字。注意模版中的每页的页眉页脚书写及格式。 齐齐哈尔医学院本科学位论文12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯和没食子酸乙酯对乳腺癌细胞增殖的影响论文题目字体为“黑体”字号为“二号”，居中对齐。The effect of 12-deoxyphorbol-13-palmitate and ethyl gallate on the proliferation of breast cancer cells英文标题“小二号”字体，居中对齐；论文中出现的英文内容一律采用“Times New

2、 Roman”字体。 学 生 姓 名： 王永艳院 （系）：药学院 学 生 年 级：2010级 专 业 名 称：药学 指导教师姓名：崔红霞指导教师单位：齐齐哈尔医学院 协助指导教师：苑家鑫、张奇协助导师单位：齐齐哈尔医学院如果有协助指导教师，则保留此项，如果无协助指导教师，则删除。论文提交日期：2014论文中出现的阿拉伯数字一律采用“Times New Roman”字体。 年 6 月 16 日摘要摘要一级标题，黑体，小二号，加粗，居中对齐，段前、段后空一行，1.5倍行距。目的正文内容“左侧缩进2字符”，摘要内容：宋体，小四，1.5倍行距，各句之间的标点符号在中文半角状态下输入。：探讨狼毒大戟中两

3、种单体药物12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯（12-Deoxyphorbol-13-Palmitate,12D-13P)和没食子酸乙酯（EG）对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响。方法：摘要中目的、方法、结果、结论都为宋体，小四，加粗。采用MTT法检测两种单体药物12D-13P和EG对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响，用二甲基亚砜溶解两种药物，并设置无药对照、溶剂对照组、以及5g/ml、10g/ml、20g/ml、40g/ml和80g/ml浓度的药物组，37恒温箱中培养24h后，加入MTT孵育4h后，弃去上清液加入二甲基亚砜，用酶标仪在490nm的波长处测定OD值，计算细胞生长抑制

4、率。结果：与对照组相比，12D-13P作用24h、48h后，10、20、40、80g/ml剂量组明显抑制乳腺癌细胞的生长，差异有显著性(P<0.数字中的点可以使用小键盘中的点进行书写，结果是数据的描述，要进行统计学分析。05)；EG作用24h、48h后，10、20、40、80g/ml剂量组明显抑制乳腺癌细胞的生长，差异有显著性(P<0.01)。结论：“目的”与“结论”内容一致，即：目的研究什么，得到什么结论（参考本文）。狼毒大戟中12D-13P和EG两种单体药物对乳腺癌细胞MDA-MB231的增殖有显著性抑制作用。关键词：狼毒大戟；12D-13P；EG；MTT“关键词”顶格书写，“

5、宋体”“小四”“加粗”。 具体关键词为宋体，小四。关键词之间用中文分号隔开，最后一关键词后不加标点。段前空一行，宋体，小四，1.5倍行距。IAbstractAbstract一级标题，黑体，小二号，加粗，居中对齐，段前、段后空一行，1.5倍行距。Objective: To investigate the effect of 12-deoxyphorbol-13-palmitate (12D-13P) and ethyl gallate (EG), which two kind of monomer come form euphorbia fischeriana, on the prolifera

6、tion of breast cancer cell. Methods: Using the MTT assay the inhibition of 12-deoxyphorbol-13-palmitate and ethyl gallate on breast cancer cells. After dissolving 12D-13P and EG in dimethy sulfoxide, the cell were divided into control group, experimental group(5,10,20,40,80g/ml) and solvent control

7、group, each group set up three samples. To make breast cancer cells incubated at 37 temperature for 24h and 48h. After that, adding MTT and contiue incubateding for 4h, then the liquid were discarded and add dimethy sulfoxide. Detecting the absorbance value with microplate reader on the wavelength 4

8、90nm, then the average inhibition rate can be obtained. Results: MTT assay showed after 24h and 48h, the12D-13P group compare with control group, the concentration(10,20,40,80g/ml) of 12D-13P significantly inhibit the cell MDB-MA-231 proliferation (P<0.05). In contrast to the control group the EG

9、 group the concentration(10,20,40,80g/ml) of EG significantly inhibit the cell MDB-MA-231 proliferation (P<0.01). Conclusion: 12-deoxyphorbol-13-palmitate and ethyl gallate, which two kinds of monomer come form euphorbia fischeriana, can inhibit the proliferation of breast cancer cells.Abstract中出

