实验十六、丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用

1、实验十六：丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用【实验名称】：丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用09救援一班第三大组李岚宇 36室温：25 C）实验目的：1、学习和掌握竞争性抑制作用的特点。2、观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用。（二）实验原理：化学结构与酶作用的底物结构相似的物质，可与底物竞争结合酶的活性中心，使酶的活性降低甚至丧失，这种抑制作用称为竞争性抑制作用。琥珀酸脱氢酶是机体内参与三羧酸循环的一种重要的脱氢酶，其辅基为FAD，如心肌中的琥珀酸脱氢酶在缺氧的情况下，可使琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下之氢可将蓝色的甲烯蓝还原成无色的甲烯白。这样，便可以显示琥珀酸脱氢酶的作用。丙二酸的

2、化学结构与琥珀酸相似， 它能与琥珀酸竞争而和琥珀酸脱氢酶结合。 若琥珀酸脱氢 酶已与丙二酸结合，则不能再催化琥珀酸脱氢， 这种现象称为竞争性抑制。 如相对地增加琥 珀酸的浓度，则可减轻丙二酸的抑制作用。（三）实验材料与仪器：1器材 大白鼠、手术剪、镊子、磁盘、匀浆器、量筒、烧杯、纱布、滤纸、试管及试管 架、恒温水箱、电热水浴锅2试剂 0.2mol/L琥珀酸溶液、0.02mol/L琥珀酸溶液、0.2mol/L丙二酸溶液、0.02mol/L 丙二酸溶液、1/15mol/L磷酸缓冲液、0.02%甲烯蓝、液体石蜡。（四）实验步骤：1、酶提取液的制备：去大白鼠的肝脏、心脏、肾脏，用冷水洗3次，加入1/1

3、5mol/L磷酸缓冲液pH在7.4。在匀浆器中进行匀浆，然后用纱布过滤，用干净的烧杯收集过滤的备用。2、取试管6支，编号，在按图步骤操作,酶提取液（ml）磷酸 缓冲 液（ml）0.2mol/L琥珀酸（滴）0.02mol/L琥珀酸（滴）0.2mol/L丙二酸溶液（滴）0.02mol/L丙二酸溶液（滴）蒸馏 水（滴）甲烯 蓝（滴）褪色时间（分钟）试管12-8-833分33秒试管22-8-8-35分30秒试管32-8-8-36分04秒试管42-88-37分28秒试管5-28-83无限大试管62-8-83无限大试管6,在酶提取液先在100C的水浴加热煮沸 5min。各管溶液立即混均匀，沿试管壁加入液体

4、石蜡，约0.5cm，各管置于37C的水浴中保温,切勿摇动试管，随时观察比较各试管颜色的变化，记录褪色时间。褪色时间（分钟）【l/【S试管13分33秒0试管25分30秒0.1试管36分04秒1试管47分28秒10实验结果记录:试管5无限大0试管6无限大0表1（六）实验讨论：1、酶提取液中有琥珀酸脱氢酶活性,表1所示，在试管1中没有抑制剂，但琥珀酸依然能脱氢，使得甲烯蓝反应得甲烯白。2、 各管的褪色有明显的时间差别，褪色时间随l/S逐渐增大，而增大。3、丙二酸对琥珀酸脱氢酶抑制作用的类型是竞争性抑制，其特点：最大反应速率 Vmax不变，米氏常数 Km增大，竞争性抑制可以通过增大底物浓度来减轻抑制程度。4、 本实验中5号、6号试管的作用是做对照， 5号试管和1号试管做对照，说明酶 提取液中有琥珀酸脱氢酶的存在， 6号试管中的酶提取液在 100 C的水浴加热煮沸过，所以 琥珀酸脱氢酶是失活的。【注意事项】1、酶提取液的制备应操作迅速，以防止酶活性降低。2、 加入液体石蜡的作用是隔绝空气，以避免空气中的氧气对实验造成影响, 因此加石蜡时试管壁要倾斜，注意不要产生气泡。3、37 C水浴保温过程中，不能摇动试管，避免空气中的氧气接触反应溶液, 使得还原型的甲烯白