酶的特性（精编版）

1、doc 版化学与生物工程学院生物工程系生物化学实验报告课程名称：生物化学实验项目：酶的特征 实验室名：生物化学实验室实验时间：2012-11-8任课老师：杨艳专业班级：生物工程1142 学生姓名：髙晔学 号：201121030219组别：第五组doc 版实验内容【实验目的】酶是高效催化有机体新陈代谢各步反应的活性蛋白，几乎所有的生化反应都离不开酶的 催化， 所以酶在生物体内扮演着极其重要的角色，因此对酶的研究有着非常重要的意义。酶的活力是酶的重要参数，反映的是酶的催化能力，因此测定酶活力是研究酶的基础。酶活力由酶活力单位表征，通过计算适宜条件下一定时间内一定量的酶催化生成产物的量得到淀粉酶是水

2、解淀粉的糖苷键的一类酶的总称，按照其水解淀粉的作用方式，可分为 -淀粉酶和 -淀粉酶等。 -淀粉酶和 -淀粉酶是其中最主要的两种， 存在于禾谷类的种子中。 -淀粉酶存在于休眠的种子中，而 -淀粉酶是在种子萌发过程中形成的。 -淀粉酶活性是衡量小麦穗发芽的一个生理指标 , -淀粉酶活性低的品种抗穗发芽 ,反之则易穗发芽。目前 ,关于 -淀粉酶活性的测定方法很多种 ,活力单位的定义也各不相同 ,国内外测定 -淀粉酶活性的方法常用的有凝胶扩散法、 3 ,5-二硝基水杨酸比色法和降落值法 。这3 种方法所用的材料分别是新鲜种子、萌动种子和面粉,获得的 -淀粉酶活性应该分别是延迟( 内源) -淀粉酶、萌

3、动种子-淀粉酶和后熟面粉的-淀粉酶活性【实验原理】本实验由温度对酶活力的影响；ph 对酶活力的影响；酶的激活剂及抑制；酶的专一性4组实验组成。(一)、温度对酶活力的影响酶的催化作用受温度的影响。在最适温度下，酶的反应速度最高。大多数动物酶的最适温度为 3740，植物酶的最适温度为5060。酶对温度的稳定性与其存在形式有关。有些酶的干燥制剂，虽加热到100，其活性并无明显改变，但在100的溶液中却很快地完全失去活性。低温能降低或抑制酶的活性，但不能使酶失活。(二)、ph 对酶活性的影响酶的活力受环境ph 的影响极为显著。不同酶的最适ph 值不同。本实验观察ph 对唾液淀粉酶活性的影响，唾液淀粉酶

4、的最适ph 约为 6.8。(三)、唾液淀粉酶的活化和抑制酶的活性受活化剂或抑制剂的影响。氯离子为唾液淀粉酶的活化剂，铜离子为其抑制剂。(四)、酶的专一性酶具有高度的专一性。本实验以唾液淀粉酶和蔗糖酶对淀粉和蔗糖的作用为例，来说明酶的专一性。淀粉和蔗糖无还原性，唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性的麦芽糖，但不能催化蔗糖的水解。蔗糖酶能催化蔗糖水解产生还原性葡萄糖和果糖，但不能催化淀粉的水解。用 benedict试剂检查糖的还原性。【实验器材】(一)、温度对酶活力的影响1、器材(1) 试管及试管架(2) 恒温水浴(3) 冰浴(4) 沸水浴2、试剂和材料(1) 0.2% 淀粉的 0.3%氯化钠溶液150

5、 ml 需新鲜配制(2) 稀释 200 倍的唾液50 ml用蒸馏水漱口，以清除食物残渣，再含一口蒸馏水，半分钟后使其流入量筒并稀释200倍( 稀释倍数可根据各人唾液淀粉酶活性调整) ，混匀备用。(3) 碘化钾 -碘溶液将碘化钾20g 及碘 10g 溶于 100ml 水中。使用前稀释10 倍。(二)、ph 对酶活性的影响1、器材(1) 试管及试管架(2) 吸管(3) 滴管(4) 50ml 锥形瓶(5) 恒温水浴2、试剂和材料(1) 新配制的溶于0.3%氯化钠的0.5%淀粉溶液250 ml (2)0.2mol/l磷酸氢二钠溶液100 ml(3)0.1mol/l磷酸氢二钠溶液600 ml (4)0.

6、1mol/l柠檬酸溶液400 ml(5) 碘化钾 -碘溶液 50 ml(6) ph 试纸 ph=5 、ph=5 、ph=6.8 、ph=8 四种(三)、唾液淀粉酶的活化和抑制1、器材(1) 恒温水浴(2) 试管及试管架2、试剂和材料(1)0.1% 淀粉溶液150 ml(2) 稀释 200 倍的新鲜唾液150 ml (3)1% 氯化钠溶液50 ml(4) 1% 硫酸铜溶液50 ml(5) 1% 硫酸钠溶液50 ml(6) 碘化钾 -碘溶液 100 ml (四)、酶的专一性1、器材(1) 恒温水浴(2) 沸水浴(3) 试管及试管架2、试剂和材料(1) 2% 蔗糖溶液150 ml(2) 溶于 0.3

