无水葡萄糖检验标准操作规程

1、 China Gateway Biologics (Shanghai) Co., LTD 凯惠睿智生物科技(上海)有限公司标题Title :无水葡萄糖检验标准操作规程Standard Operating Procedure for Anhydrous Glucose Inspection文件编号/Document Number:CGB-SOP-XXX生效日期/Effective Date: 2015-11-XX版本/Version:00目的PURPOSE 本操作规程目的在于建立规范的无水葡萄糖质量检测方法，为操作人员提供规范的操作依据，保证无水葡萄糖质量的检验准确，数据可靠。范围SCOPE本标

2、准操作规程适用于凯惠睿智生物科技（上海）有限公司GMP工厂QC 部。职责RESPONSIBILITY QC负责检验仪器及器具INSTRUMENT AND APPLIANCE 分析天平、旋光度测定仪、红外分光光度计、恒温干燥箱、恒温水浴箱、三角瓶、比色管、试管、酒精灯、吸管、移液管、容量瓶、蒸发皿、坩埚、酸式滴定管、马弗炉、称量瓶等。试剂及其配制方法REAGENT AND PREPARATION试剂：乙醇、硝酸、比色用氯化钴液、比色用重铬酸钾液、比色用硫酸铜液、硫酸试剂配制方法：Ø 氨试液：取浓氨溶液400ml，加水使成1000ml，即得。Ø 碱性酒石酸铜试液（甲液）：取硫酸

3、铜结晶6.93g，加水使溶解成100ml。Ø 碱性酒石酸铜试液（乙液）：取酒石酸钾钠结晶34.6 g与氢氧化钠10g，加水使溶解成100ml。Ø 碱性酒石酸铜试液：临用时，将碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合，即得。Ø 酚酞指示液：取酚酞1g，加乙醇100ml使溶解，即得。Ø 氢氧化钠饱和水溶液：取氢氧化钠适量，加水振摇使溶解成饱和溶液，冷却后，置聚乙烯塑料瓶中，静置数日，澄清后备用。Ø 氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）：取澄清的氢氧化钠饱和溶液5.6ml，加新沸过的冷水使成1000ml，摇匀。Ø 氢氧化钠滴定液（0.02mol/L)：取

4、氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）加新沸过的冷水稀释制成。Ø 稀硝酸：取硝酸105ml，加水稀释至1000ml，即得。本液含HNO3应为9.510.5。Ø 标准氯化钠溶液（贮备液）：称取氯化钠0.165g，置1000ml量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液，（每1ml相当于100g的氯）。Ø 标准氯化钠溶液（使用液）：临用前，精密量取贮备液10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml相当于10g的氯）。Ø 硝酸银试液：取硝酸银1.75g，加水100ml溶解即得。Ø 稀盐酸：取盐酸234ml，加水稀释至100

5、0ml，即得。本液含HCl应为9.5%10.5%。Ø 标准硫酸钾溶液：称取硫酸钾0.181g，置1000ml量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。（每1ml相当于100g的SO4）。Ø 25%氯化钡溶液：取25g氯化钡，加水100ml溶解即得。Ø 碘试液：可取用碘滴定液（0.05mol/L）。Ø 碘滴定液（0.05mol/L）：取碘13.0g，加碘化钾36g与水50ml溶解后，加盐酸3滴与水适量使成1000ml，摇匀，用垂熔玻璃滤器滤过。置玻璃塞的棕色玻瓶中，密闭，在凉处保存。Ø 磺基水杨酸溶液（15）：取磺基水杨酸1g， 加水使溶解

6、成5ml，即得。Ø 稀硫酸：取硫酸57ml，加水稀释成1000ml，即得。本液含H2SO4应为9.5%10.5%。Ø 草酸铵试液：取草酸铵3.5g，加水使溶解成100ml， 即得。Ø 标准钙溶液：精密称取碳酸钙0.1250g，置500ml量瓶中，加水5ml与盐酸0.5ml使溶解，用水稀释至刻度，摇匀。每1m l相当于0.1m g的钙（Ca）。Ø 标准铁溶液（贮备液）：称取硫酸铁铵FeNH4(SO4)2·12H2O0.863g，置1000ml量瓶中,加水溶解后，加硫酸2.5ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液（每1ml相当于100g的Fe）。&

7、#216; 标准铁溶液（使用液）：临用前，精密量取贮备液10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml相当于10g的Fe）。Ø 30%硫氰酸铵溶液：取硫氰酸铵30 g，加水使溶解成100ml，即得。Ø 标准铅溶液（贮备液）：称取硝酸铅0.1599g，置1000ml量瓶中，加硝酸5ml与水50ml溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液（每1ml相当于0.1mg的Pb）。Ø 标准铅溶液（使用液）：临用前，精密量取贮备液10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml相当于10g的Pb）。Ø 7mol/L盐酸溶液：取盐酸