10、现的英文字体：“小四”，“1.5倍行距”。标点为英文半角，标点后空一格。objective，miethods，results，conclusion都需加粗。切记英文勿使用翻译软件（有道，百度翻译等）直接进行翻译，导致英文语序，结构完全错误。Key words: Euphorbia fischeriana; 12-deoxyphorbol-13-palmitat; ethyl gallate; MTT小四，加粗，1.5倍行距。关键词之间用分号隔开，标点使用英文半角，标点后空一格。顶格书写，段前空一行。II目录目录目录使用黑体，小二，居中对齐。本目录为自动生成目录。可点击右键，“更新域”完成自动更

11、新。目录中，一级标题，例如“前言”，“材料与方法”顶格书写，黑体，小四，加粗。二级标题，“左侧缩进0.5字符”，黑体，小四；三级标题，“左侧缩进1.5字符”，黑体，小四；四级标题，不出现在目录中。目录之间的行距为“1.25倍行距”一级标题，黑体，小二号，加粗，居中对齐，段前、段后空一行，1.5倍行距。前言1文献综述21狼毒大戟的概述21.1狼毒大戟的化学成分研究进展21.2狼毒大戟的药理作用32 MTT法原理53本研究立题依据、意义错误！未定义书签。64本课题主要研究内容错误！未定义书签。6材料与方法671实验材料671.1仪器、设备671.2试药、试剂682研究方法782.1溶液的配制782

12、.2细胞培养792.3MTT法检测12D-13P和EG对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响9103统计学处理910结果与分析10111细胞培养10112 MTT法检测细胞单体药物12D-13P和EG对乳腺癌细胞MDA-MB-321增殖的影响1112讨论1516结论1617参考文献1718致谢1920附录2021IV齐齐哈尔医学院本科学位论文 12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯和没食子酸乙酯对乳腺癌细胞增殖的影响前言一级标题，黑体，小二号，加粗，居中对齐，段前、段后空一行，1.5倍行距。前言部分不超过一页，分成三段叙述，不能出现应用文献1。乳腺癌是目前世界范围妇女最常见的恶性肿瘤，虽然乳腺癌

13、治疗已获得一定成效，使得乳腺癌生存率明显提高，但治疗乳腺癌药物仍然存在耐药及毒副作用大等缺点。此段描述立项依据。 狼毒大戟是是大戟科大戟属植物。近年来研究表明狼毒大戟具有良好的抗肿瘤活性，并从中分离出一系列有药理活性的物质，而引起人们广泛的关注。目前对狼毒大戟抗肿瘤的研究主要集中在萜类物质，如岩大戟内酯B，而对狼毒大戟中其他其他成分研究较少。此段概括性描述针对此项目的国内外研究现状，切记大段文字的描述。 本研究从狼毒大戟中提取分离出的两种单体化合物12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯和没食子酸乙酯，采用MTT法检测两种单体成分对乳腺癌细胞MDB-MA-231细胞增殖的影响，为进一步研发狼毒大戟抗肿

14、瘤作用提供实验依据。此段描述研究内容、研究目的及意义。文献综述一级标题，黑体，小二号，加粗，居中对齐，段前、段后空一行，1.5倍行距。文字不多于全文30%，如全文8000字，文献综述不超过2400字。文献综述内容应与论文内容一致或密切相关。1狼毒大戟的概述二级标题黑体，四号，1.5倍行距。狼毒大戟是大戟科大戟属多年生草本植物，俗称猫眼草。花柱短，杯状总苞，外面无毛。多生于草原干燥丘陵坡、多石砾干山坡及阳坡稀疏林下。主产与我国东北和华北地区，春秋季采挖，主要为根部入药。其味辛、性平、有毒，还有散结、逐水、杀虫的功效，外用于淋巴结核、皮癣、灭蛆。目前在临床上有用其注射液治疗银屑病、牛皮癣及肝癌等恶

