烯丙孕素口服液在靶动物猪的安全性研究报告

1、烯丙孕素口服液在靶动物猪的安全性研究报告摘要：本试验将24头达到性成熟的苏姜母猪随机分为4组，每组6头，采用多剂量水平给药进行靶动物安全性研究，其中受试药物设最大推荐剂量每头动物每日20mg烯丙孕素（相当于每次5ml）、2倍最大推荐剂量每头动物每日40mg烯丙孕素（相当于每次10ml）和3倍最大推荐剂量每头动物每日60mg烯丙孕素（相当于每次15ml）三个剂量组；另设一空白对照组，每头动物每日15ml洁净自来水，体积相当于3倍受试药推荐剂量的体积。通过一般临床观察、各组动物体重、血液学和血液生化学参数等指标及组织病理学检测或观察，评价烯丙孕素在临床用药的安全性。结果表明，试验期间各组猪均未死亡

2、且健康良好，期间临床表现正常，3倍最大推荐剂量组剖检动物各组织器官未发现病理变化。在血液生理指标及生化指标方面，推荐剂量组、2倍推荐剂量组、3倍最大推荐剂量组与空白对照组相比，除少部分指标外，其它各指标并无显著差异。试验结果说明，宁波第二激素厂生产的烯丙孕素在推荐剂量下使用在靶动物猪上具有较高的安全性。关键词：猪；烯丙孕素；靶动物安全性1 材料1.1 受试药试验药品：烯丙孕素口服液，含量规格为1ml:4mg包装规格为450ml/瓶，批号为160415；生产商为宁波第二激素厂。用法与用量：洒在饲料的表层，经口摄入。一日量，每头动物20mg烯丙孕素（相当于每次5ml）。连用18天。1.2实验动物及

3、入选标准试验拟选择达到性成熟的苏姜后备母猪进行靶动物安全性试验，实验地点为江苏泰兴苏姜种猪有限公司猪场，采用耳号标记识别，编号1-24。入选猪在试验前1 d须经兽医检查确认是处于良好的健康状况下。处于下列情况下的猪应从实验中剔除：适应期内濒死的猪；适应期内生病或受伤的猪；试验期内因疾病需要用其他药治疗的猪。1.3仪器及其他全自动生化分析仪和全自动血常规分析仪由泰州第四人民医院提供，一次性注射器，酒精棉球，记号，生化管与血常规管数个。2 方法2.1 试验动物饲养管理试验动物在实验前适应新环境1周。饲料采用江苏苏姜种猪有限公司专用饲料，定量采食，每日饲喂2次，一次0.6kg，清粪2次，每天24 h

4、自由饮用干净的自来水。2.2动物分组与给药24头达到性成熟的苏姜母猪随机分为4组，每组6头。受试药设三个剂量组，分别为1倍、2倍和3倍推荐剂量组，另设一空白对照组。具体分组和给药剂量如下：受试药物推荐剂量组，编号1-6，每头动物每日20mg烯丙孕素（相当于每次5ml）。药液洒在饲料的表层，经口摄入。连用18天。受试药物2倍推荐剂量组，编号7-12，每头动物每日40mg烯丙孕素（相当于每次10ml）。药液洒在饲料的表层，经口摄入。连用18天。受试药物3倍推荐剂量组，编号13-18，每头动物每日60mg烯丙孕素（相当于每次15ml）。药液洒在饲料的表层，经口摄入。连用18天。安慰剂（或空白）对照组

5、，编号19-24：每头动物每日15ml洁净自来水，体积相当于3倍受试药推荐剂量的体积。水洒在饲料的表层，经口摄入。2.3 评价指标1）临床观察：在给药前、给药后对受试猪进行一般临床观察（如脱水情况、排便情况如是否出现稀粪、软粪或便秘等）；每天2次记录临床体征。2）摄食量：给药前至实验结束时每天记录各组受试猪的摄食量。3）体重、体温变化：试验前、第9天和第18d（实验结束时）各组动物分别称量一次体重和体温，并予以记录。4）死亡率：试验期间记录各组动物死亡率和存活率，试验期间并没有猪死亡，存活率为100%。5）临床病理学检查：给药前、及给药第9和18天时（每次给药结束后4h内）采集血样进行血液学参

