基因操作原理PPT学习教案

1、会计学1基因操作原理基因操作原理第1页/共98页核酸的凝胶电泳 它是一种分析鉴定重组DNA分子及蛋白质与核酸相互作用的重要实验手段，同时也是分子生物学研究方法的技术基础。 第2页/共98页彼此分开。第3页/共98页第4页/共98页第5页/共98页琼脂糖凝胶电泳 琼脂糖是一种从红色海藻中提取出的线性多糖聚合物。 分为常熔点的琼脂糖和低熔点（LMP）琼脂糖。 第6页/共98页第7页/共98页第8页/共98页第9页/共98页Separation Range Vs. % AgaroseLow Geling Agarose 第10页/共98页第11页/共98页第12页/共98页Sample Well 2

2、5 ng 1 kb ladder0.8% Agarose124681012kbAgarose Gel ElectrophoresisEtBr Detection Limit: 5-10 ng DNA第13页/共98页根据标准DNA相对迁移距离推测待测定的DNA片段的大小第14页/共98页Agarose gel electrophoresis第15页/共98页Agarose gel electrophoresis第16页/共98页第17页/共98页PolyAcrylamide Gels第18页/共98页第19页/共98页第20页/共98页PFGE can resolve large DNA fr

3、agments第21页/共98页第22页/共98页第23页/共98页第24页/共98页第25页/共98页ParameterConcentrationTemplatepHdNTPsGelatinPrimersMg2+ oncentrationEnzymeTotal volume10 attomoles(1106 molecules)8.4（10mM Tris-Hcl）200 M(each one)100 g/ml (optional)0.5 M(each one);(0.11.0M)0.5mM50% at 95 for 40 min1.110-4 substitutions per cycle0

4、.5mM10mM5 to 3only5 adenosines第29页/共98页第30页/共98页第31页/共98页第32页/共98页第33页/共98页第34页/共98页第35页/共98页第36页/共98页第37页/共98页第38页/共98页第39页/共98页核酸杂交常用几种膜的核酸杂交常用几种膜的性能比较性能比较第40页/共98页第41页/共98页第42页/共98页第43页/共98页第44页/共98页（a）（b）（c）（d）（e）基因组基因组DNADNA限制片段限制片段硝酸纤维素滤膜硝酸纤维素滤膜同探针同源杂交的同探针同源杂交的基因基因DNA片段片段X光底片光底片第45页/共98页第46页/共

5、98页第47页/共98页第48页/共98页第49页/共98页第50页/共98页第51页/共98页第52页/共98页第53页/共98页第54页/共98页第55页/共98页第56页/共98页第57页/共98页第58页/共98页第59页/共98页足迹实验（足迹实验（footprinting footprinting assayassay） 第60页/共98页第61页/共98页第62页/共98页第63页/共98页第64页/共98页凝胶电泳凝胶电泳和和第65页/共98页me硫酸二甲酯分离分离DNA并用并用六氢吡啶切割六氢吡啶切割第66页/共98页第67页/共98页第68页/共98页核苷酸链的核苷酸链的3-末端，从而终末端，从而终止止DNA链的延长。链的延长。第69页/共98页第70页/共98页第71页/共98页第72页/共98页第73页/共98页第74页/共98页第75页/共98页第76页/共98页第77页/共98页第78页/共98页第79页/共98页显示的相应谱带，直接读出显示的相应谱带，直接读出待测待测DNA片断的核苷酸序列。片断的核苷酸序列。第80页/共98页第81页/共98页第82页/共98页第83页/共98页(A)的的N3 410倍倍第84页/共98页第85页/共98页第86页/共98页第87页/共98页第88页/共98页第89页/共98页第90页