胆囊良恶性肿瘤中P16蛋白表达及临床意义

1、胆囊良恶性肿瘤中P16 蛋白表达及临床意义【摘要】目的 探讨胆囊良恶性肿瘤中P16 蛋白表达与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化 Envision二步法，检测 46 例胆囊癌， 20 例胆囊腺瘤的表达水平，并用24 例正常胆囊黏膜作对照。结果P16 蛋白在胆囊癌中的阳性表达率 %，明显低于胆囊腺瘤（ %）及正常黏膜（ %），P。在胆囊癌的低分化组低于高、 中分化组， 在 S4S5 期低于 S1S2 期，其组间比较均差异有显著性，P。 结论P16 蛋白在胆囊良恶性病变中表达与胆囊癌的病理分型、分化程度及 Nevin 分期均有密切相关，提示该项指标可作为胆囊良恶性肿瘤的鉴别诊断与胆囊癌的预后判断

2、指标之一。【关键词】胆囊腺瘤；胆囊癌； P16基因；免疫组化To study the expression of p16 protein and discuss its clinicalsignificance in benign and malignant gallbladder tumors【Abstract 】ObjectiveTo discuss the expression of p16protein and its clinical pathological characteristics in the benign andmalignantgallbladdertumors.Me

3、thodsp16 proteinwas detectedin 46cases of gallbladder carcinoma, 20 cases of gallbladder adenoma, 24 cases of normal gallbladder mucosa with immunohistochemical Envision.ResultsThe positive rates of p16 protein were %, % and % ingallbladder carcinoma, gallbladder adenoma, normal gallbladder mucosare

4、spectively. The positive rate of p16 protein in gallbladder carcinomawas higher than those in gallbladderadenomaand normal gallbladdermucosa(P ）。表 1P16 蛋白表达与胆囊良恶性病变关系（略）注：与胆囊黏膜组比较， P2 2P16 蛋白的表达与胆囊癌病理分型及分化程度的关系见表 2，P16 蛋白在胆囊粘液腺癌中阳性表达 %(26), 与胆囊管状腺癌组和乳头状腺癌组比较有明显差异性 (P) 。在低分化癌组的阳性表达比高、中分化癌组低，差异均有显著性 （

5、 P），提示 P16 蛋白表达与胆囊癌组织学类型的恶性程度及分化程度相关。表 2 &nbsp; P16蛋白表达与癌病理分型及分化程度的关系（略）注：P2 3P16 蛋白的表达与Nevin 3分期的关系P16蛋白的表达在胆囊癌S4 S5期中阳性表达 %（4/14 ），与 S3 期和 S1S2期间均有差异性，提示了 P16蛋白表达在胆囊癌的病程晚期表达率更低（P），见表 3。表 3P16 蛋白表达与 Nevin 分期的关系（略）注： P<3 讨论肿瘤的发生发展是一个复杂的多阶段过程，多种基因和多种分子水平变化与之密切相关。不仅同细胞程序性凋亡及肿瘤的发生、发展、浸润、转移等有密切相关

6、，同时也参与细胞间的信息传递，或成为细胞内的第二信使， 并行使辅助分子功能，将细胞外信息传至细胞质及细胞核，调控基因表达。胆囊癌占整个消化系统恶性肿瘤的第五位，与肝外胆管癌相比其临床症状相对稳袭，多表现为腹胀、嗳气等一般消化症状， 腹痛黄疸少见，不易及早发现，且转移发生早，故预后差。与预后有关的因素目前已知的有临床分期、手术切缘、组织学分级、 DNA含量的测定及多种癌基因异常表达等4密切相关。P16 基因是 Serrano 5、Kamb6首次报道的一种新型肿瘤抑癌基因，其完整编码序列包括 2 个内含子（ intron1 和 intron2 ）和 3 个外显子，其中 5端 126bp 区域为外显

7、子 1（exon1）中间 307bp 为外显子 2（exon2）,3 端 11bp 区域为外显子 3（exon3）5。 P16 抑癌基因由 3 个外显子组成，编码为 156 个氨基酸，其作用越来越受人们的重视，它与多种恶性肿瘤的发生、发展有关，故称为多重肿瘤抑制基因 （MTS1），已被国际基因组织命名为 （ DKN2）基因6，7。Kamb等研究发现人类的多种肿瘤及其转化细胞系均存在较高频率的P16 基因缺失。有研究报道 8，把野生型 P16 基因转换给 P16 基因缺失的肿瘤细胞系时肿瘤生长明显受抑。另外，大量文献报道 P16 在 G1期与 CyclinD、CDK4或 CDK6以及 PRB共同