6、数和血液生化学参数检测其中全血作血液学指标检验，检测参数包括红细胞总数(RBC)、白细胞(WBC)总数、血红蛋白(HGB)、血小板总数(PLT)、红细胞压积(HCT)、平均血红蛋白含量（MCH）、平均血红蛋白浓度（MCHC）；血清用作生化指标检测，检测参数包括总胆红素(TBIL)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白（GLOB）、白/球比值（A/G）、碱性磷酸酶(ALP)、肌酐 (CREA)、尿素(UREA)、血糖(GLU)、钾、钠、钙、磷等指标。6）尸体剖检：对实验中死亡的所有猪尸检。对来自或与药物毒性，疾病或其他原因有关的死亡猪

7、应通过可接受的诊断技术加以确认，并予以记录。在最后一次给药结束后度动物进行剖检和肉眼检查，对猪的卵巢、子宫及其他肉眼检查发现病变的组织采用福尔马林固定保存组织病理学检查。尸检时对下列组织进行常规检查：肝脏、肾脏、心脏、脾脏、肺脏、卵巢、子宫。根据出现的毒性情况决定是否对其他组织进行检查。如果与不给药对照组相比，高浓度剂量组的组织未出现与药物相关的组织病理学变化，则较低浓度剂量组的组织不必再进行组织学检查。2.4数据统计分析用SPSS应用软件系统进行数据的显著性检验。采用t检验比较试验组与对照组间均增重、血液学和血液生化学等各项指标的显著性差异。3 结果3.1 临床表现整个试验期间各组动物均无死

8、亡，其中对照组20号在给药第三天有稀便，一倍剂量组2号在给药第四天上午、第五天下午有呕吐现象，其它临床表现正常，精神状态良好，无呕吐反应，排便正常，摄食和饮水亦均表现正常。受试猪给药前、给药第九天及最后一次给药结束后，各组体重、饲料消耗等参数见表1，体温变化见表2。数据显示，与对照组相比各用药组在试验期间体重均基本保持稳定或小幅增长。说明该药对试验猪无毒性作用，不影响受试猪的正常生长。表1 烯丙孕素口服液对试验期间猪生长性能的影响（单位：kg）(±SD, n= 6) 组别检测指标对照组1倍推荐剂量组2倍推荐剂量组3倍推荐剂量组试验初始均重49.2±6.847.9±

9、5.052.8±5.151.7±6.6第九天给药结束后均重第十八天给药结束后均重53.4±7.158.1±8.452.4±4.657.6±5.056.1±5.560.3±4.954.6±5.460.0±5.4均增重（kg/只）7.8±2.19.7±1.07.6±1.28.3±3.2均耗料（kg/只）1.21.21.21.2表2 烯丙孕素口服液对试验期间猪体温的影响（单位：）(±SD, n= 6) 组别检测指标对照组1倍推荐剂量组2倍推荐剂量组3倍

10、推荐剂量组试验初始均体温37.7±0.338.2±0.438.0±0.337.9±0.3第九天给药结束后均体温给药结束后均体温37.8±0.337.7±0.538.1±0.338.2±0.338.0±0.338.1±0.537.9±0.438.0±0.53.2 临床病理学检测结果3.2.1 血液生理学和血清生化测定结果各组猪给药前和试验结束时的血液学和血清生化指标测定结果分别见表3 - 表4。统计学分析显示，与用对照组相比，各剂量组的血液生理学和血清生化学参数均无显著差异，表

11、明烯丙孕素在3倍最大推荐剂量下对猪的血液学和临床生化学参数无影响。表3 烯丙孕素口服液试验血液生理学参数测定结果 (±SD,n=6)检测指标组别时间对照组1倍推荐剂量组2倍推荐剂量组3倍推荐剂量红细胞数总数(1012/L)D08.08±0.787.56±0.827.87±0.847.68±0.41D98.04±0.497.37±0.987.84±0.577.92±0.69D187.92±1.007.55±0.317.22±0.787.50±0.56白细胞数总数(10

