高压灭菌锅的验证报告

1、立式压力蒸汽灭菌锅YXQ-LS-75G仪器验证报告验证报告审批表程序审批部门签名日期起草第三B组2013.2.28审核班主任2013.03.11批准系主任-立式压力蒸汽灭菌锅YXQ-LS-75G仪器验证报告目录1. 概述2. 验证目的3. 验证依据及采用文件4. 验证内容4.1. 设计确认4.2. 安装确认4.3. 运行确认4.4. 性能确认5. 再验证周期6. 验证报告审批1. 概述本消毒器是利用高压高温湿热蒸汽杀菌，用于微生物限度检查用培养基、器皿及污染物过期菌种等灭活，灭菌条件设定为121，15min。2. 验证目的通过验证确认立式压力蒸汽灭菌器能达到设备性能指标，满足检验需求。验证结果

2、必须证明生产中采用的灭菌过程对经过灭菌的物品能够保证残存微生物污染的概率或可能性低于10-63. 验证依据及采用文件药品生产验证指南药品生产质量管理规范中华人民共和国药典2010年版二部4. 验证内容4.1设计确认容积：75L 灭菌工作温度：109 135 设定温度时间：4120分钟；设定干燥时间范围：15240；电源：220V ±10V,50Hz； 灭菌加热功率：3.5KW干燥加热功率：1KW额定工作压力：0.212Mpa；额定工作温度：135；工作坏境：温度540;相对湿度： 80%RH;设备安全类别：I类；毛重：60kg(75L)4.2安装确认4.2.1资料档案名称存放处使用说

3、明书实训楼615办公室档案存放处（高压灭菌器）备料清单实训楼615办公室档案存放处（高压灭菌器）合格证实训楼615办公室档案存放处（高压灭菌器）开箱验收记录实训楼615办公室档案存放处（高压灭菌器）设备卡实训楼615办公室档案存放处（高压灭菌器）检验人： 日期：2013.2.28复核人： 日期：2013.2.284.2.2安装确认序号项 目标 准检测结果是否符合要求1立式压力蒸汽灭菌锅YXQ-LS-75GYXQ-LS-75GYYXQ-LS-75G符合2出厂编号有有符合3出厂日期有有符合4数量1台1台符合5装箱单有有符合6合格证有有符合7使用说明书有有符合8第三方质量检验书有有符合9保修卡有有符

4、合10设备完整性、牢固性无缺陷、无松动无缺陷、无松动符合11表面裂痕、焊缝无裂痕、打磨光滑无裂痕、打磨光滑符合12表面划痕无划伤、碰痕无划伤、碰痕符合13各种零部件，备品备件齐备齐备符合14破裂管线无破裂、接口可靠无破裂、接口可靠符合15松脱电线联接紧固、无松脱联接紧固、无松脱符合16电源220V 50HZ220V 50HZ符合17环境温度540；相对湿度80%RH540；相对湿度80%RH符合18安装的环境背景化验室化验室符合检验人： 日期：2013.2.28复核人： 日期：2013.2.284.3运行确认4.3.1仪表校正1. 校正的温度指示、传感器、温度记录仪的读数值与标准电偶指示值之间

5、的误差应+0.5。2. 校正的时间记录仪与标准时间指示装置之间的误差应+1.3. 校正的压力表/真空表与标准表之间的误差应+10%。4.3.2真空度试验用特定的化学指示剂（试纸）检查，化学指示剂（试纸）在运行抽真空程序后，经134暴露3min，其化学指示剂（试纸）的颜色应呈现均匀一直的改变。4.3.3真空状态下灭菌腔室内泄漏实验泄漏率：在10min内，腔室内压力变化应<130Pa/min（1mm Hg/min)4.3.4将灭菌器重加入纯化水等，准备工作做好后，设置为121,15分钟，启动设备，该设备应在121保温15分钟，连续运行3次，且用秒表计时。编号一次二次三次秒表计时15min20

6、s15min24s15min23s判断：校正的事件记录仪与标准时间指示装置之间的误差应+1% 符合标准 检验人： 日期：2013-03-01复核人： 日期：2013-03-034.3.5热分布测试4.3.5.1空载热分布取13支经过校验的留点温度计，其中2支的探头分别置于灭菌器的2个排气接口处，1支探头置于灭菌器检测接口处，1支探头置于灭菌器的温度传感器处，其余留点温度计均与分布在腔内各处。开启灭菌器箱，按照标准操作程序进行，运行结束后记录各个点的温度，连续运行3次，检查其重现性。以证明空载灭菌器腔室内个点的温度在每次灭菌程序运行过程中的差值+1。运行结束后各点温度记录如下：编号1234567