15、性肿瘤1参考文献序号，使用上标格式。“Times New Roman”，小四。经过现代西医和中医的大量研究，已经证实其具有良好的肿瘤活性成分。但是目前临床上使用的皆为其粗提取物制剂，因成分复杂副作用较多。1.1狼毒大戟的化学成分研究进展三级标题，黑体，四号，1.5倍行距。狼毒大戟中含有多种类型的化合物，主要为二萜类、正文中出现的标点符号，均使用“宋体”，中文半角。三萜类、蒽醌类、甾类、醇类等化合物。1.1.1狼毒大戟萜类化合物四级标题“黑体”，小四，1.5倍行距狼毒大戟中有比较多的萜类化合物有二萜类和三萜类，二萜类的有松香烷型、异海松烷型和巴豆烷型。1987年，刘桂芳、杨松松等从狼毒大戟根部经

16、提取分离得羽扇豆醇、3-乙酰羽扇豆醇、-谷甾醇。1989年刘桂芳、付玉琴等分离得到岩大戟内酯A(jolkinolideA)、岩大戟内酯B(jolkinolideB)、17-羟基岩大内酯（17-hydroxyjolkinolideB）、狼毒大戟甲素和狼毒大戟乙素。1997年，马晴高等分离得langduinA、12-dexoyphorbol-13-hexadecaonate、boehermone、12-deoxyphorbol-13-acetate。2001年刘文粢等分离得到-香树脂醇乙酸酯和16-hydroxypseudo jolkinolide。2003年马晴高等分离出羽扇豆醇乙酯、羽扇豆酮、

17、8，14-二羟基-13（15）-松香烯-16,12-内酯、langduin D、langduinC、15-diene、13-hydroxy-ent-abiet-8(14)-en-7-one、3，17-dihydroxy-ent-pimara-8(14)、13-deoxyphorba-ldehyde-13-hexadecatate、12-dexoyphorbaldehyde-13-acetate。1.1.2狼毒大戟鞣质类化合物狼毒大戟中分离得到的植物鞣质分为鞣花鞣质和没食子酸鞣质，主要有鞣料云食素、血素H-5、tercatain、3,4,6-三-没食子酰-D-葡萄糖苷、3,4,6-三-没食子酰-

18、葡萄糖、1,3,6-三-O-没食子酰-D-阿洛糖、1,2,6-三-O-没食子酰-D-阿洛糖和1,2,3,6四-O-没食子酰-D-阿洛糖。1.1.3狼毒大戟植物甾醇类19-环羊毛甾酮、-甾醇、胡萝卜甙、谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇。谷甾醇、豆甾醇和菜油甾醇有7-羟基、7-羟基、7-O的衍生物，有研究显示7-羟基-菜油甾醇有较好的抗肿瘤活性，7-羟基-豆甾醇也有一定活性。1.1.4狼毒大戟的其它化学成分蒽醌类有大黄素甲醚；苯乙酮类有2,4-二羟基-6-甲氧基-3-甲基苯乙酮、3，3-二乙酰基-4,4-二甲氧基-2,2，6,6-四羟基二苯乙酮、狼毒甲素、狼毒乙素；挥发油类中主要含7,10-十八二烯酸甲酯

19、、十六碳酸乙酯、3，7,11-三甲基-14-丙基-十四环烯、狼毒大酮、2,6-二甲基-9-异丙基烯基-1,5-十四烷烯，其它成分为少量的烯烃、烷烃和萜类化合物。1.2狼毒大戟的药理作用1.2.1狼毒大戟的抗菌抗病毒作用赵奎君，徐国钧等人对12种狼毒类中药的乙醉提取物进行了结核杆菌的体外抑菌试验，实验结果表明，12种狼毒均有不同程度的抑菌作用，其中以狼毒大戟根、大狼毒根的抑菌作用最强。赵奎君等人对毒大戟根的水、甲醇、醋酸乙酯、氯仿、石油醚5种提取物进行了结核杆菌的体外抑菌试。结果表明，5种提取物均有不同程度的抑菌作用，其中以石油醚部分抑菌作用最强。王学林等人对狼毒大戟的抗菌、抗病毒研究表明对大肠

