基因工程的原理和技术62815PPT学习教案

1、会计学1基因工程的原理和技术基因工程的原理和技术62815第二节第二节 基因工程的原理和技基因工程的原理和技术术基因工程（将人胰岛素基因转入大肠杆菌基因工程（将人胰岛素基因转入大肠杆菌）胰岛素基因胰岛素基因人体细胞人体细胞大肠杆菌大肠杆菌随细菌的增殖，胰岛素基因也同时复制随细菌的增殖，胰岛素基因也同时复制胰岛素胰岛素获取胰岛素基因的表达产物胰岛素获取胰岛素基因的表达产物胰岛素质粒质粒大肠杆菌大肠杆菌第1页/共77页剪切剪切拼接拼接导入导入表达表达基因工程的基本操作步骤（技术）基因工程的基本操作步骤（技术）1 1、筛选含有目的基因的受体细胞、筛选含有目的基因的受体细胞2 2、目的基因的表达、目的

2、基因的表达第2页/共77页思考思考1 1：如果我们对目的基因的碱基序列完如果我们对目的基因的碱基序列完全未知，全未知，比如比如: :如果我们对抗虫基因的碱基如果我们对抗虫基因的碱基序列完全不知道，怎样从序列完全不知道，怎样从苏云金芽孢杆菌苏云金芽孢杆菌体体内获取目的基因内获取目的基因（抗虫基因）（抗虫基因）？ 如何操作如何操作？ 第3页/共77页大片段大片段DNA打成许多小片段打成许多小片段小片段小片段DNA目的基因目的基因载入运载体载入运载体细菌细菌重组重组DNA分子分子重组重组DNA分子分子例如：从苏云金芽孢杆菌中提取抗虫蛋白的基因例如：从苏云金芽孢杆菌中提取抗虫蛋白的基因如果运气不如果运

3、气不好，在打成好，在打成小片段时，小片段时，有可能把抗有可能把抗虫基因打断虫基因打断基因组文库基因组文库第4页/共77页大片段大片段DNA打成许多小片段打成许多小片段小片段小片段DNA目的基因目的基因载入运载体载入运载体细菌细菌重组重组DNA分子分子重组重组DNA分子分子基因组文库基因组文库对基因组文对基因组文库的所有细库的所有细菌进行逐一菌进行逐一筛查筛查找出有抗虫找出有抗虫蛋白的菌落蛋白的菌落该菌落所携该菌落所携带的基因片带的基因片段就含有目段就含有目的基因的基因例如：从苏云金芽孢杆菌中提取抗虫蛋白的基因例如：从苏云金芽孢杆菌中提取抗虫蛋白的基因容易吗？容易吗？第5页/共77页第6页/共7

4、7页（技术）（技术）( (一一) )获得目的基因获得目的基因生生物物材材料料DNADNA提取提取限制限制酶酶DNADNA片段片段形成重组形成重组DNA分子分子导入导入受体菌受体菌群体群体构建构建基因组基因组文库文库第7页/共77页第8页/共77页第9页/共77页单链单链RNA（mRNA)mRNA)逆转录逆转录酶酶杂交杂交双链双链核酸酶核酸酶H单链单链DNADNA聚合酶聚合酶双链双链DNA逆（逆（反反）转录法合成目的基因：转录法合成目的基因： cDNA cDNA文库的构建文库的构建RNA链链DNA链链水解水解RNA第10页/共77页（技术）（技术）( (一一) )获得目的基因获得目的基因生生物物

5、材材料料DNADNA提取提取限制限制酶酶DNADNA片段片段形成重组形成重组DNA分子分子导入导入受体菌受体菌群体群体构建构建基因组基因组文库文库mRNAmRNA逆逆( (反反）转录转录目的基目的基因因(cDNA)(cDNA)形成重组形成重组DNA分子分子导入导入受体菌受体菌群体群体构建构建cDNAcDNA文库文库提取提取第11页/共77页第12页/共77页小小大大无无 有有无无 有有部分基因部分基因全部基因全部基因思考：思考： 如果想知道一种生物在个体发育的如果想知道一种生物在个体发育的不同阶段表不同阶段表达达的基因有什么不同，需要构建哪一种基因文库？的基因有什么不同，需要构建哪一种基因文库

