分光光度法在药品中应用

1、紫外紫外- -可见分光光度法在可见分光光度法在药品检验中的应用药品检验中的应用1234分光光度法的基本原理分光光度法的基本原理紫外分光光度计紫外分光光度计紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法在药检中应用在药检中应用content概述概述一一.概述：概述：l 分光光度法是通过测定物质在某些特定波分光光度法是通过测定物质在某些特定波长处或一定范围内的吸光度或发光强度，对物长处或一定范围内的吸光度或发光强度，对物质进行定性和定量的分析方法。紫外质进行定性和定量的分析方法。紫外- -可见分可见分光光度法具有操作简便快速、专属性和灵敏度光光度法具有操作简便快速、专属性和灵敏度高等优点。因此在药品的分析检

2、验中被广泛采高等优点。因此在药品的分析检验中被广泛采用。在各国药典中药品的理化常数、鉴别、检用。在各国药典中药品的理化常数、鉴别、检查和含量测定等各个项目中都能见到紫外查和含量测定等各个项目中都能见到紫外- -可可见分光光度法的应用实例。见分光光度法的应用实例。一一.概述：概述：l吸收光谱：发射连续光谱的光源（如氘灯和钨吸收光谱：发射连续光谱的光源（如氘灯和钨丝灯）发出的光通过透明物质（固体、液体或丝灯）发出的光通过透明物质（固体、液体或气体）后，一些波长的单色光成分被该物质选气体）后，一些波长的单色光成分被该物质选择吸收，在原来的连续光谱上出现若干条暗线择吸收，在原来的连续光谱上出现若干条暗

3、线或暗带，这种光谱叫做吸收光谱。或暗带，这种光谱叫做吸收光谱。1234分光光度法的基本原理分光光度法的基本原理紫外分光光度计紫外分光光度计紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法在药检中应用在药检中应用content概述概述二二.分光光度法的基本原理分光光度法的基本原理在紫外和可见光区，灵敏度和精密度较高，在紫外和可见光区，灵敏度和精密度较高，一般每一般每1 1mlml溶液中含有几微克（溶液中含有几微克（ g g）的物质的物质即可测定，误差约为即可测定，误差约为1-2%1-2%，在此区域内，在此区域内，物质对光的吸收主要系分子中电子的能级物质对光的吸收主要系分子中电子的能级跃迁所致，同时伴有分子的

4、振动和转动能跃迁所致，同时伴有分子的振动和转动能级的变化，电子吸收光谱一般比较平缓，级的变化，电子吸收光谱一般比较平缓，选择性不如红外光区，选择性不如红外光区，故紫外故紫外- -可见光区主可见光区主要用于定量分析以及作为物理常数的测定。要用于定量分析以及作为物理常数的测定。红外光区的灵敏度和精密度较低，一般需要红外光区的灵敏度和精密度较低，一般需要数百微克（数百微克（ g g）的供试品进行测定，此区域的供试品进行测定，此区域内，物质对光的吸收系由分子中振动和转动内，物质对光的吸收系由分子中振动和转动能级的跃迁引起，红外光谱的特征性很强，能级的跃迁引起，红外光谱的特征性很强，特别是在特别是在7-

5、157-15 m m（称为称为“指纹区指纹区”），吸收），吸收峰很多，而且尖锐。除光学异构体外，不会峰很多，而且尖锐。除光学异构体外，不会遇到两种不同的化学物质完全相同的红外吸遇到两种不同的化学物质完全相同的红外吸收光谱，收光谱，故红外区主要用于鉴别和分析物质故红外区主要用于鉴别和分析物质的结构。的结构。透光率（透光率（T T）：单色光通过一物质的溶液时，）：单色光通过一物质的溶液时，透过光的强度（透过光的强度（I I）与入射光的强度（与入射光的强度（I I0 0）之之比。即：比。即：T=I/IT=I/I0 0。吸 光 度 （吸 光 度 （ A A ） ：） ： 透 光 率 的 负 对 数 值

