试验五细菌芽孢染色

1、实验五一一细菌芽艳染色山东大学生命科学学院09级四班张行润200900140177摘要细菌的芽抱具有厚而致密的壁，透性低，不易着色，若用一般染色法只能使 菌体着色而芽抱不着色(芽抱呈无色透明状)。芽抱染色法就是根据芽抱既难以 染色而一旦染上色后乂难以脱色这一特点而设计的。所有的芽抱染色法都基丁一个原则：除了用着色强的染料外，还须要加热，以促进芽抱着色，再使菌体脱色， 而芽抱上的染料则难以渗出，故仍保留原有的颜色，然后用对比度强的染料对菌 体复染，使菌体和芽抱呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽抱，便丁观察。关键词芽抱(gemma of a fungus ) 芽抱染色法(Spore stai

2、ning ) 复染(counterstain )前言细菌的芽抱的某些细菌的特殊结构。芽抱是某些细菌生长到一定阶段在体内 形成的一个圆形或椭圆形的休眠体，它对不良环境具有很强的抗性。在合适条件 下，可吸水萌发，重新形成一个新的菌体。芽抱的大小、形状及其在菌体内的位 置是鉴定细菌的重要依据。在一般实验室中通常用芽抱染色法来观察其形态。此外，由丁芽抱具有很强的抗性，因此在生产实践中都以是否有杀死抗性最强的芽 抱来评定高温灭菌及某些化学杀菌剂的效果。一、实验目的1. 学习并掌握芽抱染色法2. 了解芽抱杆菌的形态特征3. 巩固显微镜操作技术及无菌操作技术二、实验原理芽抱是芽抱杆菌届和梭菌届细菌生长到一定

3、阶段形成的一种抗逆性很强的 休眠体结构，液被称为内生抱子，通常呈圆形或椭圆形。细菌能否形成芽抱及芽 抱的形状，着生位置、芽抱囊是否膨大等特征都是鉴定细菌的重要指标。与正常细胞或菌体相比，芽抱壁厚、透性低而不易着色，但是芽抱一旦着色就很难被脱 色。利用这一特点，首先用着色能力较强的染料，如孔雀绿(malachite green)或碱性品红(basicfuchsin)在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进 入芽抱，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽抱的染料则难以透出。再用对比度大的复染剂(如番红液)染色后，菌体染上复染剂颜色，而芽抱仍为原来的颜色，这样就可以将两 者区别开来

4、。三、实验器材A. 菌种枯草芽抱杆菌，梭状芽抱杆菌B. 溶液和试剂5呀L雀绿溶液，0.5%®红水溶液C. 仪器和其它用品洒精灯，洒精，木火，香柏油，二甲苯，载玻片，盖玻片显微镜，香柏油，擦镜 纸和接种针等四、实验内容1）制片按常规涂片、干燥、固定。2）染色加数滴5%1雀绿染液丁涂片上，用木火火住载玻片一端，在微火上加热至染料冒蒸汽并开始计时。维持5min。加热过程中及时补充染液。切勿让涂片干涸。3）水洗待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗载玻片背面，直至流出的水无色为止。4）复染用0.5%番红染液复染1.5min。5）水洗用缓流水洗后，干燥。6）镜检先低倍镜，再高倍镜，最后油镜观察。五、实

5、验结果芽抱呈绿色，芽抱囊及营养体为红色。枯草芽抱杆菌芽抱呈 椭圆到柱状，位 丁菌体中央或稍偏，菌体基本无大变化；梭状芽抱杆菌芽胞呈圆形，比菌体粗， 位丁菌体顶端，使细菌呈鼓槌状。枯草芽抱杆菌（10X 100）图二：梭状芽胞杆菌（10 X 100）芽抱呈绿色，芽抱囊及营养体为红色六、实验分析由于芽抱壁厚、透性低上不易着色，当用番红、结晶紫等进行单染色时，菌 体和芽抱囊着色，而芽抱囊内的芽抱不着色或仅显很淡的颜色， 游离的芽抱呈淡 红或淡蓝紫色的圈。但是用着色力强的染色剂孔雀绿， 在加热条件下染色，使染 料不仅进人菌体也可进人芽抱内， 进人菌体的染料经水洗后被脱色，而芽抱一经 染色便难以被水洗脱。

6、当用对比度大的复染色剂番红染色后， 芽抱仍保留初染剂 孔雀绿的绿色,而菌体和芽抱囊被染成复染色剂的颜色, 使芽抱和菌体更易于区 分。另外，要保证本实验获得成功，必须要注意以下几点选用适当菌龄的菌种，幼龄的尚未形成芽抱，而老龄菌芽抱囊已破裂加热染色时必须维持在染液微冒蒸汽的状态，加热沸腾会导致菌体或芽抱囊破裂，如热不够则难以着色脱色必须等玻片冷却后进行，否则骤然用冷水冲洗会导致玻片破裂实验小结此次芽抱染色实验，首先，收获的当然是芽抱染色方法。其次，对芽抱有了 一个系统的认识，认识到了多种形态的芽抱和芽抱对于细菌的重要性， 芽抱不仅 仅是生物的休眠体，芽抱的各种特性还是进行生物物种鉴定和分析的重要依据， 通过本次试验，我对细菌的芽抱的描述方法也有了 一定的了解。 相信本次实验会 对以后的学习和研究等方面大