6、？第13页/共77页思考思考1 1：如果我们对目的基因的碱基序列如果我们对目的基因的碱基序列完全未知，怎样办？如何操作？完全未知，怎样办？如何操作？思考思考2 2：如果我们已知目的基因的碱基序如果我们已知目的基因的碱基序列，可以怎样操作？列，可以怎样操作？ 第14页/共77页（技术）（技术）( (一一) )获得目的基因获得目的基因生生物物材材料料DNADNA提取提取限制限制酶酶DNADNA片段片段导入导入受体菌受体菌群体群体构建构建基因组基因组文库文库mRNAmRNA反转录反转录目的基目的基因因(cDNA)(cDNA)导入导入受体菌受体菌群体群体构建构建cDNAcDNA文库文库目的基因的核苷目

7、的基因的核苷酸序列是已知酸序列是已知 化学合成化学合成法法目的基目的基因因提取提取形成重组形成重组DNA分子分子形成重组形成重组DNA分子分子第15页/共77页思考思考1 1：如果我们对目的基因的碱基序列如果我们对目的基因的碱基序列完全未知，怎样办？如何操作？完全未知，怎样办？如何操作？思考思考2 2：如果我们已知目的基因的碱基序如果我们已知目的基因的碱基序列，可以怎样操作？列，可以怎样操作？思考思考3 3： 如果我们已知蛋白质的氨基酸序如果我们已知蛋白质的氨基酸序列，又可以怎样操作？列，又可以怎样操作？ 第16页/共77页第17页/共77页化化学学合合成成法法第18页/共77页（技术）（技术

8、）( (一一) )获得目的基因获得目的基因生生物物材材料料DNADNA提取提取限制限制酶酶DNADNA片段片段形成重组形成重组DNA分子分子导入导入受体菌受体菌群体群体构建构建基因组基因组文库文库mRNAmRNA反转录反转录目的基目的基因因(cDNA)(cDNA)形成重组形成重组DNA分子分子导入导入受体菌受体菌群体群体构建构建cDNAcDNA文库文库目的基因的核苷酸序目的基因的核苷酸序列是已知列是已知 化学合成化学合成法法目的基目的基因因提取提取或可推测的或可推测的第19页/共77页思考思考1 1：如果我们对目的基因的碱基序列如果我们对目的基因的碱基序列完全未知，怎样办？如何操作？完全未知，

9、怎样办？如何操作？思考思考2 2：如果我们已知目的基因的碱基序如果我们已知目的基因的碱基序列，可以怎样操作？列，可以怎样操作？思考思考3 3： 如果我们已知蛋白质的氨基酸如果我们已知蛋白质的氨基酸序列，又可以怎样操作？序列，又可以怎样操作？思考思考4 4：如果我们知道目的基因两端的部如果我们知道目的基因两端的部分碱基序列，还可以怎样操作？分碱基序列，还可以怎样操作？第20页/共77页第21页/共77页双链双链DNA1.变性变性升温升温至至95单链单链DNA2.复性复性降温降温至至60引物与母引物与母链结合链结合3.延伸延伸升温升温至至72DNA聚合酶聚合酶解旋解旋PCRPCR技术与原理技术与原