12、9/L)D029.11±6.3423.49±2.8625.24±7.4826.22±4.83D928.57±5.1525.28±5.1325.85±4.6621.53±3.82D1829.66±7.8826.92±3.6425.33±3.3028.89±3.69血红蛋白（g/L)D0132.40±14.60124.17±18.03125.17±7.33131.83±5.56D9130.17±10.15121.17±1

13、4.41123.83±5.38136.50±9.83D18130.22±20.77121.67±5.68113.00±8.58127.33±6.28红细胞压积(L/L)D047.44±7.0043.80±6.4644.70±3.6746.05±2.23D945.95±3.3241.23±5.1543.33±2.2946.68±3.97D1844.67±6.6642.02±2.5039.35±3.8543.37±2.1

14、2平均血红蛋白含量(pg)D0 D9 D1816.38±0.7616.18±0.7516.37±0.8716.38±0.7616.50±1.01 16.17±0.7516.02±1.3915.88±1.3115.73±1.2417.20±0.5117.25±0.4117.00±0.47平均血红蛋白浓度(g/L) D0D9D18280.6±11.13283.33±3.33290.67±5.20283.67±7.09294.33±

15、8.76289.67±8.02280.33±8.96286.00±8.46287.83±7.65286.33±3.67292.67±4.18293.67±4.50血小板总数(109/L)D0271.80±79.95267.50±123.24241.00±66.26238.33±73.74D9266.12±148.48371.00±219.04250.67±171.55311.67±118.24D18 211.67±106.36223.8

16、3±121.01300.33±105.32220.17±134.39注：（1）D0，二倍剂量组血小板总数差异显著（P0.05） （2）D9，一倍剂量组平均血红蛋白含量差异显著（P0.05），三倍剂量组白细胞总数、平均血红蛋白含量差异显著（P0.05），平均血红蛋白浓度差异极显著（P0.01） （3）其它参数差异不显著（P0.05）表4 烯丙孕素口服液试验血清生化学参数测定结果 (±SD，n= 6)检测指标时间对照组1倍推荐剂量组2倍推荐剂量组3倍推荐剂量总胆红素（mol/L）D01.29±1.451.58±2.781.09±

17、0.740.66±0.73D90.11±0.110.14±0.100.20±0.140.15±0.70D180.12±0.110.23±0.150.25±0.120.24±0.14总蛋白（g/L）D064.45±3.1564.57±3.1862.72±2.1666.03±4.31D965.68±2.8267.13±1.1965.63±1.9170.17±4.29D1860.63±3.7364.27±3.82

18、63.03±2.8765.55±3.74白蛋白（g/L）D037.42±2.3137.22±1.5736.87±1.4139.02±1.85D936.13±2.5038.77±2.3638.17±2.4841.43±2.08D1833.62±2.5638.53±2.3037.02±2.7740.97±1.88球蛋白（g/L）D027.03±2.9627.35±2.5325.85±2.2627.02±2.61D929.

19、55±2.9028.37±2.2927.47±2.3328.73±3.78D1827.02±3.2625.73±4.1426.02±1.7024.58±3.02白/球比值D01.42±0.201.35±0.141.43±0.141.45±0.10D91.23±0.151.37±0.201.40±0.171.45±0.19D181.25±0.191.53±0.311.42±0.171.68±0.21

20、谷丙转氨酶（U/L）D052.67±6.7148.17±9.1341.83±11.0951.67±22.53D945.83±11.1338.00±9.8433.83±12.9143.17±11.62D1837.67±7.6937.50±10.6934.83±12.5340.17±15.39谷草转氨酶（U/L）D053.50±14.1450.83±12.7045.67±25.7173.33±48.63D959.67±64.673

21、6.17±14.5038.33±20.3336.17±9.50D1842.17±21.5740.17±12.8643.00±12.7761.33±34.62碱性磷酸酶（U/L）D0123.17±19.15124.00±45.31126.83±31.26144.83±31.94D948.00±11.6452.33±10.0946.67±13.6241.50±14.57D18115.83±22.09101.33±37.52115.

