不同时期局部移植人脐带间充质干细胞修复脊髓损伤的组织学观察

1、www.CRTER.org陈胜，等. 不同时期局部移植人脐带间充质干细胞修复脊髓损伤的组织学观察不同时期局部移植人脐带间充质干细胞修复脊髓损伤的组织学观察陈 胜1，金正帅2(1南京医科大学附属江苏盛泽医院骨科，江苏省苏州市 215228；2南京医科大学第一附属医院骨科，江苏省南京市 210029)引用本文：陈胜，金正帅. 不同时期局部移植人脐带间充质干细胞修复脊髓损伤的组织学观察J.中国组织工程研究，2016，20(45):6714-6719.DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.45.004 ORCID: 0000-0002-6849-4823(陈胜)文章快速

2、阅读：大鼠脊髓损伤7 d后移植人脐带间充质干细胞的修复效果最佳陈胜，男，1981年生，江苏省南通市人，汉族，主治医师，主要从事脊柱方面的研究。通讯作者：金正帅，硕士生导师，主任医师，南京医科大学第一附属医院骨科，江苏省南京市 210029中图分类号:R394.2文献标识码: A文章编号:2095-4344(2016)45-06714-06稿件接受：2016-09-17移植大鼠运动功能评分增加，血清白细胞介素2水平减少，血清白细胞介素10水平增加，脊髓病理损伤明显改善，且7 d后移植组效果最为明显Allens 打击法建立脊髓损伤模型 3 d 7 d 21 d人脐带间充质干细胞局部移植文题释义：白

3、细胞介素：最初指由白细胞产生又在白细胞间起调节作用的细胞因子，现指一类分子结构和生物学功能已基本明确，具有重要调节作用而统一命名的细胞因子，与血细胞生长因子同属细胞因子。两者相互协调，相互作用，共同完成造血和免疫调节功能。白细胞介素在传递信息，激活与调节免疫细胞，介导T、B细胞活化、增殖与分化及在炎症反应中起重要作用。目前已发现38种白细胞介素。Allens打击法建立脊髓损伤模型：由Allen创建的重物坠落致脊髓损伤的方法。即用一定质量的重锤沿一套管垂直落下、精确打击特定脊髓节段而致伤。这种模型比较接近人类脊髓损伤的病理生理特点及变化规律，对研究脊髓损伤后神经元、神经胶质细胞的病理变化、再生规

4、律和相互作用，探索神经保护策略有很大帮助。摘要背景：脊髓损伤能造成各种运动、感觉功能障碍，肌张力异常及病理反射等，临床上已通过人脐带间充质干细胞移植对脊髓损伤进行治疗。目的：探讨大鼠脊髓损伤后不同时期局部移植人脐带间充质干细胞修复脊髓损伤的效果。方法：选取SPF级雄性成年SD大鼠100只，随机分为5组：空白对照组、单纯脊髓损伤组及3，7，21 d后移植组，各20只。后4组利用Allens 打击器制作大鼠T10脊髓损伤模型；3，7，21 d后移植组大鼠分别于脊髓损伤后3，7和21 d在损伤部位周围移植人脐带间充质干细胞。结果与结论：与单纯脊髓损伤组相比，3，7，21 d后移植组大鼠造模后49 d

5、运动功能评分增加，血清白细胞介素2水平减少，血清白细胞介素10水平增加，脊髓病理损伤明显改善，且7 d后移植组效果最为明显。说明人脐带间充质干细胞移植修复大鼠脊髓损伤，改善大鼠运动功能，且在大鼠脊髓损伤7 d后移植效果最佳。关键词：干细胞；骨髓干细胞；脊髓损伤；人脐带间充质干细胞；干细胞移植；损伤修复；治疗效果; 感觉功能障碍；病理反射主题词：白细胞介素类；脊髓损伤；组织工程6715 P.O.Box 1200,Shenyang 110004 kf23385083Local transplantation of human umbilical cord mesenchymal stem cell

6、s at different time after spinal cord injury in rats: a histological observationChen Sheng1, Jin Zheng-shuai2 (1Department of Orthopedics, Jiangsu Shengze Hospital, Nanjing Medical University, Suzhou 215228, Jiangsu Province, China; 2Department of Orthopedics, the First Affiliated Hospital of Nanjin