10、理Taq DNA聚合酶聚合酶有耐高温的特点有耐高温的特点第22页/共77页聚合酶链式反应聚合酶链式反应(PCR(PCR技术技术) )扩增扩增原理：原理：目的：目的：前提：前提：条件：条件：DNA复制复制获得大量的目的基因获得大量的目的基因有一段已知目的基因（两端有一段已知目的基因（两端）的核苷酸序列）的核苷酸序列,以便根据这以便根据这一序列合成一序列合成引物引物。模板模板DNA（目的基因）（目的基因）耐高温耐高温DNADNA聚合酶聚合酶(TaqDNA(TaqDNA聚合酶聚合酶) )四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸两种两种DNADNA引物引物第23页/共77页（技术）（技术）( (一一) )获得目的

11、基因获得目的基因生生物物材材料料DNADNA提取提取限制限制酶酶DNADNA片段片段形成重组形成重组DNA分子分子导入导入受体菌受体菌群体群体构建构建基因组基因组文库文库mRNAmRNA反转录反转录目的基目的基因因(cDNA)(cDNA)形成重组形成重组DNA分子分子导入导入受体菌受体菌群体群体构建构建cDNAcDNA文库文库目的基因的核苷酸序目的基因的核苷酸序列是已知列是已知 化学合成化学合成法法3.3.利用利用PCRPCR技术扩增技术扩增目的基目的基因因提取提取获取大量目的基因获取大量目的基因或可推测的或可推测的第24页/共77页第一个循环第一个循环第第二二个个循循环环第第三三个个循循环环

12、最快第几轮能得到目的基因？最快第几轮能得到目的基因？第25页/共77页DNADNA分子分子目的基因目的基因解旋酶解旋酶高温（高温（加热至加热至9595）RNARNA引物引物DNADNA引物引物解旋酶、解旋酶、DNADNA聚合酶等聚合酶等TaqDNATaqDNA聚合酶聚合酶第26页/共77页DNADNA合成仪合成仪PCRPCR扩增仪扩增仪第27页/共77页（技术）（技术）( (一一) )获得目的基因获得目的基因问题：问题：怎样将目的基因与质粒进行重组？怎样将目的基因与质粒进行重组？第28页/共77页质粒质粒目的基因目的基因限制酶限制酶DNA连接酶连接酶重组重组DNA第29页/共77页同一种限制酶

13、切割同一种限制酶切割质粒质粒外源基因外源基因重组重组DNA分子分子（重组质粒）（重组质粒）DNA连接酶连接酶第30页/共77页第31页/共77页第32页/共77页问题问题2：形成的重组质粒导入受体细胞后，除了能形成的重组质粒导入受体细胞后，除了能够稳定存在外，并且可以遗传给下一代。同时，够稳定存在外，并且可以遗传给下一代。同时，使目的基因在受体细胞中表达和发挥作用，需要使目的基因在受体细胞中表达和发挥作用，需要对重组质粒作怎样的修饰？对重组质粒作怎样的修饰？据图回答：据图回答：一个表达载体的组成，除了目的一个表达载体的组成，除了目的基因外，还必须有哪些基本元件？基因外，还必须有哪些基本元件？第

14、33页/共77页( (二二) )形成重组形成重组DNADNA分子（构建基因分子（构建基因表达载体表达载体) )基因表基因表达载体达载体的组成的组成启动子启动子目的基因目的基因终止子终止子复制起点复制起点标记基因标记基因（技术）（技术）( (一一) )获得目的基因获得目的基因通常用通常用同一种同一种限制酶切割目的基因和载体限制酶切割目的基因和载体( (质粒质粒) )，形成相同，形成相同的粘性末端，再用的粘性末端，再用DNADNA连接酶将二者连接连接酶将二者连接, ,形成重组形成重组DNADNA分子（分子（基因表达载体）。基因表达载体）。第34页/共77页第35页/共77页第36页/共77页第37

