实验二显微镜的使用酵母菌的观察细菌的单染色及简单染色

1、实验二（一）显微镜的构造、性能和使用方法（一）显微镜的构造、性能和使用方法一、目的要求一、目的要求了解普通光学显微镜了解普通光学显微镜( (复式显微镜复式显微镜) )的构造、的构造、基本原理、维护和保养的方法基本原理、维护和保养的方法学习并掌握普通光学显微镜的正确使用学习并掌握普通光学显微镜的正确使用方法方法二、光学显微镜的基本结构二、光学显微镜的基本结构机械和支架系统机械和支架系统照明系统照明系统光学放大系统光学放大系统三、油镜的工作原理三、油镜的工作原理增加照明亮度增加照明亮度增加显微镜的分辨率增加显微镜的分辨率显微镜的分辨率：显微镜的分辨率：显微镜能辨显微镜能辨别两点之间的最小距离的能力

2、。别两点之间的最小距离的能力。 D=/2NA=/2nsin(/2 ) D：分辨率：分辨率NA：物镜的数值孔径值：物镜的数值孔径值 ：可见光的波长（平均：可见光的波长（平均0.550.55 m) m) n: n: 物镜和被检标本间介物镜和被检标本间介质的折射率质的折射率 ：镜口角（即入射角）：镜口角（即入射角）四、显微镜的使用方法四、显微镜的使用方法观察前的准备观察前的准备显微镜的安置显微镜的安置光源调节光源调节根据个人情况，调节双筒显微镜的目镜根据个人情况，调节双筒显微镜的目镜 右眼看清右眼看清调节左目镜的视度调节圈调节左目镜的视度调节圈扳动镜管，调节至瞳孔间距扳动镜管，调节至瞳孔间距显微观察

3、显微观察低倍镜观察低倍镜观察高倍镜观察（高倍镜观察（同焦现象同焦现象）油镜观察油镜观察在待观察的样品区域滴加香柏油，从侧面注视，用在待观察的样品区域滴加香柏油，从侧面注视，用粗调节器将载物台缓慢上升，使油镜浸在镜油中。粗调节器将载物台缓慢上升，使油镜浸在镜油中。显微镜用毕后的处理显微镜用毕后的处理下降载物台，取下载玻片；下降载物台，取下载玻片；用擦镜纸拭去镜头上的镜油，然后用擦镜纸沾取少量用擦镜纸拭去镜头上的镜油，然后用擦镜纸沾取少量酒精乙醚洗液擦去镜头上残留的油迹，最后用干净的酒精乙醚洗液擦去镜头上残留的油迹，最后用干净的擦镜纸擦去残留的洗液；擦镜纸擦去残留的洗液；用擦镜纸清洁物镜及目镜，用

4、绸布清洁显微镜的金属用擦镜纸清洁物镜及目镜，用绸布清洁显微镜的金属部件；部件；将镜体各部分复原。将镜体各部分复原。五、思考题五、思考题用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间滴加用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间滴加香柏油有何作用？香柏油有何作用？什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？ 影响显微镜分辨率的因素有哪些？影响显微镜分辨率的因素有哪些？ P47五、五、2.（）（）（3）（）（4）（二）酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别（二）酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别目的要求目的要求观察酵母菌的形态及出芽生殖方式。观察

5、酵母菌的形态及出芽生殖方式。学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。基本原理基本原理 美蓝是一种无毒性染料美蓝是一种无毒性染料. .氧化型呈现蓝色氧化型呈现蓝色, ,还原型呈现无色还原型呈现无色. .用美蓝对酵母的活细胞进行用美蓝对酵母的活细胞进行染色染色, ,代谢活力强的细胞具有较强的还原能力代谢活力强的细胞具有较强的还原能力, ,能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型. .因此因此, ,具有还原能力的酵母活细胞为无色具有还原能力的酵母活细胞为无色, ,死死细胞或代谢能力弱的衰老细胞为蓝色细胞或代谢能力弱的衰老细胞为蓝色. .