7、g Medical University, Nanjing 210029, Jiangsu Province, China)AbstractBACKGROUND: Spinal cord injury (SCI) is a disease causing a variety of motor and sensory dysfunctions, abnormal muscle tone and pathological reflex. Clinically, human umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation has become

8、 an employed therapy for SCI.OBJECTIVE: To investigate the effect of local transplantation of human umbilical cord mesenchymal stem cells in different time after spinal cord injury in rats. METHODS: 100 SPF male adult Sprague-Dawley rats were randomly divided into five groups: blank control group, S

9、CI group, post-SCI 3-, 7-, 21-day transplantation groups (n=20 per group). Animal models of T10 SCI were made by Allens method in the latter four groups, and rats in the three transplantation groups were given HUCMSCs transplantation at 3, 7, 21 days after SCI, respectively. RESULTS AND CONCLUSION:

10、Compared with the SCI group, improved motor function scores, decreased interleukin-2 level, and increased serum interleukin-10 level were observed in the three transplantation groups at 49 days after modeling, indicating SCI was improved significantly in the three transplantation groups, especially

11、in the post-SCI 7-day transplantation group. These findings suggest that human umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation for SCI repair improves the movement function of rats, and cell transplantation at 7 days after modeling has achieved best outcomes. Subject headings: Interleukins; Spi

12、nal Cord Injuries; Tissue EngineeringCite this article: Chen S, Jin ZS. Local transplantation of human umbilical cord mesenchymal stem cells at different time after spinal cord injury in rats: a histological observation. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 2016;20(45):6714-6719.Chen Sheng, Attending ph

13、ysician, Department of Orthopedics, Jiangsu Shengze Hospital, Nanjing Medical University, Suzhou 215228, Jiangsu Province, ChinaCorresponding author: Jin Zheng-shuai, Masters supervisor, Chief physician, Department of Orthopedics, the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University, Nanjing

14、210029, Jiangsu Province, China6717ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH0 引言 Introduction在特定引导条件下，人脐带间充质干细胞可分化为神经元样细胞，具有促使脑或脊髓等中枢神经组织修复的潜力1。因此，临床上已通过移植该细胞对脊髓损伤进行治疗，并取得一定疗效2。研究显示，脊髓损伤能造成损伤脊髓及其周围出现出血和水肿的现象3，并诱发大面积神经元损伤及形成胶质瘢痕等4，且还可引起神经微循环病变，造成血氧不足和钙离子及氧自由基高表达等5，从而进一步恶化神经损伤，并可累及移植过来的外源性人脐带间充质干细胞2，降

15、低细胞移植治疗的效果。作者通过脊髓损伤大鼠模型，观察不同时间局部移植人脐带间充质干细胞的效果，寻找最佳的移植时间，为临床人脐带间充质干细胞移植提供实验依据。1 材料和方法 Materials and methods 1.1 设计 随机对照动物实验。1.2 时间及地点 实验于2015年3至10月在南京医科大学完成。1.3 材料 SPF级雄性SD大鼠100只，鼠龄85-110 d，体质量175-260 g，由南京医科大学实验动物中心提供，动物许可证号SYXK(苏)2013-0015。所有大鼠饲养温度在(20±2) ，12 h黑暗和照明光线自由交替，固体饲料和饮水自由喂养。1.4 方法1.

16、4.1 动物分组 所有实验动物随机分为5组，空白对照组、单纯脊髓损伤组、3 d后移植组、7 d后移植组和21 d后移植组，各20只。1.4.2 脊髓损伤模型的建立 体积分数10%水合氯醛对大鼠行腹腔麻醉，剂量3.3×10-3 mL/g，取俯卧位，以T10为中心将背部皮肤、皮下组织纵向切开，将两侧椎旁肌逐渐剥离，充分暴露T10棘突和椎板后咬除，直至完全显出硬膜。选取HI-0400脊髓打击器(赞德仪器有限公司)，以25 mm高度、10 g质量打击，待大鼠表现一过性鼠尾摆动及后肢痉挛，则造模成功，最后将肌肉、筋膜、皮肤逐层缝合。造模后排尿2次/d，至模型大鼠有正常排尿反射；移植前3 d至实