15、页/共77页( (三三) )将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞( (二二) )形成重组形成重组DNADNA分子（构建基因表达载体分子（构建基因表达载体) )（技术）（技术）( (一一) )获得目的基因获得目的基因第38页/共77页重组质粒重组质粒大肠杆菌的拟核大肠杆菌的拟核目的基因目的基因氨苄青霉素抗性基因氨苄青霉素抗性基因（标记基因）（标记基因）将细菌用将细菌用CaCl2处理，使处理，使细胞处于感受态，可促细胞处于感受态，可促进细胞吸收进细胞吸收DNA分子分子如果是导入微生物（如细菌）如果是导入微生物（如细菌）第39页/共77页 感受态感受态：细胞处于容易吸收外源性细胞处于容易吸收

16、外源性DNA的状态。的状态。 处于感受态的细胞称为处于感受态的细胞称为感受态细胞感受态细胞.042如果是导入微生物（如细菌）如果是导入微生物（如细菌）第40页/共77页( (三三) )目的基因导入受体细胞目的基因导入受体细胞1. 1. 转基因微生物转基因微生物重组重组DNADNA分子分子( (基因表达载体基因表达载体) )CaClCaCl2 2处理处理感受态细感受态细菌细胞菌细胞( (工程菌工程菌) ) 目的基目的基因随受因随受体细胞体细胞的繁殖的繁殖而复制而复制增大细胞壁通透性增大细胞壁通透性( (二二) )形成重组形成重组DNADNA分子（构建基因表达载体分子（构建基因表达载体) )（技术

17、）（技术）( (一一) )获得目的基因获得目的基因吸收吸收DNA分子分子重组重组 DNA进入细菌细胞进入细菌细胞第41页/共77页如果是导入动物细胞如果是导入动物细胞显微注射仪显微注射仪受精卵受精卵思考：思考：培育转基因动物时，受培育转基因动物时，受体细胞能否采用动物体细胞能否采用动物体体细胞细胞？试说明理由。一？试说明理由。一般可以采用动物的什么般可以采用动物的什么细胞？细胞？第42页/共77页( (三三) )目的基因导入受体细胞目的基因导入受体细胞1. 1. 转基因微生物转基因微生物重组重组DNADNA分子分子( (基因表达载体基因表达载体) )CaClCaCl2 2处理处理感受态细感受态

18、细菌细胞菌细胞( (工程菌工程菌) ) 目的基目的基因随受因随受体细胞体细胞的繁殖的繁殖而复制而复制增大细胞壁透性增大细胞壁透性2. 2. 转基因动物转基因动物重组重组DNADNA分子分子显微注射显微注射受精卵受精卵或早或早期胚胎细胞期胚胎细胞( (整合到染色整合到染色体体DNADNA上上) )转基因转基因动动 物物动物细胞培动物细胞培养养胚胎移植胚胎移植( (二二) )形成重组形成重组DNADNA分子（构建基因表达载体分子（构建基因表达载体) )（技术）（技术）( (一一) )获得目的基因获得目的基因吸收吸收DNA分子分子重组重组 DNA进入细菌细胞进入细菌细胞或病毒侵染或病毒侵染第43页/

19、共77页思考：思考：1、如果是导入植物细胞，最好以什么、如果是导入植物细胞，最好以什么细胞为受体细胞？一般采用的运载体又细胞为受体细胞？一般采用的运载体又是什么？是什么？2、比如：培育抗虫棉，怎样操作才能、比如：培育抗虫棉，怎样操作才能成功导入？成功导入？第44页/共77页农杆菌转化法农杆菌转化法农杆菌的农杆菌的TiTi质粒质粒T-DNAT-DNA：( (可转移的可转移的DNADNA） 可转移可转移（也可以将目的基因转移）（也可以将目的基因转移）至受体细至受体细胞中，并且整合到受体细胞染色体的胞中，并且整合到受体细胞染色体的DNADNA上。上。第45页/共77页农杆菌转化法农杆菌转化法第46页