6、实验器材实验器材菌种菌种啤酒酵母啤酒酵母溶液或试剂溶液或试剂 0.1%0.1%吕氏碱性美蓝染色液吕氏碱性美蓝染色液仪器或其他用具仪器或其他用具显微镜，盖玻片，载玻片，滤纸，擦镜纸。显微镜，盖玻片，载玻片，滤纸，擦镜纸。实验步骤实验步骤制片制片在载玻片中央加一滴在载玻片中央加一滴0.1%0.1%美蓝美蓝取菌少许取菌少许混混匀匀盖上盖玻片盖上盖玻片静置静置3min3min、0.5h0.5h观察观察用高倍镜观察酵母的形态和出芽生殖用高倍镜观察酵母的形态和出芽生殖根据颜色鉴别死活细胞根据颜色鉴别死活细胞活细胞：无色；死细胞：蓝色活细胞：无色；死细胞：蓝色实验结果实验结果绘图说明你所观察到的酵母菌的形态

7、特征及绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征及出芽生殖方式。出芽生殖方式。记录染色时间对酵母菌死活细胞数量的影响记录染色时间对酵母菌死活细胞数量的影响P75表表-1。思考题思考题吕氏碱性美蓝染色液作用时间的不同，对酵吕氏碱性美蓝染色液作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原因。母菌死细胞数量有何影响？试分析其原因。调节手动光轮调节孔径光阑手柄聚光器的升降镜头复原、手动光轮调到最低档细菌的单染色及革兰氏染色细菌的单染色及革兰氏染色（一）简单染色法（一）简单染色法目的要求目的要求学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法；简单染色法；

8、巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操作技术巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操作技术。基本原理基本原理借助物理因素（如：细胞及细胞物质对染料的毛借助物理因素（如：细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸附作用等）和化学因素（如：细现象、渗透、吸附作用等）和化学因素（如：正负离子之间的相互吸引等）的作用而进行的。正负离子之间的相互吸引等）的作用而进行的。实实验器材验器材菌种菌种土壤样品分离纯化后得到的细菌土壤样品分离纯化后得到的细菌染色剂染色剂草酸铵结晶紫染液草酸铵结晶紫染液番红染液番红染液仪器或其他用具仪器或其他用具显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、无菌水等。显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、无菌

9、水等。操操作作步步骤骤涂涂 片片干干 燥燥固固 定定 染染 色色 镜镜 检检 水水 洗洗 干干 燥燥实验结果实验结果根据观察结果，绘出细菌形态图。根据观察结果，绘出细菌形态图。思考题思考题（P76P76五、五、2. 2. （）（）（2 2）（）（3 3）在进行细菌涂片时应注意哪些环节？在进行细菌涂片时应注意哪些环节？细菌制片时为什么要进行加热固定？在加热固细菌制片时为什么要进行加热固定？在加热固定时应注意什么？定时应注意什么？为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察？为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察？（二）革兰氏染色法（二）革兰氏染色法目的要求目的要求学习并初步掌握革兰氏染色法；学习并初步

10、掌握革兰氏染色法；了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。的重要性。实验器材实验器材菌种菌种枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌12-18h12-18h营养琼脂斜面培养物营养琼脂斜面培养物大肠杆菌约大肠杆菌约24h24h营养琼脂斜面培养物营养琼脂斜面培养物土壤样品分离纯化后得到的细菌土壤样品分离纯化后得到的细菌染色剂染色剂草酸铵结晶紫染液草酸铵结晶紫染液卢戈氏碘液卢戈氏碘液95%95%乙醇乙醇番红染色液番红染色液仪器或其他用具仪器或其他用具显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、无菌水等显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、无菌水等。操操作作步步骤骤采用三区涂片法制片采用三区涂片法制片大肠杆菌大肠杆菌枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌大肠杆菌与枯草芽孢杆菌大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合涂片混合涂片操操作作步步骤骤大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合涂片油镜下形态（革兰氏染色）大肠杆菌萌发芽孢的枯草芽孢杆菌实验结果实验结果列表说明你所观察到的细菌形状、颜色和革列表说明你所观察到的细菌形状、颜色和革兰氏染色反应。兰氏染色反应。 菌菌 种种 形形 态态 颜颜 色色 结果（结果（、）思考题思考题你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环