8、63ml，加水适量使成100ml，摇匀。Ø 2mol/L盐酸溶液：取盐酸18ml，加水适量使成100ml，摇匀。Ø 5mol/L氨溶液：取浓氨溶液33.5ml，加水适量使成100ml，即得。Ø 醋酸盐缓冲液（pH3.5）：取醋酸铵25g，加水25ml溶解后，加7mol/L盐酸溶液38ml，用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液准确调节pH值至3.5(电位法指示)，用水稀释至100ml，即得。Ø 1mol/L氢氧化钠溶液：取4g氢氧化钠加水使溶解成100ml，即得。Ø 硫代乙酰胺试液（甲液）：取硫代乙酰胺4g，加水使溶解成100ml，置冰箱中

9、保存。Ø 硫代乙酰胺试液（乙液）：由1mol/L氢氧化钠溶液15ml、水5.0ml及甘油20ml混匀即得。Ø 硫代乙酰胺试液：临用前取硫代乙酰胺试液（甲液）1.0ml与硫代乙酰胺试液（乙液）5.0ml，置水浴上加热20秒钟，冷却，立即使用。Ø 醋酸铅试液：取醋酸铅10g，加新沸过的冷水溶解后，滴加醋酸使溶液澄清，再加新沸过的冷水使成100ml，即得。Ø 醋酸铅棉花：取脱脂棉花1.0g，浸入醋酸铅试液与水的等体积混合液12ml中,浸透后，挤压除去过多的溶液，并使之疏松，在100以下干燥后，贮于玻璃塞瓶中备用。Ø 乙醇制溴化汞试液：取溴化汞2.5g

10、,加乙醇50ml,微热使溶解,即得。本液应置玻璃瓶内，在暗处保存。Ø 溴化汞试纸：取滤纸条浸入乙醇制溴化汞试液中，1小时后取出，在暗处干燥，即得。Ø 溴化钾溴试液：取溴30g与溴化钾30g，加水使溶解成100ml，即得。 Ø 20%氢氧化钠溶液：取氢氧化钠20g，加水溶解成100ml，混匀即得。Ø 标准砷溶液（贮备液）：称取三氧化二砷0.132g，置1000ml量瓶中，加20%氢氧化钠溶液5ml溶解后，用适量的稀硫酸溶液中和，再加稀硫酸溶液10ml，用水稀释至刻度,摇匀，作为贮备液（每1ml相当于100µg的As）。Ø 标准砷溶液（使

11、用液）：临用前，精密量取贮备液10ml，置1000ml量瓶中，加稀硫酸溶液10ml，用水稀释至刻度,摇匀，即得（每1ml相当于1µg的As）。Ø 碘化钾试液：取碘化钾16.5g，加水使溶解成100ml，即得。本液应临用新制。Ø 酸性氯化亚锡试液：取氯化亚锡20g，加盐酸使溶解成50ml，滤过，即得。本液配成后三个月即不适用。程序PROCEDURE1. 性状1.1 外观1.1.1操作方法：取供试品适量，于光亮处观察色泽，嗅其气味，尝其味道，记录结果。1.1.2 结果判断：供试品为无色结晶或白色结晶性或颗粒性粉末，无臭，味甜，则判符合规定，否则判不符合规定。1.2 溶

12、解性1.2.1 操作方法：称量供试品1g，于25±2加入9.9ml水，每隔5分钟强力振摇30秒钟，观察30分钟内的溶解情况，记录结果；称量供试品0.01g，于25±2加入9.9ml乙醇，每隔5分钟强力振摇30秒钟，观察30分钟内的溶解情况，记录结果。1.2.2 结果判断：在水中易溶，在乙醇中微溶，则判符合规定，否则判不符合规定。2. 比旋度2.1 操作方法：取供试品约10g，精密称定，置50ml量瓶中，加水适量与氨试液2.0ml，溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，放置60分钟，在25时，测定其比旋度。2.2 结果判断：按上述规程操作，若比旋度为+52.6°至+53.2

13、°，则判为符合规定，否则判不符合规定。3. 鉴别3.1.1操作方法：取供试品约0.2g，加水5ml溶解后，缓缓滴入微温的碱性酒石酸铜试液中，观察现象。3.1.2结果判断：若生成氧化亚铜的红色沉淀，则判符合规定，否则判不符合规定。3.2.1操作方法：取本品适量，依法测定红外光吸收图谱。3.2.2结果判断：若本品的红外光吸收图谱与对照的图谱一致，则判符合规定，否则判不符合规定。4. 酸度4.1操作方法：取供试品2.0g，加水20ml溶解后，加酚酞指示液3滴与氢氧化钠滴定液（0.02mol/L)0.20ml。4.2 结果判断：若显粉红色，则判为符合规定，否则判不符合规定。5. 溶液的澄清度