6、透 光 率 的 负 对 数 值 . .即即: :A=log1/T= -A=log1/T= -logTlogT比耳比耳- -郎伯定律（郎伯定律（Beer -Lamberts LawBeer -Lamberts Law）：）：吸光度（吸光度（A A）与）与溶液的浓度溶液的浓度（C C）和）和光路长光路长（L L）是成正比例的。即：是成正比例的。即：A=ECLA=ECL比耳比耳- -郎伯定律适用范围：郎伯定律适用范围：l1.1.溶液的浓度不能过高或过低，使测溶液的浓度不能过高或过低，使测定结果的相对误差最小的最佳透射率定结果的相对误差最小的最佳透射率为为T=37%T=37%左右。左右。l2.2.所用

7、溶剂不得与测定物质有分子间所用溶剂不得与测定物质有分子间缔合，生成复合物、异构化或出现酸缔合，生成复合物、异构化或出现酸碱平衡碱平衡。1234分光光度法的基本原理分光光度法的基本原理紫外分光光度计的使用紫外分光光度计的使用紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法在药检中应用在药检中应用content概述概述三三.紫外紫外-可见分光光度计的使用可见分光光度计的使用l1.1.基本构造：基本构造：稳压电源光源波长选择装置样品池检测器记录装置2.2.仪器的校正和检定仪器的校正和检定l（1 1）波长的校正：由于温度变化对机械部分）波长的校正：由于温度变化对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除的影

8、响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所用仪器进行全面校正检定外，还应应定期对所用仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。于测定前校正测定波长。l钬玻璃在钬玻璃在279.4279.4nmnm、287.5nm287.5nm、333.7nm333.7nm、 360.9nm360.9nm、418.5nm418.5nm、460.0nm460.0nm、484.5nm484.5nm、536.2nm536.2nm与与637.5637.5nmnm的波长处有尖锐的吸收的波长处有尖锐的吸收峰，可作为波长校正用。峰，可作为波长校正用。 取在取在120120 C C干燥至恒重的基准重铬酸钾约干燥至恒重

9、的基准重铬酸钾约6060mgmg，精密称定，用精密称定，用0.0050.005mol/Lmol/L硫酸溶液溶解硫酸溶液溶解并稀释至并稀释至10001000mlml，在规定的波长处测定吸光度在规定的波长处测定吸光度并计算其吸收系数。并计算其吸收系数。（2 2）吸光度的准确度：）吸光度的准确度：波长波长（nmnm）235235（最小）（最小）257257（最大）（最大）313313（最小）（最小）350350（最大）（最大）吸收系数吸收系数（E E1%1%1cm1cm）124.5124.5144144.0.048.648.6106.6106.6许可范围许可范围123.0-126.0123.0-12

10、6.0142.8-146.2142.8-146.247.0-50.347.0-50.3105.5-108.5105.5-108.5 （3 3）杂散光的检查：）杂散光的检查： 按下表的试剂和浓度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在规定的波长处测定透光率，应符合表中的规定。试剂试剂浓度浓度%（g/ml）波长波长（nmnm）透光率透光率（%）碘化钠碘化钠1.00 1.00 220220 0.8亚硝酸钠亚硝酸钠5.00 5.00 340340 0.83.3.紫外分光光度法对溶剂的要求紫外分光光度法对溶剂的要求 用用1 1cmcm石英吸收池盛溶剂，以空气为空白，测石英吸收池盛溶剂，以空气为空白，测定

11、其吸光度，溶剂和吸收池的吸光度应满足以下定其吸光度，溶剂和吸收池的吸光度应满足以下要求：要求：波长波长 吸光度要求吸光度要求220220nm-240nmnm-240nm不得超过不得超过0.400.40241241nm-250nmnm-250nm不得超过不得超过0.200.20251251nm-300nmnm-300nm不得超过不得超过0.100.10300300nmnm以上以上 不得超过不得超过0.050.054.4.紫外分光光度法测定法紫外分光光度法测定法测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶剂测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用为空白对照，采用1 1