20、/共77页3. 3. 转基因植物转基因植物重组重组DNADNA分子分子农杆菌农杆菌植物体细胞植物体细胞( (整合到细胞整合到细胞染色体染色体DNADNA上上) )侵染侵染植物组植物组织培养织培养转基因转基因植物植物农杆菌转化法农杆菌转化法第47页/共77页利用压缩气体产生的动利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒力，将包裹在金属颗粒（有钨粉粒子和金粉粒（有钨粉粒子和金粉粒子，粒子的直径一般在子，粒子的直径一般在0.64um）表面的表达）表面的表达载体载体DNA打入受体细胞打入受体细胞中，使目的基因与其整中，使目的基因与其整合并表达的方法。合并表达的方法。 这是单子叶植物中常这是单子叶植物中常

21、用的一种基因转化方法用的一种基因转化方法，但是成本太高。，但是成本太高。基因枪基因枪第48页/共77页花粉管花粉管卵细胞卵细胞花粉管通道法花粉管通道法受精后 花粉管通道法花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加DNADNA（含目的（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。第49页/共77页3. 3. 转基因植物转基因植物重组重组DNADNA分子分子农杆菌农杆菌植物体细胞植物体细胞( (整合到细胞整合到细胞染色体染色体DNADNA上上)

22、 )侵染侵染植物组植物组织培养织培养转基因转基因植物植物基因枪或基因枪或花粉管通道花粉管通道法法农杆菌转化法农杆菌转化法第50页/共77页( (三三) )目的基因导入受体细胞目的基因导入受体细胞( (二二) )形成重组形成重组DNADNA分子（构建基因表达载体分子（构建基因表达载体) )（技术）（技术）( (一一) )获得目的基因获得目的基因( (四四) )目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定问题问题1 1：根据中心法则，目的基因怎样根据中心法则，目的基因怎样表达？成功表达的标志是什么？表达？成功表达的标志是什么？第51页/共77页按照基因表达顺序逐步检测，逐步过关按照基因表达顺序逐步检测

23、，逐步过关检测转基因生物体内是否已含有目的基因检测转基因生物体内是否已含有目的基因检测目的基因是否已转录出了检测目的基因是否已转录出了mRNAmRNA检测目的基因是否已翻译出了蛋白质检测目的基因是否已翻译出了蛋白质检测个体是否具有目的基因所对应表现型检测个体是否具有目的基因所对应表现型如何检测如何检测 ？第52页/共77页思考：通常为什么要选用含有两个标记基因的运载体？思考：通常为什么要选用含有两个标记基因的运载体？第53页/共77页没有质粒没有质粒含目的基因的质粒含目的基因的质粒正常质粒正常质粒第54页/共77页没有质粒没有质粒含目的基因的质粒含目的基因的质粒正常质粒正常质粒第55页/共77

24、页DNA分子杂交法检测目的基因分子杂交法检测目的基因第56页/共77页DNADNA分子杂交法分子杂交法制作方法制作方法：化学合成或化学合成或PCRPCR法合成法合成特点：特点：原理：原理： 碱基互补配对，检测未知碱基互补配对，检测未知DNADNA分子分子用途：用途： 目的基因检测目的基因检测,DNA,DNA指纹指纹, ,亲缘关系测定亲缘关系测定, ,基因诊断。基因诊断。DNADNA分子探针法分子探针法第57页/共77页检测转基因生物体内是否已含有目的基因检测转基因生物体内是否已含有目的基因同理：同理： 核酸分子杂交技术核酸分子杂交技术按照基因表达顺序逐步检测，逐步过关按照基因表达顺序逐步检测，

25、逐步过关检测目的基因是否已转录出了检测目的基因是否已转录出了mRNAmRNA第58页/共77页检测转基因生物体内是否已含有目的基因检测转基因生物体内是否已含有目的基因检测目的基因是否已转录出了检测目的基因是否已转录出了mRNAmRNA检测目的基因是否已翻译出了检测目的基因是否已翻译出了蛋白质蛋白质利用利用抗原抗原-抗体抗体的特异性结合的特异性结合按照基因表达顺序逐步检测，逐步过关按照基因表达顺序逐步检测，逐步过关问题：问题：如何运用抗原抗体特异性结合的原理检如何运用抗原抗体特异性结合的原理检测目的基因是否翻译出了蛋白质？测目的基因是否翻译出了蛋白质？第59页/共77页检测目的基因是否已翻译出了

