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文档简介

1、免疫组化标签：免疫免疫组化免疫组化可以：（1）恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断；（2）确定转移性恶性肿瘤的原发部位；（3）对某类肿瘤进行进一步的病理分型；（4）发现微小转移灶，有助于临床治疗方案的确定，包括手术范围的确定。详细实验方法即用型（Envision）快速酶免疫组化二步法链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结SP法卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法链霉亲和素一生物素一过氧化物酶复合物（SABC ）法实验方法原根据聚合酶技术把辣根过氧化物酶抗鼠或/和抗兔IgG分子结合在多聚酶上形成多理聚物分子，其与待检的抗原特异性的结合后，加入底物显色。实验材料石蜡切PBS柠檬酸盐缓冲液蒸储水增强剂酶标抗

2、鼠兔聚合物苏木素酒精二甲苯树胶盐试剂、试剂盒酸二氨基联苯胺仪器、耗材烘箱微波盒塑料切片架显微镜胶头滴管一、石蜡切片置于67 c烘箱中，烘片2小时，脱蜡至水，用 pH7.4的PBS冲洗三次，每次3分钟（3刈'）。二、取一定量pH=6.0柠檬酸盐缓冲液，加入微波盒中，微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档微波实验步骤 处理10分钟，取出微波盒流水自然泠却，从缓冲液中取出玻片，先用蒸储水冲洗两次，之后用 PBS冲洗2q'。（注：不是所有的抗体都需要微波修复的，视具体情况而定）三、每张切片加1滴3%H2O2,室温下孵育10分钟，以阻断内

3、源性过氧化物酶的活性。PBS冲洗3W。四、除去PBS液，每张切片加1滴相应的第一抗体（相应稀释倍数），室温下孵育2小时。五、PBS冲洗3X5'。除去PBS液，每张切片加1滴聚合物增强剂，室温下孵育 20分钟。PBS冲洗3W。六、除去PBS液，每张切片加1滴酶标抗鼠/兔聚合物，室温下孵育30分钟。PBS冲洗3X5'。七、除去PBS液，每张切片加1滴新鲜配制的 DAB液（二氨基联苯胺），显微镜下观察5分钟。八、苏木素复染，0.1%HCl分化，自来水冲洗，蓝化，切片经梯度酒精脱水干燥,二甲苯透明，中性树胶封固，晾干后观察。收起一、特点1 .在切片加上一抗后，第二抗体标记多聚螯合物酶（HRP）的复合物与一抗结合，在多聚螯合物上有大量的HRP分子，使抗原信号有显著的放大，其敏感性较SABC、SP 法高。其他2 .由于多聚物在体内不存在，又不使用生物素，从而避免了由于生物素引起的非特异性背景染色，背景比 SABC、SP法清晰。3 .辣根过氧化物酶与二抗结合在多聚物上，替代传统方法的二抗、三抗，

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