20、杆菌、沙门氏杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌、金黄色葡萄杆菌有不同程度的抑制作用，对NDV、CPV病毒有抑制作用。狼毒大戟醇提取液对结核杆菌有明显的抑制作用。1.2.2狼毒大戟的抗白血病活性尚溪瀛等以大戟注射液为实验用药，对L615白血病小鼠进行了体内的药物实验研究，观察了细胞动力学。结果表明，给药组L615白血病小鼠的生存期明显延长，并阻断了S期的癌细胞。姚苹等研究狼毒大戟对病毒性T细胞白血病的抑制作用，结果显示，小鼠给狼毒大戟后，外周血白细胞总数(0.1164±0.0123)×109L比肿瘤对照组(0.2199±0.1099×109L明显降低，P0.01。狼

21、毒药物组的细胞凋亡率（23.60%±2.27%）、(36.40%±4.99%)均明显高于肿瘤对照组（4.6%±0.97），P0.01。在治疗组动物外周血中观察到大量的具有特征性的凋亡细胞和典型的DNA凋亡梯形电泳带。得出结论，狼毒大戟能抑制T淋巴细胞白血病的增殖，并可通过促进肿瘤细胞凋亡。于勇等用L615白血病小鼠作为模型进行中枢神经细胞毒性试验，结果表明用药后的小鼠大脑软脑膜肿瘤细胞的浸润得到明显改善，从弥漫性浸润转化为局灶性，病变得到缓解。实验结果表明狼毒大戟能减缓或部分阻止L615白血病细胞对中枢神经的浸润作用。从狼毒大戟中提取出的单体化合物12-去氧佛波醇

22、13-棕榈酸（12-Deoxyphorbol-13-Palmitate,12D-13P），马力威等用不同浓度的12D-13P处理慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞，电镜下观察细胞形态学变化，MTT法检测药物对K562细胞增殖的抑制作用，甲基纤维素克隆形成实验分析细胞克隆能力，结果显示12D-13P对K562细胞有较明显的抑制作用。1.2.3狼毒大戟的抗肿瘤作用孙志刚等研制的狼毒大戟蛋煎剂可显着抑制肿瘤生长，明显延消化道腺癌术后的缓解期，可防止转移和复发，并使部分患者达到完全缓解。申屠瑾等报告狼毒大戟的水和醇提取物，对小鼠移植性肝癌、肺癌生长有一定抑制作用，腹腔注射，每天每公斤体重给水提取物10

23、g-40g萃取物2.5-20g，连续10天，肿瘤生长抑制率均在30-63.37%。杨宝印等以小鼠肉瘤180和小鼠实体型肝癌为实验瘤株，静脉注射狼毒大戟提取液均显示有一定的抑制率。杨洪武等选用体外建株的人肿瘤细胞系U937(人恶性组织细胞淋巴瘤细胞株)，Hela(人子宫癌细胞株)QRH(肝癌细胞株)，采用MTT比色法，观察了狠毒大戟活性成分W对上述细胞系的影响,结果表明，均有不同程度的抑制作用。没食子酸乙酯（Ethyl gallate, EG）是从狼毒大戟乙酸乙酯层中分离纯化得到的抗肿瘤活性物质。EG是没食子酸衍生物是多种中药的有效活性成分，没食子酸有多种药理作用，如抗氧化、抗细菌、抗病毒、抗寄

24、生虫、抗肿瘤等作用。简白羽等对EG进行了体外抗肿瘤研究，通过MTT法检测EG对结肠癌Lovo细胞，人肺癌A549细胞，口腔鳞癌Cal-27细胞生长的影响，结果表明EG对三种肿瘤细胞具有不同程度的增殖抑制作用，呈一定时效和量效关系。1.2.4抗惊厥作用王明正等将狼毒大戟碱性提取液，两种剂量分别腹腔注射给药，可明显对抗小鼠最大电休克惊厥，抗惊厥率分别为53%和63%。也能提高戊四唑、印防己毒素所致惊厥发作和电刺激大鼠皮层运动区诱发惊厥发作的惊厥阈值。刘玉玺等报告72例癫痫患者用狼毒大戟粗提的碱性液治疗后的临床效果，结果总有效率为78%，显效率为42%，有效率为36%。治疗前后患者癫痫的发作次数有明