12、cmcm的石英吸收池，在规定的吸收峰波的石英吸收池，在规定的吸收峰波长长 2 2nmnm以内测试几个点的吸光度，以核对供试品的吸收以内测试几个点的吸光度，以核对供试品的吸收峰波长是否准确。峰波长是否准确。应以吸光度最大的波长作为测定波长。应以吸光度最大的波长作为测定波长。仪器的狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则仪器的狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸光度会偏低。狭缝宽度的选择，应以减小狭缝宽测得的吸光度会偏低。狭缝宽度的选择，应以减小狭缝宽度时供试品的吸光度不再增加为准。度时供试品的吸光度不再增加为准。由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品由于吸收池和溶

13、剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸光度后应减去空白读数，再计算含量。的吸光度后应减去空白读数，再计算含量。1234分光光度法的基本原理分光光度法的基本原理紫外分光光度计的使用紫外分光光度计的使用紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法在药检中应用在药检中应用content概述概述四四.紫外紫外- -可见分光光度法可见分光光度法在药品检验中的应用在药品检验中的应用l药典和药品标准中应用紫外药典和药品标准中应用紫外- -可见分光光可见分光光度法的项目有度法的项目有吸收系数、鉴别、颜色检查、吸收系数、鉴别、颜色检查、纯度检查、溶出度、含量均匀度检查和含纯度检查、溶出度、含量均匀度检查和含量测定量测

14、定等等。等等。1.吸收系数：吸收系数：l 药品的吸收系数是药品的理化特性常数，药品的吸收系数是药品的理化特性常数，可作为药品生产过程中精制纯化的一种指标。可作为药品生产过程中精制纯化的一种指标。对紫外区一定波长的光有特征吸收的药物进对紫外区一定波长的光有特征吸收的药物进行精制时，应进行到产品在其特定波长测定行精制时，应进行到产品在其特定波长测定吸收系数达到一个吸收系数达到一个稳定的最大值稳定的最大值时为止，因时为止，因此吸收系数同其它物理常数一样，也可作为此吸收系数同其它物理常数一样，也可作为判断药品纯度的依据。判断药品纯度的依据。2.鉴别：鉴别：l药物对光辐射的吸收特点（即其吸收光谱）药物对

15、光辐射的吸收特点（即其吸收光谱）可与其它化学的或物理的方法配合作为鉴别可与其它化学的或物理的方法配合作为鉴别的一种手段，即绘制出药物的吸收光谱曲线的一种手段，即绘制出药物的吸收光谱曲线与标准品的吸收光谱互相核对。与标准品的吸收光谱互相核对。l对于具有两个以上最大吸收的药物可以进一对于具有两个以上最大吸收的药物可以进一步简化操作，无需费时作吸收光谱曲线，只步简化操作，无需费时作吸收光谱曲线，只要测出各最大吸收波长处的吸收度，要测出各最大吸收波长处的吸收度，求出这求出这些吸收度的比值些吸收度的比值，测出它们相对位置的比值，测出它们相对位置的比值即可即可。维生素维生素B12B12的鉴别规定每的鉴别规

16、定每1 1mlml中含维生素中含维生素B B12122525 g g的水溶液，照分光光度法测定，在的水溶液，照分光光度法测定，在278278、361361与与550550nmnm的波长处有最大吸收。的波长处有最大吸收。 A361nmA361nm/ /A278nmA278nm应为应为1.70-1.881.70-1.88。 A361nmA361nm/ /A A550550nmnm应为应为3.15-3.453.15-3.45。 维生素B2水溶液的吸收光谱3.纯度检查：纯度检查：l若一种化合物对紫外光和可见光区的某一若一种化合物对紫外光和可见光区的某一波段呈光学透明（即不吸收或几乎不吸波段呈光学透明（