7、891011121次119.7120.0124.0119.8119.2120.3122.0119.7119.9117.0120.0124.32次119.0119.7123.8120.0119.0120.9122.0119.0119.4118.0120.0123.93次118.0120.0122.9119.0118.0120.0121.0119.0119.0116.0120.0124.0（注：2 安全气阀处 3排气口处 3-7 上层 8-12 下层）测定结果： 检验人： 日期：2013-03-03复核人： 日期：2013-03-044.3.5.2满载热分布将灭菌器内装满洗后清洁且装满培养基的锥形

8、瓶，自下而上摆放，取13支经过校验的留点温度计，其中2支的探头分别置于灭菌器的2个排气接口处，1支探头置于灭菌器检测接口处，1支探头置于灭菌器的温度传感器处，其余留点温度计均与分布在腔内各处。开启灭菌器箱，按照标准操作程序进行，运行结束后记录各个点的温度，连续运行3次，检查其重现性。运行结束后各点温度记录如下：编号1234567891011121次123.0118.0122.1121.9120.2122.0121.3119.9118.5119.5121.5119.22次123.8117.7122.1122.0119.2121.6121.4118.4118.4118.4120.0118.23次1

9、12.2119.8119.4118.8118.8120.0120.2117.6118.0117.0119.0118.2（注：1 安全气阀处 2 排气口处 3-7 上层 8-12 下层）运行结果： 检验人： 日期：2013-03-02复核人： 日期：2013-03-044.3.6热穿透试验4.3.6.1装载类型：最大装载、装满4.3.6.2器皿选择：500ml锥形瓶，90ml培养皿灭菌程序：121，15分钟4.3.6.3测试过程在最大装载情况下，取13支经过校验的留点温度计，其中2支的探头分别置于灭菌器的2个排气接口处的待灭菌瓶内，1支探头置于灭菌器检测接口处处的待灭菌瓶内，其余留点温度计置于其

10、余待灭菌瓶中。开启灭菌器箱，按照标准操作程序进行，运行结束后记录各个点的温度，连续运行3次，检查其重现性。最大负载状态下，热穿透实验的结果达到最冷点灭菌物品的暴露时间为12115min，即F015.最小负载状态下，热穿透实验的结果达到最冷点灭菌物品的暴露时间为12115min，即F015.=t*10（T1-T2)/Z-温度最低点的相应灭菌时间T-某实际灭菌时间所持续的时间T1-实际灭菌温度T2-理论灭菌温度Z-各温度下的微生物灭菌速率常数15.3*10（117.8-121）/10=45.9运行结束后各点温度记录如下：编号123456781次122.3121.5121.0122.5120.511

11、9.8118.22次122.0122.0120.0121.0121.0120.0118.03次120.2119.0117.8118.0118.4119.0117.8（注：上层1-4 下层5-8 水银柱断裂）运行结果：因水银柱断裂，放弃第4组 数据，继续试验 ，出现此情况，需重新验证 。 检验人： 日期：复核人： 日期：4.4性能确认4.41生物指示剂纸上活菌数和活芽孢数的确认 (1)无菌打开 5 个生物指示剂小瓶(美国 3M 公司 Aiiesi 生物指示剂，No1262)，将 5 条芽孢纸片转移至一个无菌研钵中，加入 0.5ml 生理盐水，研碎纸片，制成芽孢悬液。 (2)分别吸取lml 芽孢悬

12、液加入已有 9 ml 盐水的试管中，将试管标明 1号和2号。 (3)将1号试管80水浴中放置15min，作为热处理。 (4)用盐水分别将上述两管作连续 10倍稀释(101，10*2，103)。 (5)分别吸取热处理组(1号)和未处理组(2号)后两个稀释度(102，103)悬液lml，各加入两个无菌平皿中，然后倒入 1520ml 冷却至50左右的TSA(胰蛋白胨大豆琼脂)培养基，混合后待冷却。 (6)倒置平皿，在56下培养48h。 (7)培养结束后，计数每个平皿碟上的菌落数，计算处理组和未处理组各稀释液中的平均菌落数，然后算出生物指示剂纸片上平均实际活菌数和活芽孢数。 (8)如果每条纸片上的平均

13、活菌数不小于制造商标明的平均数的 95， 同时，纸片上 的活芽孢数也不小于活菌数的一半，则该生物指示剂可以使用。 (9)将结果记录在“生物指示剂的活性确认表”上。 (10)每批购买的生物指示剂均需进行本项检查。 2根据验证需要，将适量的生物指示剂小瓶送往制剂或合成车间，或者用于实验室高压灭菌柜。 3生物指示剂法确认灭菌效果检查可与热穿透试验同时进行，也可单独进行，每次检查应至少使用 5 个生物指示剂，在生物指示剂上标明灭菌器名称，指示剂放置位置，编号及使用日期等。 4将各生物指示剂尽可能置于热电偶旁。 5按照相应的高压灭菌柜验证规程或原位灭菌验证规程运行一个灭菌周期。 6灭菌结束后，待灭菌柜冷