25、显减少。1.2.5杀虫作用徐德昌等采用狼毒根乙醇提取物，制成0.3%大戟狼毒水剂。用0.3%大狼戟毒水剂原液和100倍液对甘蓝夜盗进行室内杀虫实验，杀虫率分别为100%、80%。2 MTT法原理四甲基偶氮噻唑蓝法简称MTT法，四甲基偶氮噻唑蓝化名3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑嗅盐，呈淡黄色粉末，易被水溶解和透过细胞膜而进入细胞内，活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原，形成难溶性的蓝紫色结晶物甲臜，而死细胞无此功能。该结晶可溶于二甲亚砜（DMSO）、酸性异丙醇等有机溶剂，用DMSO溶解细胞中的甲臜，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定光吸收值。由于结晶物形成

26、的量与细胞数量及代谢活性成比例，因此吸光度的大小可反映细胞的数量及活性。材料与方法一级标题，黑体，小二号，加粗，居中对齐，段前、段后空一行，1.5倍行距。1实验材料1.1仪器、设备SHJ-系列净化工作台苏净集团苏州安泰空气技术有限公司MDF-492超低温冰箱日本三洋公司微量振荡器德国Rosi公司全自动酶分析系统济南安畅医疗设备有限公司恒温培养箱北京泰亚赛福有限公司倒立显微镜上海光密仪器有限公司低温高速离心机北京京立离心机有限公司AE-240型电子天平梅特勒-托利多上海有限公司注射器沈阳奉达医疗器械有限公司移液器北京普析通用仪器有限公司96孔板Coster公司BX-60荧光显微镜日本奥林巴斯株式

27、会社SHJ- 系列净化工作台苏净集团苏州安泰空气技术有限公司MDF-492超低温冰箱日本三洋公司1.2试药、试剂L-15完全培养液Sigma胎牛血清Beijing Solarbio Science &Technology胰蛋白酶NQBB二甲基亚砜（DMSO）重庆东方试剂厂四甲基偶氮唑蓝（MTT）美国Sigma公司磷酸盐缓冲溶液（PBS）博士德生物工程有限公司12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯（12D-13P）齐齐哈尔医学院中药分离提取研究室提供没食子酸乙酯(EG)齐齐哈尔医学院中药分离提取研究室提供2研究方法2.1溶液的配制(1) PBS缓冲液的配

28、制：取一袋PBS粉，溶于500mL双蒸水中，充分搅拌至完全溶解，调节PH至7.4，定容于1000mL的容量瓶中，用滤膜过滤除菌，高压灭菌置4冰箱备用。(2) MTT的配制：取MTT0.5克，溶于100ml的磷酸缓冲液（PBS）中，用0.22m滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4避光保存即可。(3) L-15原始培养基的配制：取一袋L-15呈粉末状的培养基，溶于500ml双蒸水中，搅拌溶解30min，调节PH至7.2，后用1000ml容量瓶定容，过滤，放于4的冰箱中备用。(4) L-15完全培养基的配制：配制含10%胎牛血清完全培养基，取90ml的L-15原始培养基加入10ml的胎牛血清，加入1%的

29、青霉素和链霉素，放4保存备用。(5) 药液的配制：取一定量两种药物溶于DMSO中，用微孔滤膜过滤除菌，用完全培养基稀释至所需浓度。保证药物中DMSO含量低于0.1%。(6) 细胞冻存液的配制：冻存液一般现用现配，取胎牛血清和DMSO按照9：1的比例混匀即可。2.2细胞培养2.2.1进入培养室前操作实验室在使用之前照紫外30min，照完后关掉紫外灯，打开通风橱通风10min。之后便可穿上消毒衣，戴上口罩和手套，手套用75%擦一遍。2.2.2实验前准备用75%的酒精棉球擦拭超净工作台，打开紫外灯进行灭菌30min，之后通风10min即可使用。打开水浴锅加热至37，从冰箱中取出实验所用的PBS、培养

30、基、胰酶于水浴中加热待用。2.2.3细胞复苏冻存的细胞要进行复苏，再培养传代。复苏细胞一般采用快速融化法，以保证细胞外结晶快速融化，以避免慢融化水分渗入细胞内，再次形成胞内结晶损伤细胞。从液氮罐中取出细胞冻存管后，迅速放入37水浴中，快速摇动使其完全融化，然后于超净台中操作将细胞悬液转移至离心管，在800rmin速度下离心5min，弃去上层液，加入适量培养液后接种于培养皿中，置37培养箱静置培养，次日更换一次培养液，继续培养，观察生长情况。2.2.4细胞换液观察培养基颜色、细胞生长密度、确定是否换液。当培养液颜色变黄则确定换液，吸出旧培养液，加入PBS清洗，吸出PBS，清洗1-2遍，后加入胰酶