14、与颜色5.1 操作方法：取供试品5.0g，加热水溶解后，放冷，用水稀释至10ml；如显浑浊，与1号浊度标准液比较；如显色，与对照液（取比色用氯化钴液3.0ml、比色用重铬酸钾液3.0ml与比色用硫酸铜液6.0ml，加水稀释成50ml）1.0ml加水稀释至10ml比较。5.2 结果判断：若溶液澄清；若显浑浊，与1号浊度标准液比较不得更浓；若显色，与对照液比较不得更深，则判为符合规定，否则判不符合规定。6. 乙醇溶液的澄清度6.1操作方法：取供试品1.0g，加乙醇20ml，置水浴上加热回流约40分钟。6.2结果判断：若溶液澄清，则判符合规定，否则判不符合规定。7. 氯化物7.1操作方法：取供试品

15、0.60g，加水溶解使成约25ml，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成约40ml，摇匀，即得供试品溶液。取标准氯化钠溶液6.0ml置50ml纳氏比色管中，摇匀，加稀硝酸10ml，加水使成约40ml，摇匀，即得对照溶液。分别向供试品溶液、对照溶液中加入硝酸银试液1.0ml，用水稀释使成50ml，摇匀，在暗处放置5分钟。同置黑色背景上，从比色管上方向下观察、比较，并记录结果。7.2结果判断：若供试品管中溶液与标准对照溶液比较，颜色浅则判为符合规定，否则判不符合规定。8. 硫酸盐8.1 操作方法：取供试品 2.0g，加水溶解使成约40ml，置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸2ml，摇匀

16、，即得供试溶液。取标准硫酸钾溶液2.0ml置50ml纳氏比色管中，加水使成约40ml，加稀盐酸2ml，摇匀，即得对照溶液。分别向供试溶液、对照溶液中加入25%氯化钡溶液5ml，加水稀释使成50ml，充分摇匀，放置10分钟。同置黑色背景上，从比色管上方向下观察、比较，并记录结果。8.2 结果判断：若供试品管中溶液与标准对照溶液比较，颜色浅则判为符合规定，否则判不符合规定。9. 亚硫酸盐与可溶性淀粉9.1 操作方法：取供试品1.0 g，加水10ml溶解后，加碘试液1滴，观察现象。9.2 结果判断：若显黄色，则判符合规定，否则判不符合规定。10. 干燥失重10.1 操作方法：取供试品约1g，精密称定

17、置105干燥至恒重的称量瓶中，在105干燥至横重，由减失的重量和取样量算供试品的干燥失重，记录恒重时的温度、恒重时间，称量数据及结果等。计算公式：减失重量率×100 m2 =M- m式中：m1：为供试品重量（g） M：为恒重称量瓶+恒重供试品重量（g） m：为恒重称量瓶重量（g） m2：为干燥至恒重的供试品重量（g） 供试品干燥时，应平铺在扁形称瓶中，厚度不可超过5mm，如为疏松物质，厚度不可超过10mm。放入烘箱或干燥器进行干燥时，应将瓶盖取下，置称量瓶旁，或将瓶盖半开进行干燥；取出时，须将称量瓶盖好。置烘箱内干燥的供试品，应在干燥后取出置干燥器中放冷，然后称定重量。10.2 结果

18、判断：供试品按上述操作检验，减失重量不得过1.0%，则判符合规定，否则应判为不符合规定。11. 炽灼残渣11.1操作方法：取供试品1.0g， 置已炽灼至恒重的坩埚中，精密称定，缓缓炽灼至完全炭化，放冷；加硫酸0.51ml使湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽后，在700800°C炽灼使完全灰化，移置干燥器内，放冷，精密称定后，再在700800°C炽灼至恒重，即得。计算公式：遗留残渣率（）÷m1×100 式中：m1：为供试品重量（g） M：为恒重坩埚+恒重遗留残渣（g） m：为恒重坩埚重量（g）11.2结果判断：若遗留残渣率0.1%，则判符合规定，否则判不符合规定

19、。12. 蛋白质12.1操作方法：取供试品1.0g，加水10ml溶解后，加磺基水杨酸溶液（15）3ml，观察现象。12.2结果判断：若没有发生浑浊或沉淀，则判符合规定，否则判不符合规定。13. 钡盐13.1操作方法：取供试品2.0g，加水20ml溶解后，溶液分成两等份，一份中加稀硫酸1ml，另一份中加水1ml，摇匀，放置15分钟。13.2结果判断：若两液均澄清，则判符合规定，否则判不符合规定。14. 钙盐14.1操作方法：取供试品1.0g，加水10ml溶解后，加氨试液1ml与草酸铵试液5ml，摇勻，放置1小时，如发生浑浊，与标准钙溶液1.0ml制成的对照液比较。14.2 结果判断：若供试品管中

