阴道微生态评价

1、阴道微生态评价阴道微生态评价及其适宜技术及其适宜技术 个旧市人民医院检验科个旧市人民医院检验科 王锐王锐 护理生殖道护理生殖道关注微生态关注微生态 最重要！最重要！阴道阴道粘膜粘膜阴道阴道正常正常菌群菌群阴道阴道免疫免疫系统系统阴道微生态概念阴道微生态概念阴道防御系统阴道防御系统阴道微生态是阴道最重要的防御系统阴道微生态是阴道最重要的防御系统阴道原籍菌阴道原籍菌(乳酸杆菌乳酸杆菌)数量数量:8x107 cfu/ ml5%95%123 正常育龄妇女阴道菌群由六种不同种类的正常育龄妇女阴道菌群由六种不同种类的细菌以及念珠菌、支原体等组成细菌以及念珠菌、支原体等组成。正常阴道内有正常阴道内有100种

2、微生物存在。种微生物存在。这些微生物在阴道内形成生态平衡。这些微生物在阴道内形成生态平衡。阴道菌群（阴道的微生态系统）阴道菌群（阴道的微生态系统）阴道微生态概念阴道微生态概念CFU (Colony-Forming Units) 经培养所得菌簇形成单位的英文缩写。 细菌（可见）和真菌的测量单位。cfu:colony-forming unit，菌落形成单位，将稀释后的一定量的菌液通过浇注或涂布的方法，让其内的微生物单细胞一一分散在琼脂平板上，待培养后，每一活细胞就形成一个菌落。与常规利用显微镜对微生物数量进行测量不同，主要是对可见（即多数情况下形成菌落）的细菌数量进行测量的单位。 意思就是每毫升菌

3、液中含有多少单细胞！ 阴道粘膜上皮细胞阴道粘膜上皮细胞（过路菌）（过路菌）乳杆菌（原籍菌）乳杆菌（原籍菌）（条件致病菌）（条件致病菌）是由不同种属是由不同种属的宿主传来的的宿主传来的是其自身宿主个体对其是其自身宿主个体对其无免疫反应或低免疫反应，无免疫反应或低免疫反应，是宿主个体固有的菌群是宿主个体固有的菌群 是由同种属不同是由同种属不同宿主个体传来的宿主个体传来的阴道微生态概念阴道微生态概念乳杆菌的作用机制乳杆菌的作用机制u分解糖原，维持阴道酸性环境。u产生多种抑菌物质：乙酸、16-18碳脂肪酸 H202、乳酸菌素、硬脂酸等。u竞争粘附：也称占位性保护。u竞争营养物质：大量定位于阴道中的乳杆

4、菌处 于竞争优势状态，利用阴道上皮 细胞中的糖原，减少其他细菌的 碳源供应，通过竞争营养物质而 干扰一些厌氧菌如白色假丝酵母 菌（白念）的生长。维持酸性环境维持酸性环境形成保护性菌膜形成保护性菌膜杀灭致病菌杀灭致病菌乳酸杆菌乳酸杆菌正常阴道菌群作用正常阴道菌群作用阴道微生态平阴道微生态平衡的核心：衡的核心：维持乳酸维持乳酸菌特别是菌特别是产产H2O2乳乳酸菌在阴酸菌在阴道菌群中道菌群中的优势地的优势地位！位！ 在阴道粘膜表面形成一层保护性菌膜，在阴道粘膜表面形成一层保护性菌膜，防止入侵微生物在阴道粘膜上定植防止入侵微生物在阴道粘膜上定植 乳酸菌产生的乳酸使阴道乳酸菌产生的乳酸使阴道分泌物维持酸