17、验结束，皮下注射10 mg/kg环孢素A(注册证号H20050433，瑞士Novartis Pharma Stein AG)，1次/d6。空白对照组大鼠只切开皮肤。1.4.3 人脐带间充质干细胞移植 先将人脐带间充质干细胞(上海华雅思创生物科技有限公司)使用常规无血清培养基进行体外培养至50%融合7，弃去培养基加入10 mg/L溴脱氧尿啼淀核苷(BrdU，武汉博士德生物工程有限公司)，培养72 h。移植前0.5 h滴入0.25%胰蛋白酶后离心，再充分洗涤，使用无血清培养基调制细胞浓度为1×1011 L-1的细胞悬液。3 d后移植组、7 d后移植组和21 d后移植组大鼠分别于脊髓损伤后

18、3，7和21 d行细胞移植，暴露T10部位硬膜后分5个点注射人脐带间充质干细胞至脊髓损伤头、尾侧，每个点均注射剂量为6 L，总注射细胞1.2×106个，结束后留针3 min，缓慢退出逐层缝合肌肉、筋膜和皮肤，大鼠复苏后精心喂养。空白对照组和单纯脊髓损伤组注射等量生理盐水。1.4.4 运动功能评价 对5组大鼠进行运动评分，内容包括行走能力、关节运动、协调性及肢体稳定性6。评分越高，大鼠运动功能恢复越好。1.4.5 ELISA法检测血清中白细胞介素2和白细胞介素10水平 抽取大鼠尾端静脉血5 mL，滴入干净试管内，离心机内3 200 r/min离心5 min，取上清液滴入干净试管，放入-

19、20 冰箱冷存，7 d内使用ELISA法检测白细胞介素2和白细胞介素10水平，试剂盒均购自上海酶联生物科技有限公司，检测步骤严格按照试剂盒附带说明书操作。1.4.6 苏木精-伊红染色 大鼠麻醉后，取仰卧位，胸骨正中切口开胸，于左心室插入20 mL注射器针头至升主动脉弓，血管钳固定主动脉根部，右心耳位置剪开放血，生理盐水冲洗干净至观察不到血性液流出，40 g/L多聚甲醛行心内灌注将标本固定30 min。暴露T10脊髓，提取T4-L1段脊髓2 cm，放入40 g/L多聚甲醛固定3 d，常规脱水、石蜡包埋、切片，采用苏木精-伊红染色，在奥林巴斯CX23显微镜下观察其组织结构变化。 1.5 主要观察指

20、标 大鼠运动功能变化；大鼠血清中白细胞介素2和白细胞介素10水平；大鼠脊髓组织病理变化。1.6 统计学分析 数据分析用SPSS 19.0软件，以±s表示，多组比较采用方差分析，并用LSD-t 检验进组间两两比较；P < 0.05为差异有显著性意义。2 结果 Results 2.1 实验动物数量分析 5组共100只大鼠均进入结果分析，未出现异常死亡情况。2.2 运动功能 与空白对照组相比，其他4组大鼠的运动功能评分明显下降(P < 0.05)，但4组大鼠造模后随时间的延长，运动功能评分逐渐增加(P < 0.05)。单纯脊髓损伤组、3 d后移植组、7 d后移植组和21

21、d后移植组大鼠在造模后28，29和35 d时运动功能评分接近(P > 0.05)。造模后42 d和49 d时3 d后移植组、7 d后移植组和21 d后移植组大鼠运动功能评分高于单纯脊髓损伤组(P < 0.05)，且7 d后移植组大鼠运动功能评分高于3 d后移植组和21 d后移植组(P < 0.05；表1)。2.3 血清白细胞介素2和白细胞介素10水平 其他4组大鼠血清白细胞介素2水平均高于空白对照组(除造模后28 d外，P < 0.05)；3 d后移植组、7 d后移植组和 21 d后移植组大鼠血清白细胞介素2水平均低于单纯脊髓损伤组(P < 0.05)，且7 d后

22、移植组大鼠血清白细胞介素2水平在造模后29 d和35 d时小于3 d后移植组和21 d后移植组(P < 0.05；表2)，而5组中白细胞介素10的变化与白细胞介素2相反(表3)。2.4 脊髓组织病理变化 造模后49 d时，苏木精-伊红染色结果显示，空白对照组大鼠脊髓结构清晰，无破坏；单纯脊髓损伤组大鼠脊髓组织结构破裂、紊乱；3 d后移植组大鼠脊髓组织结构仍见结构破裂、紊乱，灰质和白质有大量空洞；7 d后移植组大鼠脊髓组织结构清晰，灰质和白质少量空洞；21 d后移植组大鼠脊髓显示组织结构较清晰，灰质和白质少量空洞(图1)。3 讨论 Discussion目前，医学界已经通过脐静脉灌注联合密度