31、消化细胞，置于倒置显微镜下观察，若胞质回缩，细胞之间不再连成片，细胞间隙变大，形状变圆但还未脱落时，加入完全培养基终止消化。用吸管吹打培养皿底部的细胞至细胞完全脱落，后将细胞悬液吸入离心管中，以800r/min离心5min，弃去上清液，加入完全培养基用吸管吹打混匀细胞，再转移至培养皿中，后放入培养箱中继续培养。2.2.5细胞传代当生长的细胞铺展面积占培养皿底面积的75%以上时需要对细胞进行传代。吸出旧的培养液后，用PBS清洗，再加胰酶消化细胞观察，终止消化后离心，弃上清液加入完全培养基吹打混匀细胞，将细胞悬液分装至提前加有完全培养基的2个培养皿中，轻轻晃摇使细胞均匀分布，后置于培养箱中培养。2

32、.2.6细胞冻存用吸管吸出培养皿中的培养液，加PBS清洗两遍，加入适量胰蛋白酶消化，适时去掉胰蛋白酶，加入1.5ml培养液，用吸管吹打培养皿底部的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。用吸管将细胞悬液加入冻存管中，以1000r/min离心5min后弃去上清液，加入1ml的冻存液，用吸管吹打使细胞均匀。将冻存管置于410min再转移至-20，后放入-80隔夜，再放入液氮中长期储存。2.3MTT法检测12D-13P和EG对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响乳腺癌细胞MDA-MB231单细胞悬液以1×105ml密度每孔200l接种于96孔板中，置于37，培养箱中培养。培养24h细胞贴壁后

33、弃去培养液。加入10l的12D-13P和EG，使其终浓度分别为：5g/ml、10g/ml、20g/ml、40g/ml和80g/ml，实验每组每个剂量设三个平行孔，同时设置一个对照组。培养24h后，每孔加入5mg/ml的MTT20l，继续培养4h后弃去上清液，每孔加入150l的DMSO震荡10min，用酶标仪在490nm处检测吸光度值，取各重复孔的吸光度值的平均值，计算细胞生长抑制率。细胞的生长抑制率（%）=（1-实验组平均吸光度值对照组平均吸光度值）×100%3统计学处理数据统计分析采用SPSS18.0统计软件，数据以表示，组间比较采用单因素方差分析进行统计学分析，P0.05为差异有

34、显着性，具有统计学意义。结果与分析一级标题，黑体，小二号，加粗，居中对齐，段前、段后空一行，1.5倍行距。将实验过程稍做描述，再描述结果。1细胞培养不同浓度的12D-13P和EG与MDA-MB-231细胞孵育48小时后，在倒置显微镜下观察细胞形态的变化：空白对照组和溶剂对照组细胞贴壁生长，呈梭形，细胞间连接紧密；而用药组的细胞形态未发生改变，细胞间连接稀松，贴壁细胞数量减少，随着药物浓度的增加，死细胞越来越多。 图1-1空白对照组图1-2溶剂对照组 图1-3 5g/ml图1-4 10g/ml 图1-5 20g/ml 图1-6 40g/ml图1-7 80g/ml图1 12D-13P和EG对MDA

35、-MB-231细胞形态学的影响图注：“宋体”加粗，“五号”，1.5倍行距，居中。2 MTT法检测细胞单体药物12D-13P和EG对乳腺癌细胞MDA-MB-321增殖的影响取处于对数生长期且状态良好的细胞，消化收集细胞，细胞计数，调节细胞浓度为7000个/ml接种于96孔板（每个浓度3个复孔，每孔100l），放于培养箱中37静置培养24h，在细胞贴壁后加入不同浓度为5g/ml、10g/ml、20g/ml、40g/ml、80g/ml的药物，培养箱中培养24h，48h后取出，每孔加入20ul 5mg/ml的MTT溶液，培养箱中孵育4h，小心吸取上清，每孔加入200ul DMSO，震荡，用酶标仪测定O