17、即不吸收或几乎不吸收），而不纯杂质有吸收时，则该物质的收），而不纯杂质有吸收时，则该物质的生产精制应当进行到生产精制应当进行到规定波长处的吸收系规定波长处的吸收系数降到最低时为止。数降到最低时为止。有些药物就以此作为有些药物就以此作为杂质限度检查的依据。此外，有些药物的杂质限度检查的依据。此外，有些药物的杂质是通过比色法与杂质对照品比较进行杂质是通过比色法与杂质对照品比较进行控制的。控制的。检查检查肾上腺素肾上腺素中的酮体：取肾上腺素，加中的酮体：取肾上腺素，加0.10.1mol/Lmol/L盐酸溶液，制成每盐酸溶液，制成每1 1mlml中含中含2 2mgmg的溶液，的溶液，照分光光度法，在照

18、分光光度法，在310310nmnm的波长处测定，吸光度的波长处测定，吸光度不得过不得过0.050.05。4.含量测定：含量测定：l药典中含量测定方法可分为：药典中含量测定方法可分为：l（1）对照品比较法）对照品比较法l（2）吸收系数法）吸收系数法l（3）比色法）比色法（1）对照品比较法：）对照品比较法：l应用范围：应用范围： 单一成分药剂的测定。单一成分药剂的测定。 混合物或复方制剂，但其它成分在被测组分混合物或复方制剂，但其它成分在被测组分的测定波长没有或几乎没有吸收的测定波长没有或几乎没有吸收 测定要求测定要求分别配制供试品溶液和对照品溶液分别配制供试品溶液和对照品溶液对照品溶液所含对照品

19、的量应为供试品溶液中被对照品溶液所含对照品的量应为供试品溶液中被测组分标示量的测组分标示量的 10%以内。以内。所用溶剂、其它试剂、操作方法和条件都应保持所用溶剂、其它试剂、操作方法和条件都应保持一致。一致。计算公式：计算公式： Cs=Cr*As/Ar Cs：供试品溶液的浓度供试品溶液的浓度 As：供试品溶液的吸光度供试品溶液的吸光度 Cr：对照品溶液的浓度对照品溶液的浓度 Ar：对照品溶液的吸光度对照品溶液的吸光度（2）吸收系数法：）吸收系数法：l应用范围：应用范围：单一成分药剂的测定。单一成分药剂的测定。混合物或复方制剂，但其它成分在被测组混合物或复方制剂，但其它成分在被测组分的测定波长没

20、有或几乎没有吸收分的测定波长没有或几乎没有吸收测定要求：测定要求：通常为测定最大吸收峰波长处的吸光度通常为测定最大吸收峰波长处的吸光度供试品溶液在测定波长处浓度与吸光度严格遵供试品溶液在测定波长处浓度与吸光度严格遵循比耳循比耳-郎伯定律，具有良好的线性关系。郎伯定律，具有良好的线性关系。测定条件和操作应与测定吸收系数时完全一致。测定条件和操作应与测定吸收系数时完全一致。吸收系数是用标准物质分别在经过校正的不同吸收系数是用标准物质分别在经过校正的不同型号分光光度计上进行多次测定求得的平均值。型号分光光度计上进行多次测定求得的平均值。特别注意仪器的校正和检定特别注意仪器的校正和检定计算公式：计算公式： A=ECL以中国药典以中国药典2000年版氯霉素含量测定为例年版氯霉素含量测定为例: 精密称取氯霉素精密称取氯霉素0.1009g，置置100ml量瓶中，量瓶中，加乙醇加乙醇10ml振摇使溶解，加水稀释至刻度，摇匀振摇使溶解，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取精密量取2ml，置置100ml量瓶中，加水稀释至刻量瓶中，加水稀释至