23、梯度离心的方式提取间充质干细胞，对其进行生理学鉴定和细胞分化方面的研究，对脐带间充质干细胞的提取已经比较成熟8。此外通过体外诱导脐带间充质干细胞，可使得其向神经细胞转化，并能够释放相对量的神经标记物，其中包括各类神经元特异性烯醇化酶及酪氨酸羟化酶等生物酶和多种生长性蛋白因子等9，表明通过人工手段能够诱导人脐带间充质干细胞分化为完整、成熟的神经细胞。此外，该细胞具有来源广泛，易从动物中提取的特点，在商业应用不存在伦理问题，且免疫源性相对低，能够进行多向潜能分化，因此成为骨外科治疗中研究重点之一。既往研究中，将人脐带间充质干细胞移植至脊骨全横断模型大鼠的脊髓内，移植细胞能长时间存活，可显著恢复断脊

24、大鼠的后肢功能10。将初次提取的脐带间充质干细胞移植到大鼠脊髓损伤部位中度损伤处后，移植来细胞能够成功存活，并可和损伤处细胞相互融合，有效加快轴突再生11。但迄今为止，关于脐带间充质干细胞最佳移植时间仍处于争论之中。表1 不同时间点移植人脐带间充质干细胞对脊髓损伤模型大鼠运动功能评分的影响 (±s，n=20)Table 1 Effects of human umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation at different time points on the motor function of rats with sp

25、inal cord injury组别造模后28 d造模后29 d造模后35 d造模后42 d造模后49 d空白对照组20.14±1.5419.63±1.2819.57±1.9621.05±1.5920.09±1.67单纯脊髓损伤组0.15±0.24a6.47±1.64ae7.12±1.24ae8.15±1.27ae8.95±1.49ae3 d后移植组0.17±0.19a6.41±1.52ae7.68±1.52ae11.26±1.48abe12.26

26、7;1.54abe7 d后移植组0.17±0.21a6.25±1.61ae7.39±1.44ae13.07±1.35abce14.96±1.75abc21 d后移植组0.16±0.17a6.38±1.62ae7.57±1.43ae10.59±1.34abcde11.85±1.37abcd表注：与空白对照组相比，aP < 0.05；与单纯脊髓损伤组相比，bP < 0.05；与3 d后移植组相比，cP < 0.05；与7 d后移植组相比，dP < 0.05；与前一时间点相比，

27、eP < 0.05。表2 不同时间点移植人脐带间充质干细胞对脊髓损伤模型大鼠血清白细胞介素2水平的影响 (±s，n=20，ng/L)Table 2 Effects of human umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation at different time points on serum interleukin-2 level in rats with spinal cord injury组别造模后28 d造模后29 d造模后35 d造模后42 d造模后49 d空白对照组1 046.17±105.654

28、56.63±101.75468.85±107.24448.93±105.06451.23±102.69单纯脊髓损伤组1 034.25±96.281 085.67±98.23a1 054.32±97.87a1 066.75±95.58a1 078.98±99.67a3 d后移植组1 062.32±97.63921.67±85.62abe845.23±89.69abe721.21±82.62abe624.82±85.50abe7 d后移植组1 052.14&#

29、177;94.17825.42±87.62abce704.54±96.41abce701.75±95.58ab534.89±92.45abce21 d后移植组1 073.44±95.52902.65±84.73abe858.35±88.58abd734.41±83.54ab645.86±86.49abde表注：与空白对照组相比，aP < 0.05；与单纯脊髓损伤组相比，bP < 0.05；与3 d后移植组相比，cP < 0.05；与7 d后移植组相比，dP < 0.05；与前一时间

30、点相比，eP < 0.05。表3 不同时间点移植人脐带间充质干细胞对脊髓损伤模型大鼠血清白细胞介素10水平的影响 (±s，n=20，ng/L)Table 3 Effects of human umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation at different time points on serum interleukin-10 level in rats with spinal cord injury组别造模后28 d造模后29 d造模后35 d造模后42 d造模后49 d空白对照组538.64±75.

