蛋白酶活性的测定方法及原理

1、会计学1蛋白酶活性的测定方法及原理蛋白酶活性的测定方法及原理345678重点本次实验就是采用福林酚法测定蛋白酶活性原理试剂仪器试管试管0试管试管1试管试管2试管试管3试管试管4试管试管5100g/ml酪氨酪氨溶液溶液（ ml ）O12345蒸馏水蒸馏水（ ml ）1098765酪氨酸实酪氨酸实际浓度际浓度 （g/ml ）O1020304050L-酪氨酸标准溶液按下表配制分别取上述溶液各1.00ml(须做平行试验)，各加入0.4mol/L碳酸钠溶液5.00ml。福林试剂使用溶液1.00ml,置于40+0.2水浴中显色20min,取出用分光光度计于波长680nm,比色，以不含酪氨酸的0管为空白管调

2、零点，分别测定其吸光度值，以吸光度值为纵坐标，酪氨酸的浓度为横坐标，绘制标准曲线或计算回归方程。计算出当OD为1时的酪氨酸的量（g），即为吸光常数K值，其K值应在95100范围内。先将酪素先将酪素溶液放入溶液放入400.2恒温水恒温水浴中，预浴中，预热热5min取取4支试支试管，各加管，各加入入1ml酶酶液液取一支作取一支作为空白管为空白管，加，加2ml三氯乙酸三氯乙酸，其他，其他3管作为测管作为测试管各加试管各加入入1ml酪酪素，摇匀素，摇匀，40保保温温10min取出试管取出试管，3支测支测试管中各试管中各加入加入2ml三氯乙酸三氯乙酸，空白管，空白管中加中加1ml酪素。酪素。 静置静置1

3、0min，过滤沉淀过滤沉淀各取各取1ml滤滤液液，加入，加入0.4mol/L的碳酸钠的碳酸钠5ml、福林、福林试剂试剂1ml。在在40显显色色20min 680nm处处测测OD值值。以以空白管空白管调零点。调零点。Title1g固体酶粉（或1ml液体酶），在40（酸性pH=3.0、中性pH=7.5、碱性pH=10.5）条件下，1min水解酪素产生1g酪氨酸为一个酶活力单位。 蛋白酶的活力= AK4/10n U/g(ml)A：样品平行试验的平均OD值K：吸光常数 4：反应试剂的总体积0：酶解反应时间 n：酶液稀释总倍数1Title蛋白酶有哪几类？ 按蛋白酶水解蛋白质的方式：A内肽酶：切开蛋白质分

4、子内部肽键，生成相对分子质量较小的多肽类；B外肽酶：切开蛋白质或多肽分子氨基或羧基末端的肽键，而游离出氨基酸的酶类；C水解蛋白质或多肽的酯键；D水解蛋白质或多肽的酰胺键。按酶的来源可分为：动物蛋白酶、植物蛋白酶、微生物蛋白酶 微生物蛋白酶又可分为：细菌蛋白酶、霉菌蛋白酶、酵母蛋白酶和放线菌蛋白酶 按蛋白酶作用的最适PH可以分为（A）PH2.55.0的酸性蛋白酶，（B）PH9.510.5的碱性蛋白酶，（C）PH78的中性蛋白酶影响酶活力的因素有哪些？ 酶浓度对酶活力的影响：酶促反应速率与酶分子的浓度呈正比，在一定范围内，当底物分子浓度足够时，酶分子越多，底物转化的速度越快。 底物浓度对酶活力的影

5、响：若酶的浓度为定值，底物的起始浓度越低时，酶促反应速度与底物浓度呈正比，即随底物浓度的增加而增加。当 所有的酶与底物结合生成中间产物后，即使再增加底物浓度，中间产物浓度也不会增加，酶促反应速度也不会增加。 温度对酶活力的影响：在适宜的温度范围内，酶促反应速度随温度升高而增加，超过最适反应温度，酶活力将会下降。 PH对酶活力的影响：酶在最适PH范围内表现出活性，大于或小于最适PH，都会降低酶活性。 激活剂对酶活力的影响：某些无机阳离子、阴离子、有机化合物可作为激活剂，能够激活酶，使其表现出催化活性或强化其催化活性。 抑制剂对酶活力的影响：酶的抑制剂能够减弱、抑制甚至破坏酶的活力，它可降低酶促反应速度。 使用紫外分光光度计时应注意哪些问题？ 使用的比色皿必须洁净，并注意配对使用。手指应拿毛玻璃面的两侧，装盛样品量以2/3为度。透光面要用擦镜纸擦拭干净。 比色皿使用前应用试样润洗，使用后应立