8、形成反馈环调节细胞周期的运转。CDK4或 CDK6与 Cyclin D结合而被激活继而磷酸化 PRB，从而激活转录因子E2F促使 S期特殊的基因表达 9。P16 与Cyclin竞争结合 CDK4和 CDK6，抑制 CDK4和 CDK6的活化，使细胞停滞于G1期 10，从而抑制细胞增生和恶性转化。当 P16 基因缺乏或突变而不能正常表达时，细胞则失去控制发生癌变 5。这种抑癌基因的突变或缺乏，并且广泛存在于各种消化系肿瘤中， 在食管癌、 胃癌、胰腺癌等肿瘤中都检测到 P16 基因的高频突变及缺乏 11，12，在原发性胆管癌中发现 P16 基因突变为 63%，突变率较 P53（1/16 ）和 Kr

9、as 基因（ 1/25 ）高 13。提示在消化系肿瘤的发生、发展中 P16 基因的纯合子缺失比基因突变发挥了更重要的作用11，12。实验结果显示， P16蛋白的表达主要位于胆道系统及其肿瘤细胞核和细胞浆，少部分发现仅有细胞浆着色而核未着色，这与P16蛋白在食管癌、胃癌、胰腺癌细胞着色情况相一致。 本组的胆囊腺瘤和胆囊正常黏膜组中P16 蛋白均有较高的阳性率，而二者间的 P16 蛋白阳性率比较差异无显著性。 在胆囊癌组中 S1 S2 期的 P16蛋白表达无明显下降，直至 S4 S5 期方明显下降。由此提示 P16 基因突变与失活， 并不是发生于胆囊癌的早期。 而是发生在胆囊癌的中晚期。 在胆囊癌

10、组中 P16 蛋白的阳性率明显低于胆囊腺瘤与正常黏膜组的阳性率 （ P）。发生在胆囊外转移，例如肝转移时的 S4S5 期 P16 蛋白阳性表达率低于未发生转移的 S1S2 期及良性病变黏膜组，统计学上差异均有显著（ P），表明 P16 蛋白的低表达与胆囊癌的发生和发展密切相关。 说明 P16 基因的失活是胆囊癌细胞因失控而加速， 尤其在肿瘤发生晚期的这种机制更明显， 故 P16基因可为肿瘤进展的重要指标之一。结果还显示，在低分化胆囊癌组 P16 蛋白表达显著低于高、中分化癌组（P），提示了 P16 阳性表达与胆囊癌的恶性程度及分化相关， 可作为胆囊癌的预后判断指标之一。P16基因在许多肿瘤研究

11、中已得到证实。 国外研究报道显示： P16 基因突变可能与 Nsclc 病例的临床分期有关。国内有报道： P16 基因突变与 Nsclc 的发生发展可能有一定的关系，且与发生在晚期及转移有关 1。显然对胆囊癌中 P16基因蛋白的表达，可为临床诊断及预后判断提供一个有效手段的指标依据。【参考文献】1 王继旺 . 非小细胞肺癌 P16 基因突变的初步研究 . 中国肿瘤杂志， 1999,7 ：546-547.2 高学硕 .P16 蛋白在乳腺癌中表达状况及生物学意义. 实用肿瘤杂志，20XX，15（2）： 93-95.3 Nerin J,Moran TJ,Kays,et of the gallblad

12、der. Staging treatment and prognosis. Cancer,1976,37(2):141.4 回允中译 . 阿克曼外科病理学 . 第八版 . 沈阳：辽宁教育出版社， 1999，959.5 Serrano M,Hannon GT,Beachnew regulatory motitin cell cyclecontrol causing specific inhibtion of cyclin D/,1993,366:704-707.6 Kamb A,Cruis NA,Wearer-Feldllaus J,et cell cycle regulatorpotentia

13、lly involved in genesis of many tumor ,1994,264:436-438.7 Arap W,Niishi Kaua R,Fumari FB,et of the p16/CDKN2 genesuppresses human cell Res,1995,55:1351.8 Nishikawa R,Furnari FB,Lin H,et al. Loss of p16 INR4 expressionis frequent in high grade Res,1995,55:1941-1945.9 Kamb regulators and Genet,1995,11:136-140.10 Xiong Y,Zhang H,Beach rearrangement of the cyclin-dependentkinases is associa