31、25946.65±75.69958.25±71.21951.27±78.81949.69±75.60单纯脊髓损伤组554.12±68.54a562.28±64.17a557.79±70.23a549.63±71.15a552.20±69.79a3 d后移植组549.39±69.55a642.47±75.60ab735.40±71.59abe812.27±78.59abe846.27±62.74ab7 d后移植组543.23±69.65a673.3

32、9±65.28abc659.52±72.36ab872.24±70.26ab842.35±71.68ab21 d后移植组546.48±68.64a885.68±69.92abce727.48±73.48abde834.38±75.42abe855.18±69.95ab表注：与空白对照组相比，aP < 0.05；与单纯脊髓损伤组相比，bP < 0.05；与3 d后移植组相比，cP < 0.05；与7 d后移植组相比，dP < 0.05；与前一时间点相比，eP < 0.05。有研

33、究者认为脊髓损伤后3 d是进行间充质干细胞移植的最佳时间段12，作者选取大鼠损伤后3，7和 21 d进行细胞移植，结果显示，移植后大鼠运动功能评分均明显提高，这验证了人脐带间充质干细胞移植能够显著改善大鼠受损伤脊髓生理功能，促使运动功能恢复。且实验结果还表明大鼠后肢运动功能需要恢复时间，主要因为移植人脐带间充质干细胞存活和分化时一个自然演进的过程。3，7和21 d移植组大鼠在造模后42 d的运动功能评分均高于单纯脊髓损伤组，从该结果显示大鼠损伤脊髓具有自恢复功能，但恢复能力有限，具有时间局限性，因此作者推断为42 d，而临床移植手术的最佳时间应为脊髓损伤后3 d。研究结果显示7 d后移植组高于

34、3 d后移植组和21 d后移植组，说明人脐带间充质干细胞移植能够有效改善脊髓损伤大鼠的神经功能，且改善效果随着时间推移逐渐增强。既往研究与实验结果均显示，脊髓损伤大鼠行人脐带间充质干细胞移植后，移植细胞分化良好13，能有效6719ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH E D C B A图1 造模后49 d移植人脐带间充质干细胞对脊髓损伤模型大鼠脊髓病理变化的影响(苏木精-伊红染色，×40)Figure 1 Hematoxylin-eosin staining results of the spinal cord in rats at 49

35、 days after human umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation (×40)图注：图中A为空白对照组；B为单纯脊髓损伤组；C-E为3，7，21 d后移植组。箭头指示组织中结构损伤及空洞。修复损伤，这是因为局部移植人脐带间充质干细胞能够增强神经营养因子3、血管内皮生长因子受体3和碱性成纤维生长因子等的表达，而这些细胞因子能够促使血管再生，加快损伤组织生产及生长14。苏木精-伊红染色结果显示，人脐带间充质干细胞移植后大鼠损伤脊髓恢复效果由于自然条件下的恢复。有研究认为，脊髓损伤后能够引起免疫因子出现趋化性反应，造

36、成白细胞介素等炎症因子表达上升，形成急性免疫反应会对毒杀移植人脐带间充质干细胞，不利于损伤脊髓恢复15-26。实验结果显示移植后大鼠白细胞介素10水平明显上升，且7 d后移植组效果最为明显，表明人脐带间充质干细胞移植可加快脊髓的免疫炎性恢复。有研究显示移植能够促使脊髓损伤21 d后出现胶质细胞增生27，但作者并未发现这一现象。通过研究发现人脐带间充质干细胞移植能够有效治疗大鼠脊髓损伤，改善其运动功能，这移植方式选取也密切相关。作者选取局部注射移植方式，比其他移植方式更能在损伤区内聚集大量“种子细胞”，从而加快脊髓修复。但作者也发现该移植方式能对局部组织产生损伤，但总体而言，局部注射移植人脐带间

37、充质干细胞效果优秀。综上所述，人脐带间充质干细胞移植修复大鼠脊髓损伤疗效显著，并能够有效改善大鼠运动功能，且待造模后7 d，其移植效果最佳，为临床治疗人脊髓损伤具有参考价值。作者贡献：陈胜和金正帅进行实验设计，实验实施、评估、资料收集为陈胜，陈胜和金正帅成文，金正帅审校。利益冲突：所有作者共同认可文章无相关利益冲突。伦理问题：实验方案经南京医科大学动物实验伦理委员会批准，批准号为NJYKDX-20160911。实验动物在戊巴妥纳麻醉下进行所有的手术，并尽一切努力最大限度地减少其疼痛、痛苦和死亡。文章查重：文章出版前已经过CNKI反剽窃文献检测系统进行3次查重。文章外审：文章经国内小同行外审专家

