抗埃博拉核蛋白人鼠抗体研究

1、抗埃博拉核蛋白抗埃博拉核蛋白 人鼠嵌合抗体的研究人鼠嵌合抗体的研究 -病原生物学文献阅读报告病原生物学文献阅读报告埃博拉病毒简介埃博拉病毒简介:埃博拉出血热（Ebola Haemorrhagie Fever , EBHF）是由埃博拉病毒（Ebola virus , EBOV）引起的动物疫源性传染病，死亡率可高达90%。l 形态与性状：埃博拉病毒可呈杆状、丝状；直径约为7090nm，为中 型病毒；单股负链RNA病毒；有包膜l 病毒的蛋白：糖蛋白（GP）、核蛋白（NP）、VP35、VP40、VP30、VP24、RNA聚合酶（L蛋白）l 病毒的生活周期：吸附、穿入、脱壳、生物合成、装配、成熟和释放l

2、 病毒的传染源和宿主动物：感染EBOV的患者，以及猴子、黑猩猩等灵长类动物l 传播途径：接触传播，注射传播，性传播，气溶胶传播主要临床特征：主要临床特征：一一. .早期主要为全身性病毒血症的症状和体征。早期主要为全身性病毒血症的症状和体征。a.症状：早期多急性发病，表现为一系列非特异性症状；症状：早期多急性发病，表现为一系列非特异性症状；b.体征：体温以高热为主，波动较大；重症患者会出现体征：体温以高热为主，波动较大；重症患者会出现低血压；脉搏低血压；脉搏-体温分离早期较为常见。体温分离早期较为常见。二二. .晚期表现为全身多脏器的广泛出血和肝肾功能的严晚期表现为全身多脏器的广泛出血和肝肾功能

3、的严重受损。重受损。NP抗体研究目的、原因抗体研究目的、原因由于埃博拉出血热在我国境内尚无病例出现，尤其需由于埃博拉出血热在我国境内尚无病例出现，尤其需要储备血清学检测阳性质控物。要储备血清学检测阳性质控物。NP?获得抗体？获得抗体？l 通过基因工程抗体技术构建并表达抗埃博拉病毒核蛋白NP人-鼠嵌合抗体，为埃博拉出血热血清学检测做人源阳性对照储备。人人基因基因鼠鼠基因基因新基因新基因抗体抗体如何制备人鼠嵌合抗体如何制备人鼠嵌合抗体 目的基因的获取1 1l 从分泌抗从分泌抗ebov npebov np抗体的鼠杂交瘤细胞中提取抗体的鼠杂交瘤细胞中提取相应相应RNARNA，逆转录合成，逆转录合成cD

4、NAcDNA，然后通过，然后通过PCRPCR技术技术扩增该目的基因。扩增该目的基因。 表达载体的构建2l 将鼠抗体轻重可变区基因和人抗体轻重链恒定将鼠抗体轻重可变区基因和人抗体轻重链恒定区基因插入到区基因插入到HL51-14HL51-14质粒上，成功构建重组质粒上，成功构建重组DNADNA分子。分子。 将目的基因倒入受体细胞3l 将连接有轻重链基因的表达载体质粒用将连接有轻重链基因的表达载体质粒用PEIPEI转转染染293T293T细胞（该细胞是一种感染了腺病毒基因细胞（该细胞是一种感染了腺病毒基因的人肾上皮细胞，其蛋白质表达含量高）。的人肾上皮细胞，其蛋白质表达含量高）。 目的基因的表达与检

5、测4l 收获收获293T293T细胞产生的上清，用细胞产生的上清，用ELISAELISA法检测法检测人人鼠嵌合抗体的表达。鼠嵌合抗体的表达。检测抗体是否成功表达：检测抗体是否成功表达：ELISA检测检测293T细胞是否成功表达人细胞是否成功表达人-鼠嵌合抗体鼠嵌合抗体包被包被ebove np抗原抗原4过夜过夜次日加入一抗为收获的嵌合抗体上清次日加入一抗为收获的嵌合抗体上清二抗为二抗为HRP标记的抗人标记的抗人Fc抗体抗体4. 加底物显色，底物降解的量即为嵌合抗体的生成量加底物显色，底物降解的量即为嵌合抗体的生成量结果及其意义：结果及其意义：结果结果：改造过的人鼠嵌合抗体能与埃博拉病毒改造过的人

6、鼠嵌合抗体能与埃博拉病毒核蛋白抗原结合表明其具有抗体的生物学活性。核蛋白抗原结合表明其具有抗体的生物学活性。这些均说明人鼠嵌合抗体的构建是成功的。这些均说明人鼠嵌合抗体的构建是成功的。意义：意义：作为作为Ebola血清学检测中人源阳性对照血清学检测中人源阳性对照储备在埃博拉病毒检测上起到一定作用。对于储备在埃博拉病毒检测上起到一定作用。对于抗埃博拉核蛋白抗体的研究，也为以后抗埃博抗埃博拉核蛋白抗体的研究，也为以后抗埃博拉病毒抗体的研究提供了一定的基础。拉病毒抗体的研究提供了一定的基础。预防埃博拉预防埃博拉勤洗手加强锻炼避免与感染者直接接触注意饮食卫生身体不适立即去医院不去有感染报道和怀疑的地方参考文献参考文献 埃博拉出血热埃博拉出血热，第四军医大学出版社，第一版。，第四军医大学出版社，第一版。 周荣平，孙丽娜，刘洋，芜为，李川，梁米芳，周荣平，孙丽娜，刘洋，芜为，李川，梁米芳， 仇佩虹仇佩虹.