26、检测目的基因是否已翻译出了蛋白质蛋白质利用利用抗原抗原-抗体抗体的特异性结合的特异性结合将目的基因表达出将目的基因表达出的蛋白质作为抗原的蛋白质作为抗原制备抗体制备抗体第60页/共77页检测转基因生物体内是否已含有目的基因检测转基因生物体内是否已含有目的基因检测目的基因是否已转录出了检测目的基因是否已转录出了mRNAmRNA检测目的基因是否已翻译出了蛋白质检测目的基因是否已翻译出了蛋白质检测个体是否具有目的基因所对应表现型检测个体是否具有目的基因所对应表现型按照基因表达顺序逐步检测，逐步过关按照基因表达顺序逐步检测，逐步过关问题：问题：除了上述分子检测外，你能否在个体生物学水平上进行除了上述分

27、子检测外，你能否在个体生物学水平上进行检测？例如，如何检测转基因抗虫棉具有抗虫特性？检测？例如，如何检测转基因抗虫棉具有抗虫特性？ 第61页/共77页转基因转基因抗虫植物抗虫植物用棉花叶片饲喂棉铃虫，用棉花叶片饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达得到表达。第62页/共77页( (四四) )目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定1.1.目的基因是否导入：目的基因是否导入：(1)(1)标记基因检测法。标记基

28、因检测法。(2)DNA(2)DNA分子杂交法分子杂交法( (DNADNA探针检测法探针检测法) )2.2.目的基因是否表达：目的基因是否表达：(3)(3)是否出现目的基因所控制的性状是否出现目的基因所控制的性状: :(2)(2)是否翻译合成了蛋白质：是否翻译合成了蛋白质： 抗原抗体杂交检测法抗原抗体杂交检测法核酸核酸分子杂交法分子杂交法（1 1）是否转录出了信使）是否转录出了信使RNARNA：观察法观察法第63页/共77页第64页/共77页基因文基因文库库获取目的基因获取目的基因基因组文库基因组文库cDNAcDNA文库文库化学合成化学合成法法PCRPCR扩增法扩增法运载体（细菌质粒）运载体（细

29、菌质粒）酶切、连接，构建酶切、连接，构建重组重组DNADNA（基因表达载体）（基因表达载体）受体细胞受体细胞导入导入筛选筛选动物受精卵动物受精卵植物体细胞植物体细胞细菌细细菌细胞胞组织培组织培养养发酵工发酵工程程胚胎移植胚胎移植表达产物表达产物转基因动物转基因动物转基因植物转基因植物目的基因的表达与鉴定目的基因的表达与鉴定总结：总结：第65页/共77页1.1.整体原理：整体原理：人工的基因重组人工的基因重组2.2.各步骤原理：各步骤原理：（1 1）基因能转移：）基因能转移：基因是独立的遗传单位基因是独立的遗传单位（2 2）不同生物的基因能拼接：）不同生物的基因能拼接：不同生物的不同生物的DNA

30、DNA有着相同的双螺旋结构和碱基互补配对原则有着相同的双螺旋结构和碱基互补配对原则，限制酶和连接酶的作用。，限制酶和连接酶的作用。（3 3）同一基因在不同生物的细胞中合成相同的蛋白质：）同一基因在不同生物的细胞中合成相同的蛋白质：复制、转录和翻译过程相同，密码子具有通用性复制、转录和翻译过程相同，密码子具有通用性3.3.优点：优点：定向改变生物的遗传特性定向改变生物的遗传特性第66页/共77页例例1 1 科学工作者分离得到了某真核生物的基因科学工作者分离得到了某真核生物的基因A A，将其解离成两条，将其解离成两条具有互补关系的单链，其中的一条与基因具有互补关系的单链，其中的一条与基因A A的信