36、D490值和抑制率如下：图2-1细胞培养24小时后 图2-2加入MTT后图2-3孵育4小时后电镜下观察形成蓝紫色甲臜 图2-4加入DMSO后图2 12D-13P和EG对MDA-MB-231细胞增值的影响图注：“宋体”加粗，“五号”，1.5倍行距，居中。表1-1 24h后12D-13P对MDA-MB231细胞的增殖作用表格标题：“宋体”，“五号”，1.5倍行距，居中。数据要有统计学分析。表格居中，使用三线格，上下两条线为一右二分之一磅，首行下面一条线为四分之一磅。表格内汉语为“宋体”，字号均为五号，1.5倍行距，如果内容较多可使用小五号字。浓度（g/ml）空白组溶剂组510204080OD10.

37、30730.3470.38550.34270.27040.24790.189OD20.38890.39190.31740.29420.26880.26070.1882OD30.44320.39450.32310.29620.27190.26480.1969平均值0.37980.37780.3420.3110.2703*0.2578*0.1914*抑制率（%）-9.9518.1128.8132.1249.61注：与空白组比较 *p<0.05表1-2 48h后12D-13P对MDA-MB231细胞的增殖作用浓度（g/ml）空白组溶剂组510204080OD10.34180.34980.319

38、50.24920.11850.06340.0571OD20.34430.34910.33320.31830.14020.05790.0428OD30.37060.36750.32510.26770.14260.070.0362平均值0.35220.35540.32590.2784*0.1337*0.0637*0.0453*抑制率（%）-7.4620.9662.0281.9287.12注：与空白组比较 *p<0.05，* p<0.01表1-3 24h后EG对MDA-MB231细胞的增殖作用浓度（g/ml）空白组溶剂组510204080OD10.51340.61640.50980.42

39、360.39530.27230.2029OD20.63130.56210.50450.49760.42920.26860.1773OD30.5980.52960.47930.45110.40610.28340.191平均值0.58090.59930.49780.45740.4102*0.2747*0.1904*抑制率（%）-14.2921.2529.3852.9967.22注：与空白组比较 *p<0.05，* p<0.01表1-4 48h后EG对MDA-MB231细胞的增殖作用浓度（g/ml）空白组溶剂组510204080OD10.78040.783000.66430.42490.

40、18000.0510.0483OD20.79390.773700.63630.50880.22830.06720.0479OD30.78560.778350.87160.54140.23500.05300.0504平均值0.78660.778350.72410.4917*0.2144*0.0570*0.0488*抑制率（%）-7.9539.4972.7492.7493.78注：与空白组比较 *p<0.05，* p<0.01图 3-1 12D-13P对MDA-MB-231细胞增殖的影响图 3-2 EG对MDB-MA231细胞增殖的影响MTT法实验结果显示，12D-13P和EG对乳腺癌

41、MDA-MB-231细胞的增殖有抑制作用，并且随着药物剂量的增加和时间的延长，这种抑制作用更加明显。讨论一级标题，黑体，小二号，加粗，居中对齐，段前、段后空一行，1.5倍行距。要根据结果进行讨论，不能说与结果无关的内容，讨论时提出优缺点，及本课题的创新之处。乳腺癌是威胁女性健康的主要杀手，近年来研究发展迅速，特别是该病的早期诊断和治疗成效卓著，乳腺癌的生存率明显提高，但是晚期乳腺癌是一种慢性疾病，应已延长生存作为治疗的目的。在许多肿瘤治疗的方法中，药物治疗起着举足轻重的作用，也是重要的肿瘤治疗手段之一，但是抗肿瘤化疗药物产生的不良反应也给患者带来了巨大的痛苦，所以研究探索出高活性的抗肿瘤成分，