38、双盲外审，符合本刊发稿宗旨。作者声明：第一作者对研究和撰写的论文中出现的不端行为承担责任。论文中涉及的原始图片、数据(包括计算机数据库)记录及样本已按照有关规定保存、分享和销毁，可接受核查。文章版权：文章出版前杂志已与全体作者授权人签署了版权相关协议。4 参考文献 References1 孙海伟,陆士奇,陈庆梅,等.不同来源干细胞移植治疗创伤性脊髓损伤的免疫反应J.江苏医药,2015,2(16): 1867- 1870.2 李波.脊柱手术并发脊髓不完全损伤10例临床分析J.现代仪器与医疗,2014,2(6):52-54.3 Han YF, Sun TJ, Han YQ, et al. Prep

39、aration of microencapsulated VEGF gene-modified human umbilical cord mesenchymal stem cells and in vitro culture. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2013;17(2): 217-223.4 陆士奇,孙海伟,刘励军,等.脐带源与骨髓源干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的疗效比较J.中华神经外科杂志,2013, 29(1):85-89.5 张文进,黄华,关方霞,等.人脐带间充质干细胞治疗脊髓损伤及其对内源性细胞增殖的影响J.实用医学杂志,2013, 29(6):880-8

40、82.6 孙海伟.脐带源与骨髓源干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的疗效比较D.苏州:苏州大学,2012.7 张健,李勇,王文军,等.HUCMSCs移植对大鼠亚急性脊髓损伤GAP-43和SPRR1A蛋白表达及神经功能的影响J.医学临床研究,2013,30(6):1070-1073.8 Zhu SF, Zhong ZN, Fu XF, et al. Comparison of cell proliferation, apoptosis, cellular morphology and ultrastructure between human umbilical cord and placenta-der

41、ived mesenchymal stem cells. Neurosci Lett. 2013;541:77-82. 9 Hou Y, Chai J, Liu L, et al. Effects of endotoxin/ lipopolysaccharide on proliferation and apoptosis of human umbilical cord mesenchymal stem cells. Zhonghua Shao Shang Za Zhi. 2014;30(2):148-152.10 Tao R, Sun TJ, Han YQ, et al. Epimorphi

42、n-induced differentiation of human umbilical cord mesenchymal stem cells into sweat gland cells. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2014;18(9):1404-1410.11 黄华.人脐带间充质干细胞治疗大鼠脊髓损伤及其对内源性干细胞的影响D.郑州:郑州大学,2013.12 Tao R, Sun TJ, Han YQ, et al. Optimization of in vitro cell labeling methods for human umbilical cord-

43、derived mesenchymal stem cells. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 2014;18(8):1127-1134.13 范宁建,冯世庆,刘举,等.人脐带间充质干细胞联合布洛芬修复大鼠脊髓损伤J.中华实验外科杂志,2013,30(1): 112-114.14 Dicarlo M, Bianchi N, Ferretti C, et al. Evidence Supporting a Paracrine Effect of IGF-1/VEGF on Human Mesenchymal Stromal Cell Commitment. Cells Ti

44、ssues Organs. 2016;201(5):333-341.15 Uchida S, Hayakawa K, Ogata T, et al. Treatment of spinal cord injury by an advanced cell transplantation technology using brain-derived neurotrophic factor-transfected mesenchymal stem cell spheroids. Biomaterials. 2016;109:1-11.16 Tseng TC, Hsu SH. Substrate-me

45、diated nanoparticle/gene delivery to MSC spheroids and their applications in peripheral nerve regeneration. Biomaterials. 2014;35(9):2630-2641. 17 Nakajima H, Uchida K, Guerrero AR, et al. Transplantation of mesenchymal stem cells promotes an alternative pathway of macrophage activation and function

46、al recovery after spinal cord injury. J Neurotrauma. 2012;29(8):1614-1625.18 Roh DH, Seo MS, Choi HS, et al. Transplantation of human umbilical cord blood or amniotic epithelial stem cells alleviates mechanical allodynia after spinal cord injury in rats. Cell Transplant. 2013;22(9):1577-1590.19 Kuma

47、gai G, Tsoulfas P, Toh S, et al. Genetically modified mesenchymal stem cells (MSCs) promote axonal regeneration and prevent hypersensitivity after spinal cord injury. Exp Neurol. 2013;248:369-380.20 Wang Y,Zhang SQ,Luo M,et al.Hyperbaric oxygen therapy improves local microenvironment after spinal cord