dna重组技术的基本工具.pptPPT课件

1、定向基因改造设想 第1页/共47页第2页/共47页 教学目标及课标，考纲要求：教学目标及课标，考纲要求： 1.简述简述基因工程的概念. 2.简简述述DNA重组技术所需三种基本工具的作用。重组技术所需三种基本工具的作用。 3.说明基因工程载体应具备的条件。说明基因工程载体应具备的条件。 4.认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新。认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新。 教学重点教学重点: DNA重组技术所需三种基本工具的作用重组技术所需三种基本工具的作用. 教学难点教学难点：基因工程载体应具备的条件。：基因工程载体应具备的条件。第3页/共47页第4页/共47页基因工程的别名

2、操作环境操作对象操作水平变异类型基本过程结 果DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平人类需要的新生物类型和产品剪切 拼接 导入 表达基因重组基因工程的概念第5页/共47页第6页/共47页第7页/共47页第8页/共47页第9页/共47页一、限制性核酸内切酶一、限制性核酸内切酶“分子手术刀分子手术刀” 1.1.主要来源： 种类与命名： 作用特点： 4.4.限制酶识别序列 5.5.作用结果：第10页/共47页第11页/共47页种类与命名：种类与命名： 现在已经从约300种微生物中分离出了约4000种限制性内切酶(限制酶)。粘质沙雷氏杆菌粘质沙雷氏杆菌（Serratia marcesens练习：流感

3、嗜血杆菌的练习：流感嗜血杆菌的d d菌株菌株( Haemophilus influenzae d )( Haemophilus influenzae d )中先后分离到中先后分离到3 3种限制酶，则分种限制酶，则分别命名为别命名为: :Hind、Hind和和Hind第12页/共47页 T12345 A12345HHHHHO T12345 A12345HHHHOH2O +第13页/共47页O第14页/共47页限制酶DNA解旋酶区别切割特定的核苷酸序列切割特定的核苷酸序列的磷酸二酯键的磷酸二酯键将将DNADNA两条链的氢键两条链的氢键打开形成两条单链打开形成两条单链限制酶DNA水解酶区别切割特定的

4、核苷酸序列切割特定的核苷酸序列的磷酸二酯键，形成片的磷酸二酯键，形成片段的段的DNA.DNA.切割磷酸二酯键，形成切割磷酸二酯键，形成单个的脱氧核苷酸。单个的脱氧核苷酸。第15页/共47页能被限制性内切酶特能被限制性内切酶特异性识别的切割部位异性识别的切割部位都具有都具有回文序列回文序列：在切割部位，一条链在切割部位，一条链正向正向读的碱基顺序与读的碱基顺序与另一条链另一条链反向反向读的顺读的顺序完全序完全一致一致。第16页/共47页黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端第17页/共47页黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端第18页/共47页黏性末端：是限制性核酸内切酶在识别序列的中心轴线两侧将 DNA

5、 的两条链分别切开时形成的。如下图所示：第19页/共47页平末端平末端平末端平末端第20页/共47页第21页/共47页第22页/共47页同一种同一种第23页/共47页第24页/共47页第25页/共47页二、二、“分子缝合针分子缝合针” DNA DNA连接酶连接酶催化磷酸二酯键形成催化磷酸二酯键形成第26页/共47页类型第27页/共47页DNADNA聚合酶聚合酶DNADNA连接酶连接酶区别区别1 1区别区别2 2相同点相同点1)1)只能将只能将单个核苷酸单个核苷酸连连接到已有的核酸片段上，接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键形成磷酸二酯键形成形成磷酸二酯键磷酸二酯键1)1)在在两个两个DNADN

6、A片段之片段之间间形成磷酸二酯键形成磷酸二酯键2)2)以以一条一条DNADNA链为模板链为模板，连接成一条互补连接成一条互补的的DNADNA链链2)2)将将DNADNA双链上的双链上的两两个缺口同时连接个缺口同时连接起来，起来，不需要模板不需要模板第28页/共47页三、三、“分子运输车分子运输车” 基因进入受体细胞的基因进入受体细胞的载体载体载体需要的条件：有1多个限制酶切点对受体细胞无害,而且大小要合适导入基因能在受体细胞中复制、表达有某些标记基因，便于鉴定和选择常用运载体： 细菌的质粒 噬菌体衍生物或某些动植物病毒假如目的基因导入受体细胞后不能复制或不能转录，转基因生物能有预想的效果吗？作

7、为分子运输车载体，如果没有切割位点将会怎样？霍乱菌的质粒多个限制酶切点，你会用它来做分子运输车吗？目的基因有没有进入受体细胞，如何去发现？ 第29页/共47页第30页/共47页第31页/共47页1.在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（ ）A. 同种限制酶 B. 两种限制酶C. 同种连接酶 D. 两种连接酶A课堂练习课堂练习第32页/共47页课堂练习课堂练习第33页/共47页课堂练习课堂练习第34页/共47页4.下列是由限制酶切割形成的DNA片段，能用相应DNA连接酶将它们恢复连接的组合是（ ）CTGCA GGCTTAA G ACGTC AATTC GA.A.； B.B.； C.C.； D.D.以上都不对A A第35页/共47页5.如图，就下列与核酸相关酶的作用机理填空：限制酶 解旋酶 DNA连接酶 DNA聚合酶 RNA聚合酶baA.切断a处的酶为_B.连接a处的酶为_C.切断b处的酶为_第36