20、溶液与标准对照溶液比较，颜色浅则判为符合规定，否则判不符合规定。15. 铁盐15.1操作方法：取供试品2.0g，加水20ml溶解后，加硝酸3滴，缓慢煮沸5 分钟，放冷，用水稀释制成45ml，加30%硫氰酸铵溶液3.0ml，摇匀，如显色，与标准铁溶液2.0ml用同一方法制成的对照液比较。15.2 结果判断：若供试品管中溶液与标准对照溶液比较，颜色浅则判为符合规定，否则判不符合规定。16. 重金属16.1 操作方法：取50ml纳氏比色管三支，甲管中加入标准铅溶液2ml，醋酸盐缓冲液 (pH3.5) 2ml后，加水使成25ml；乙管中取供试品5.0g，加水23ml溶解后，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）

21、2ml；丙管取供试品5.0g，加入标准铅溶液2ml与醋酸盐缓冲液 (pH3.5) 2ml，加水使成25ml。在甲、乙、丙三管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2 分钟，同置白纸上，自上向下透视，观察现象。16.2 结果判断：供试品按上述操作检验，当丙管中显出的颜色不浅于甲管时，乙管中显示的颜色与甲管比较，未见更深（0.0004%），则判为符合规定；否则判为不符合规定。17. 砷盐17.1 仪器装置：如图1：A为100ml标准磨口锥形瓶；B为中空的标准磨口塞，上连导气管C(外径8.0mm，内径6.0mm)，全长约180mm；D为具孔的有机玻璃旋塞，其上部为圆形平面，中央有一圆孔，孔径与导

22、气管C的内径一致，其下部孔径与导气管C的外径相适应，将导气管C的顶端套人旋塞下部孔内，并使管壁与旋塞的圆孔相吻合，黏合固定；E为中央具有圆孔（孔径6.0mm）的有机玻璃旋塞盖，与D紧密吻合。17.2 操作方法17.2.1 定砷装置的准备：测试时，于导气管中装入醋酸铅棉花60mg（装管高度为60-80mm），再于旋塞的顶端平面上放一片溴化汞试纸（试纸大小以能覆盖孔径而不露出平面外为宜），盖上旋塞盖并旋紧，即得。17.2.2 标准砷斑的制备：精密量取标准砷溶液2ml，置标准磨口锥形瓶中，加盐酸5ml与水21ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将照

23、上法装妥的导气管C密塞于标准磨口锥形瓶A上，并将标准磨口锥形瓶A置25-40水浴中，反应45分钟，取出溴化汞试纸，即得。17.2.3 供试品砷斑的制备：取供试品2.0g，加水5ml溶解后，加稀硫酸5ml与溴化钾溴试液0.5ml，置水浴上加热约20分钟，使保持稍过量的溴存在，必要时，再补加溴化钾溴试液适量，并随时补充蒸散的水分，放冷，加盐酸5ml与水适量使成28ml，自“再加碘化钾试液5ml”起，依法操作，即得。17.3 结果判断：供试品形成砷斑的颜色不得深于标准砷斑的颜色，即为符合规定，否则为不符合规定。18. 微生物限度18.1 微生物限度检查中所使用的培养基按“CGB-QC-SOP-004

24、 培养基管理操作规程”中相关规定制备，且应进行适用性检查合格后使用。18.2 需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数18.2.1 供试液制备：取供试品10g，加入pH7.0无菌-氯化钠蛋白胨缓冲液溶解稀释至100ml，混匀，作为1：10供试液；取1：10供试液1ml加入9ml pH7.0无菌-氯化钠蛋白胨缓冲液中，混匀，作为1：100供试液；取1：100供试液1ml加入9ml pH7.0无菌-氯化钠蛋白胨缓冲液中，混匀，作为1：1000供试液。18.2.2 需氧菌总数：在超净台内拆去S60微生物限度培养器的无菌外包装，将培养器安装到微生物限度检验仪泵头上，用少量pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液润湿滤膜，取

25、1:10供试液1ml过滤，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜，冲洗量为100ml。冲洗后，取下培养器，在膜反面浇注温度不超过45胰酪大豆胨琼脂培养基，3035下培养35天，观察菌落生长情况，点计平板上生长的所有菌落数，计数并报告。平行制备2个平板。同法操作1：100、1：1000供试液。每个稀释级各制备两个平板。18.2.3 霉菌和酵母菌总数检查：在超净台内拆去S60微生物限度培养器的无菌外包装，将培养器安装到微生物限度检验仪泵头上，用少量pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液润湿滤膜，取1:10供试液1ml过滤，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜，冲洗量为100ml。冲洗后，取下培养器，在膜反面浇注温度不超过45沙氏葡萄糖琼脂培养基，2025下培养57天，观察菌落生长情况，点计平板上生长的所有菌