42、将成为学者们的研究目的。从天然药物中寻找高效低毒的抗癌药物是目前研究的趋势，我国的中药资源丰富，从众多中药中提取分离出有效活性成分将成为重要的研究，狼毒大戟中含有多类化学成分，具有广泛的药理活性，虽药用价值较高，作为传统中药才，应用历史悠久，尤其在抗肿瘤方面疗效确切。随着狼毒大戟中抗肿瘤活性成分不断被发现，12-脱氧佛波醇-13-棕榈酸酯（12D-13P）是狼毒大戟根部提取、分离并纯化的二萜类单体，二萜类成分普遍具有抗癌、抗菌、抗病毒等功效，没食子酸乙酯（EG）是鞣质类化合物，鞣质具有抗菌、抗病毒、治疗溃疡及烧伤等。MTT法检测两种药物对乳腺癌细胞MDA-MD-231细胞的增殖的影响，是经典的

43、常用的抗肿瘤药物筛选方法，具有简单易操作的特点。从实验结果得出，狼毒大戟中两种单体药物，12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯和没食子酸乙酯对乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞增殖具有明显的抑制作用，且随着作用时间的延长，药物浓度的增大，其抑制作用更明显。本课题创新之处在于首次利用狼毒大戟中12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯和没食子酸乙酯研究其对高转移能力的乳腺癌MDA-MD-231细胞生长的影响，为后续抗转移作用研究提供基础实验数据。不足之处在于二者抗肿瘤作用的分子机制有待于深入研究。结论一级标题，黑体，小二号，加粗，居中对齐，段前、段后空一行，1.5倍行距。简单概括性的描述，不要把结果再一次在这里

44、罗列，比如阐述为1+1=2即可。狼毒大戟中两种单体药物12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯（12D-13P）和没食子酸乙酯（EG）对乳腺癌细胞MDA-MB231的增殖有抑制作用，呈一定的剂量依赖性和时间依赖性。参考文献一级标题，黑体，小二号，加粗，居中对齐，段前、段后空一行，1.5倍行距。1 Che Chuntao. Diterpenes and aromatic compounds from Euphorbia fischerianaJ. Phytochemistry, 1999, 52(1): 117.2 Wang Y B Huang R, Wang H B, et al. Diterpeno

45、ids from the Roots of Euphorbia fischerianaJ. J. Nat. Prod. 2006, 69(6): 967-970.宋体，Times New Roman，五号，1.5倍行距。引用的文献按照引用的顺序排序。序号后空一格，写作者，所有的标点使用英文半角，标点后空一格。每一条参考文献最后用点结束。参考文献的书写按照国家参考文献要求进行书写。M普通图书 C论文集 J期刊文章（见2） D学位论文（见3）R研究报告 S标准 P专利 （见4）A专著、论文集中的析出文献 Z其他未说明的文献类型3 陈金梅. 氟石膏生产早强快硬水泥的试验研究(D). 西安: 西安建筑

46、科学大学, 2000.4 厦门大学. 二烷氨基乙醇羧酸酯的制备方法P. 中国发明专利CN1073429. 1993-06-23.5 刘文粢, 何风雷, 等. 狼毒大戟的化学成分研究J. 中国中药杂志, 2001, 26(3): 180-182.6 刘文粢, 马晴高, 顾熊飞, 等. 狼毒大戟三萜类和酸类化合物的分离鉴定J. 天然产物研究与开发, 2003, 15(5): 396.7 赵奎君, 徐国钧, 金蓉鸾, 等. 狼毒类中药对结核杆菌抗菌作用的比较J. 中国药科大学学报, 1995, 26(2): 122-124.8 赵奎君, 杨隽, 张蒲芝. 5种狼毒大戟提取物对结核杆菌作用的比较J.

47、时珍国医国药, 2000, 11(7): 589-590.9 王学林, 邓旭明, 袁书智, 等.狼毒大戟抗菌抗病毒作用初步研究J. 中兽医医药杂志, 2001, 20(6): 5-7.10 J尚溪瀛, 文成英, 刘丽波. 大戟注射液对L615白血病小鼠体内药物试验及DNA含量的检测J. 中医药学报, 2000, (2): 76.11 姚苹, 崔唏, 刘萍, 等. 狼毒大戟对病毒性T细胞白血病的抑制作用J. 中华微生物和免疫学杂志, 2003, 23(3): 183-187.12 于勇, 卢佃华, 姚苹, 等. 狼毒大戟治疗白血病时的毒性作用研究J. 中国药杂志, 2002, 37, (12): 958-959.13 马立威, 简白羽, 杨莹, 等. 12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯对K562细胞增殖的抑制作用J. 中医药信息, 2014,