7、%氯化钠的1% 淀粉溶液 (需新鲜配制 )150 ml(3) 稀释 200 倍的新鲜唾液100 ml(4) 蔗糖酶溶液100 ml将啤酒厂的鲜酵母用水洗涤23 次(离心法 ),然后放在滤纸上自然干燥.取干酵母100g，置于乳钵内， 添加适量蒸馏水及少量细沙，用力研磨提取约1 小时， 再加蒸馏水使总体积约为原体积的10 倍。离心，将上清液保存于冰箱中备用。(5) benedict 氏试剂无水硫酸铜 17.4g 溶于 100 ml 热水中，冷却后稀释到 150 ml 。取柠檬酸钠 173g，无水碳酸钠 100g 和 600 ml 水共热，溶解后冷却并加水至 850 ml 。再将冷却的 150 ml

8、 硫酸铜溶液倾入。本试剂可长久保存。【实验步骤】(一)、温度对酶活力的影响淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色。糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。 最简单的糊精遇碘不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色。在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水解的程度可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。取 3 支试管，编号后按下表加入试剂：管号123淀粉溶液（ ml ）1.51.51.5稀释唾液（ ml ）11-煮沸过的稀释唾液-1摇匀后，将1、3 号两试管放入37恒温水浴中，2 号试管放入冰水中。10 分钟后取出（将 2 号管内液体分为两半） ，用碘化钾一碘溶液来检验1、2、3 号管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。记

9、录并解释结果，将2 号管剩下的一半溶液放入37水浴中继续保温10 分钟后，再用碘液实验，观察并记录结果如何？(二)、ph 对酶活性的影响取 4 个标有号码的50 ml 锥形瓶。用吸管按下表添加0.2mol/l 磷酸氢二钠溶液和0.1mol/l柠檬酸溶液以制备ph5.08.0 的 4 种缓冲液。0.2mol/l0.1 mol/l锥形瓶号码磷酸氢二钠 (ml)柠檬酸 (ml)15.154.855.026.313.696.037.722.286.849.720.288.0从 4 个锥形瓶中各取缓冲液3 ml ，分别注入4 支带有号码的试管中，随后于每个试管中ph添加 0.5%淀粉溶液2 ml 和稀释

10、 200 倍的唾液2ml 。向各试管中加入稀释唾液的时间间隔各为 1 分钟。将各试管中物质混匀，并依次置于37恒温水浴中保温。待向第 4 管加入唾液2 分钟后 ,每隔 1 分钟由 3 管取出一滴混合液，置于白瓷板上，加1小滴碘化钾一碘溶液，检验淀粉的水解程度。待混合液变为棕黄色时，向所有试管依次添加12 滴碘化钾一碘溶液。添加碘化钾-碘溶液的时间间隔，从第1 管起，亦均为1 分钟。观察各试管中物质呈现的颜色，分析ph 对唾液淀粉酶活性的影响。(三)、唾液淀粉酶的活化和抑制管号12340.1%淀粉溶液 (ml)1.51.51.51.5稀释唾液 (ml)0.50.50.50.51%硫酸铜溶液 (m

11、l)0.51%氯化钠溶液 (ml)0.51%硫酸钠溶液 (ml)0.5蒸馏水 (ml)0.5(四)、酶的专一性（1） 淀粉酶的专一性12345641444441111137恒温水浴15 分钟管号1%淀粉溶液（滴）2%蔗糖溶液（滴） 稀释唾液（ ml）煮沸过的稀释（ml ） 蒸馏水（ ml ）benedict 试剂（ ml ）111111沸水浴 23 分钟观察现象。（2） 蔗糖酶的专一性管号1234561%淀粉溶液（滴）4442%蔗糖溶液（滴）444蔗糖酶溶液（ml ）11煮沸过的蔗糖酶溶液（ml）11蒸馏水（ ml ）1137恒温水浴5 分钟benedict 氏试剂（ ml ）111111沸水

12、浴 23 分钟观察现象。【实验结果与数据处理】(一)、温度对酶活力的影响编号1232#先冰水浴37恒温水浴条件10 分钟37恒温水浴冰水浴 10 分钟10 分钟10min, 再 37 恒温水浴10 分钟现象黄色蓝色深蓝色黄色(二)、ph 对酶活性的影响编号1234条件37 恒 温 水 浴10 分钟37 恒 温 水 浴10 分钟37 恒 温 水 浴10 分钟37 恒 温 水 浴10 分钟现象蓝色黄色黄色黄色(三)、唾液淀粉酶的活化和抑制编号1234条件37恒温水浴、保温10 分钟碘化钾 -碘溶液(滴)23232323现象深蓝色无色浅蓝蓝色(四)、酶的专一性（1） 淀粉酶的专一性编号123456第一步37恒温水浴15 分钟第二步benedict 试剂（ ml ）111111第三步沸水浴 23 分钟现象浅蓝色浅蓝色砖红色沉淀浅蓝色浅蓝色浅蓝色（2） 蔗糖酶的专一性编号123456第一步37恒温水浴15 分钟第二步benedict 试剂（ ml ）111111第三步沸水浴 23 分钟现象浅蓝色浅蓝色浅蓝色浅蓝色砖红色沉淀浅蓝色