5、性环境；分泌物维持酸性环境；乳酸菌产生的乳酸菌产生的H2O2可可杀灭入侵的致病菌。杀灭入侵的致病菌。阴道微生态概念阴道微生态概念 乳杆菌乳杆菌数量减少，生数量减少，生化指化指标标改改变变， ， 阴道微生阴道微生 态态破坏破坏阴道菌阴道菌群失调群失调 各类各类阴道炎阴道炎 加重加重阴道菌阴道菌群失调群失调各种各种诱因诱因各类阴道炎的共性各类阴道炎的共性-源于或伴有微生态破坏！源于或伴有微生态破坏！为什么要关注阴道微生态为什么要关注阴道微生态菌群演变造成菌群结构改变，特点：菌群演变造成菌群结构改变，特点：1、厌氧菌需氧菌、等条件致病菌大量增加、厌氧菌需氧菌、等条件致病菌大量增加 2、乳酸菌特别是产

6、过氧化氢乳酸菌减少或消失、乳酸菌特别是产过氧化氢乳酸菌减少或消失所有的阴道感染所有的阴道感染都源于或伴有阴都源于或伴有阴道微生态改变道微生态改变 乳酸菌%厌氧菌%加德纳菌%支原体% LB- LB正常80-10080-10070-10070-100 10-4010-400-300-30 20-40 20-40宫颈炎10-4010-4010-3010-3030-5030-5020-4020-4060-8060-80BV 0-20 0-20 0-10 0-10 40-70 40-70 60-80 60-80 40-60 40-60滴虫阴道炎10-4010-400-200-2010-3010-300-

7、300-3020-4020-40霉菌阴道炎20-5020-500-400-4020-3020-3010-4010-4020-3020-30 老年性阴道炎0-200-200-100-1040-6040-6020-4020-4050-6050-60 通过形态学、生物化学、通过形态学、生物化学、 免疫学和分子生物学免疫学和分子生物学 等等 方法所获得的阴道菌群方法所获得的阴道菌群 数量和功能方面的信息数量和功能方面的信息 分析阴道分析阴道菌群结构菌群结构的演替的演替正常优势菌正常优势菌的菌群数量的菌群数量与功能变化与功能变化条件致病条件致病微生物菌微生物菌群数量与群数量与功能功能变变化化外来致病外来

8、致病微生物菌微生物菌群数量与群数量与功能功能变变化化 机体反机体反应应水平水平如何评价阴道微生态？如何评价阴道微生态？ - -阴道微生态评价的内涵阴道微生态评价的内涵为什么要关注阴道微生态为什么要关注阴道微生态形态学生物标志物形态学生物标志物 菌群数量与功能的变化菌群数量与功能的变化形态学评价形态学评价-菌群数量的变化菌群数量的变化： 形态学的方法形态学的方法系统的方法系统的方法-阴道微生态评价内容阴道微生态评价内容阴道微生态评价的内容阴道微生态评价的内容 标本中细菌分布、排标本中细菌分布、排列的密集程度，列的密集程度， 即每克即每克或每毫升标本中的菌落数。或每毫升标本中的菌落数。 分级标准分

9、级标准(放大倍放大倍10100观察每观察每视野平均细菌数视野平均细菌数)I级级 （记为（记为“+”）1个个9个个 II级级 （记为（记为“+”） 10个个99个个 III级级 （记为（记为“+”） 100个以上个以上 IV级级 （记为（记为“+ +”） 细菌聚集成团细菌聚集成团 (涂片中所见细菌种类涂片中所见细菌种类) I级级 （记为（记为“+”） 能辨别能辨别13种细菌；种细菌； II级级 （记为（记为“+”） 能辨别能辨别46种细菌；种细菌； III级级 （记为（记为“+”） 能辨能辨别别710种细菌；种细菌； IV级级 （记为（记为+） 能辨别能辨别11种以上细菌。种以上细菌。(局部有无