31、使的信使RNARNA进行配对，杂进行配对，杂交后可以观察到如图所示的结构对此结果的合理解释是（）交后可以观察到如图所示的结构对此结果的合理解释是（）A A1 1、3 3、5 5、7 7为为DNA/RNADNA/RNA的杂交体，的杂交体，2 2、4 4、6 6为单链为单链DNADNA部分部分B B1 1、3 3、5 5、7 7为为DNA/RNADNA/RNA的杂交体，的杂交体，2 2、4 4、6 6为单链为单链RNARNA部分部分C C1 1、3 3、5 5、7 7为双链为双链DNADNA部分，部分，2 2、4 4、6 6为为DNA/RNADNA/RNA的杂交体的杂交体D D1 1、3 3、5

32、5、7 7为单链为单链RNARNA部分，部分，2 2、4 4、6 6为为DNA/RNADNA/RNA的杂交体的杂交体A第67页/共77页例例2 2. .质粒是基因工程中最常用的运载体，质粒上有标记基质粒是基因工程中最常用的运载体，质粒上有标记基因（如图所示），通过标记基因可以推知外源基因（目的因（如图所示），通过标记基因可以推知外源基因（目的基因）是否转移成功。外源基因插入的位置不同，细菌在基因）是否转移成功。外源基因插入的位置不同，细菌在培养基上的生长情况也不同。右图表示外源基因插入位置培养基上的生长情况也不同。右图表示外源基因插入位置（插入点有（插入点有a a、b b、c c），请据下表细

33、菌生长情况，推测），请据下表细菌生长情况，推测三种重组细菌与外源基因插入点相对应的一组是三种重组细菌与外源基因插入点相对应的一组是 A是是c、是是a 、是是 b B 是是c和和b、是是b、是是cC是是c和和b、是是c、是是b D 是是a、是是b、是是cbacAbca第68页/共77页例例3.培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan）常作为）常作为标记基因标记基因,只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下图为获得抗虫棉的技术流程上生长。下图为获得抗虫棉的技术流程. 抗虫基因抗虫基因

34、含含kankan质粒质粒重组质重组质粒粒土壤土壤农杆菌农杆菌含重组质粒含重组质粒土壤农杆菌土壤农杆菌A A构建构建C C诱导诱导选择选择导入导入转基因转基因抗虫植株抗虫植株再生植再生植株株愈伤愈伤组织组织离体棉花离体棉花叶片组织叶片组织侵染侵染B B培养培养选择选择分分化化D D检测检测（1）A过程需要的酶有过程需要的酶有 _ 。（2）B过程及其结果体现了质粒作为运载体必须具过程及其结果体现了质粒作为运载体必须具备备 的两个条件是的两个条件是_ 。（3）C过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入素外，还必须加入_。限制性核酸内切酶和限制性

35、核酸内切酶和DNA连接酶连接酶能够自我复制、具有标记基因能够自我复制、具有标记基因卡那霉素卡那霉素第69页/共77页4.如果利用如果利用DNA分子杂交原理对再生植株进行检测，分子杂交原理对再生植株进行检测，D过程应该用过程应该用_作为探针。作为探针。 5.科学家发现转基因植株的卡那霉素抗性基因的传递科学家发现转基因植株的卡那霉素抗性基因的传递符合孟德尔遗传规律。符合孟德尔遗传规律。将转基因植株与将转基因植株与_杂交，其后代杂交，其后代中抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型的数量比为中抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型的数量比为1：1。若该转基因植株自交，则其后代中抗卡那霉素型与若该转基因植株自交，则其后代中抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型的数量比为卡那霉素敏感型的数量比为_。若将该转基因植株的花药在卡那霉素培养基上作离若将该转基因植株的花药在卡那霉素培养基上作离体培养，则获得的再生植株群体中抗卡那霉素型植株体培养，则