14、却，打开柜门，立即取出所有生物指示剂送微生物实验室培养。 7压碎生物指示剂中的安瓿瓶， 同时用一个未经灭菌处理的生物指示剂作为阳性对照 (也压碎内部的安瓿瓶)，一同于56下培养48h。 二、结果观察及分析 1。分别在培养24h后及48h后检查生物指示剂是否有颜色变化，如果呈黄色(阳性显 示)则表明有细菌生长，如果没有颜色变化，则表明已进行了充足的灭菌循环。 2阳性对照生物指示剂必须在 24h内出现颜色变化。 3将结果记录在“生物指示剂检查表”上，将该表放入蒸汽灭菌工艺的验证文件中。 4所有阳性的生物指示剂必须在 121下高压灭菌30min。项目第一次第二次第三次稀释倍数10-210-310-2

15、10-310-210-3未经热处理经热处理备注表未出结果判断：实验结果不可用4.4.2嗜热脂肪杆菌 D值测定法 1 材料及仪器(表415) 2 方法步骤 21 将菌膜或孢子悬浮液分别放入注射用水或磷酸缓冲液PBS中，用VF1振动使溶解。制备浓度约为108个/ml 的悬浮液，然后在沸水中加热l0min以杀灭可能存在的芽孢繁殖体。 22 将上述BStK3l 悬浮液分别用微量注射器注入1618根毛细管(必要时可采用离心法去除气泡)，使每支管的菌量约为106个孢子。用酒精灯封口。每次进样前后，进样器必须用1：1酒精丙酮以及蒸馏水交替淋洗，以提高接种准确度。 表 415 嗜热脂肪杆菌 D值测定的材料及仪

16、器 BStK31 孢子悬浮液 浓度约在 45×108个/ml BStK31 菌膜每片含量约在 13×106个至 16×106个 培养基TSA/胰蛋白大豆琼脂及 TSB/胰蛋白大豆肉汤振动器VF-1 2500 次/min可调式恒温油浴型号 000-9601，精度±01，调温范围 20220毛细管0811mm×90mm 微量进样器(图 455) 500l，针头长 90mm23 将校验过的油浴设在121下工作。 24 分别将每组的1416支毛细管放入毛细管架，迅速放入油浴曝热，并计时。每隔 13min 从毛细管架同时取出两支毛细管，迅速放入冰水浴中冷

17、却35min。 取出， 首先用清洁剂除去油滴再用?5酒精棉花消毒毛细管表面，然后分别放入一个装有 5ml 无菌 TSB的试管。用无菌玻璃棒捣碎毛细管。定量稀释，制成 30300CFUml 菌液。 在5260用TSA 培养24h， 计数。 未经曝热的毛细管，也应用同样的方法理并进行培养计数。 3 结果 4 讨论 41 D值的确定及影响因素 孢子在蒸汽灭菌过程中，其死亡的规律可以用下式表示： lgNtlgN0+kt 式中 N0零点孢子的浓度； Nt曝热t 时间(min)后孢子的浓度； t曝热时间，min； k斜率。 D1/k 4.4.3细菌生物指示剂验证将一定量的耐热菌放入待灭菌的产品中，在设定的

18、灭菌条件下进行灭菌，以验证设定的灭菌工艺是否确实赋予产品必须的灭菌值（FH）。验证菌选择：嗜热脂肪芽孢杆菌指示剂（3M中国有限公司），含量1x106CFU/支。验证方法取嗜热脂肪芽孢杆菌指示剂，均匀分布于灭菌锅的隔层位置，其中三支置于热穿透试验的最冷点，按照SOP进行灭菌操作，温度121，灭菌时间15分钟。经过一个灭菌周期后，取出生物指示剂，挤破内含的安培瓶，在60培养24-48小时，同时取1支未灭菌的指示剂做阳性对照。连续试验三次。（培养后，指示管不变色呈紫色，表示灭菌通过；培养后，指示管变红，呈黄色表示灭菌不通过。同时培养的对照管应为阳性呈黄色。）（必须及时查出灭菌失败原因）。生物指示剂培

19、养结果记录如下：编号123456789101112阳性对照1次-+2次-3次-备注+表示未通过 -表示通过 未做结果判断及评价： 符合标准 检验人： 日期：2013-03-06复核人： 日期：2013-03-114.4.2灭菌后培养基质量验证按照中华人民共和国药典2010年版附录J规定的检查方法，从消毒后的营养琼脂和玫瑰红钠培养基中每次取10瓶（注意分别从消毒器中不同位置）分别放皿。并同时做空白。在30-35和23-28下培养细菌培养3天，霉菌和酵母菌培养5天，记录菌落生长情况。最大负载、最小负载状态下，微生物标的物试验的结果可以保证微生物存活概率10-6细菌培养记录：编号天数123456789101 次第一天00000000000000000000第二天00110000000000300000第三天001500000200003000002次第一天00000000000000000000第二天00110000000000300000第三天002500000001703000003次第一天00000000000000000000第二天00110000000000100000第三天00210000000000200000霉菌培养记录：编号天数1234567891