22、00±54.05113.33±39.07乳酸脱氢酶（U/L）D0746.33±25.89811.00±154.22803.67±209.71941.33±431.03D9713.67±218.02620.50±159.04558.67±121.47611.50±140.88D18601.00±152.48560.67±62.05609.33±122.02680.17±160.50尿素（mol/L）D01.97±0.431.85±0.47

23、201±0.992.57±0.96D91.96±0.462.60±0.711.98±0.552.83±0.36D182.64±0.873.23±0.662.40±0.453.19±0.62肌酐（mol/L）D066.38±12.6778.28±14.2663.23±6.9974.33±8.80D989.28±9.6398.87±16.5879.65±5.2397.95±11.34D1899.57±9.681

24、01.23±12.6582.75±7.7695.60±11.80血糖（mol/L）D03.73±0.354.03±0.923.78±0.804.13±0.82D93.35±0.373.13±0.883.68±0.533.62±0.71D184.52±0.923.23±0.663.13±0.673.87±0.61钠（Na）（mol/L）D0143.42±3.37142.43±1.46142.33±1.86142.85&

25、#177;3.43D9144.78±1.11142.52±0.83141.72±1.33143.18±2.58D18144.12±1.89143.08±2.14142.17±2.00140.85±1.73氯（Cl）（mol/L）D0102.32±2.18102.70±1.68101.62±1.38102.52±2.38D9101.13±1.77100.82±2.3398.32±1.0998.88±2.30D18102.18±1

26、.35100.72±2.28100.33±1.3498.02±2.57钙（Ga）（mol/L）D02.44±0.082.44±0.072.40±0.092.46±0.06D92.49±0.102.50±0.072.43±0.122.57±0.09D182.37±0.142.45±0.092.33±0.152.47±0.07钾（K）（mol/L）D05.42±0.905.67±0.605.38±0.785.75

27、7;0.53D95.03±0.414.88±0.494.70±0.245.27±0.31D185.67±0.585.75±0.585.47±0.355.63±0.25注：（1）D9，二倍剂量组氯差异显著（P0.05），三倍剂量组的白蛋白、尿素差异极其显著（P0.01）（2）D18，一倍剂量组的血糖差异显著（P0.05），白蛋白差异极其显著（P0.01）；二倍剂量组的血糖、氯差异显著（P0.05），肌酐差异极其显著（P0.01）；三倍剂量组总蛋白、氯、钠差异显著（P0.05），白蛋白差异极其显著（P0.01）（3）其

28、它参数差异不显著（P0.05）；其中总胆红素、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶整体呈下降趋势，肌酐整体呈上升趋势3.3病理学变化试验结束后将各组存活的猪宰杀剖检，其中对照组、推荐剂量组、2倍推荐剂量组随机选择1头，3倍推荐剂量组随机选择2头，经肉眼观察剖检猪的脏器未发现任何异常或可疑病变。对3倍剂量组和对照组进行组织病理学检查亦均未发现明显组织病理学变化。代表性病例切片图见附图。4 讨论本试验选取达到性成熟的健康苏姜后备母猪24头，口服不同剂量的烯丙孕素口服液，共计给药18天。结果表明，靶动物安全性试验期间所有猪健康状况均良好，临床表现正常，试验结束时剖检检查各剂量组的脏器未发现明显的肉眼可见病理变化，

29、进一步的组织病理学检查亦均未发现明显组织病理学变化。在血液生理学、血液生化检测方面，推荐剂量组、2倍推荐剂量组、3倍推荐剂量组与空白对照组相比，各指标并无显著差异，证实烯丙孕素口服液按推荐剂量内服给药在猪具有较大的安全性。5 结论宁波第二激素厂生产的烯丙孕素口服液，按推荐剂量使用对猪具有较高的安全性。参考文献 1 Gaggini T S, Perin J, Arend L S, et al. Altrenogest treatment associated with a farrowing induction protocol to avoid early parturtion in sowsJ. Reprod Dom Anim, 2013, 48（3）: 390-395.2 Van Leeuwen J J J, Martens M, Jourquin J, et al. Effects of altreno gest treatments before and after weaning on follicular development, farrowing rate, and litter size in sowsJ. J Anim Sci,