10、炎症局部有无炎症-菌群的致病性菌群的致病性) 有无白细胞、有无白细胞、脓细胞渗出，脓细胞渗出， 有无吞噬现象有无吞噬现象等。等。菌群的密集度菌群的密集度机体炎性反应机体炎性反应菌群的多样性菌群的多样性优势菌优势菌阴道微生态形态学评价阴道微生态形态学评价 存在的问题存在的问题 形态学评价结果的可靠性形态学评价结果的可靠性 与实验室人员的技能和责任有关与实验室人员的技能和责任有关 不能了解阴道菌群中正常优势菌和有害菌的功能不能了解阴道菌群中正常优势菌和有害菌的功能阴道微生态评价的内容阴道微生态评价的内容 A、正常优势菌功能生物学标志、正常优势菌功能生物学标志 B、致病微生物与条件致病微生、致病微生

11、物与条件致病微生 物增殖的生物学标志物增殖的生物学标志 C、机体反应性的生物学标志、机体反应性的生物学标志了解菌群数量的变化了解菌群数量的变化形态学评价形态学评价生物标志物生物标志物了解菌群了解菌群数量与功数量与功能的变化能的变化阴道微生态阴道微生态系统评价系统评价阴道微生态评价的内容阴道微生态评价的内容 唾液酸苷酶唾液酸苷酶BV 门冬酰胺蛋白门冬酰胺蛋白酶酶霉菌性阴道炎霉菌性阴道炎胱胺酰蛋白酶胱胺酰蛋白酶滴虫性阴道炎滴虫性阴道炎乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶急性化脓性阴道炎急性化脓性阴道炎透明质酸酶透明质酸酶BV、淋菌性阴道炎、淋菌性阴道炎白细胞酯酶白细胞酯酶宫颈炎及各种阴道感染宫颈炎及各种阴道感染

12、短链脂肪酸（如乙酸、琥珀酸）增加短链脂肪酸（如乙酸、琥珀酸）增加 单胺和多胺增加（胺试验阳性）单胺和多胺增加（胺试验阳性） 菌胞壁糖类（如阿拉伯醇糖）增加菌胞壁糖类（如阿拉伯醇糖）增加阴道微生态评价的方法阴道微生态评价的方法生物化学方法生物化学方法微生物学方法微生物学方法分子生物学方法分子生物学方法免疫学方法免疫学方法1 优势菌优势菌(乳酸菌乳酸菌)功能的生化标志物功能的生化标志物2 致病与条件致病微生物致病与条件致病微生物增殖的生化标志物增殖的生化标志物3 机体反应性的生化标志物机体反应性的生化标志物 乳酸菌代谢包括：过氧化氢、乳酸菌代谢包括：过氧化氢、 乳乳 酸酸 乳酸菌素乳酸菌素微生物微

13、生物代谢产物代谢产物细菌、衣原体等病原体大量增殖细菌、衣原体等病原体大量增殖白细胞白细胞吞噬病原体过多吞噬病原体过多病原体释放的水解酶和病原体释放的水解酶和毒素分解白细胞壁毒素分解白细胞壁白细胞酯酶释放到胞白细胞酯酶释放到胞外外分泌物中白细胞酯酶活性增高。分泌物中白细胞酯酶活性增高。过氧化氢浓度过氧化氢浓度SNA活性活性LE活性活性生态优势菌指标生态优势菌指标致病菌指标致病菌指标宿主反应指标宿主反应指标卫卫生部十年百生部十年百项计项计划推广划推广项项目目江西省星火江西省星火计计划划项项目目浙江省医浙江省医药卫药卫生科技重点推广生科技重点推广项项目目 了解阴道菌群结构了解阴道菌群结构和功能的变化

14、，和功能的变化， 评价阴道的微生态状况评价阴道的微生态状况阴道微生态评价适宜技术阴道微生态评价适宜技术 阴道微生阴道微生态评态评价适宜技价适宜技术术-细菌性阴道病联合测定技术介绍细菌性阴道病联合测定技术介绍标本采集要规范标本采集要规范 各种病原体的性质和检测各种病原体的性质和检测要求的不同，决定了标本的种要求的不同，决定了标本的种类、取材部位、和保存条件标类、取材部位、和保存条件标本运输方式等都有不同，采集本运输方式等都有不同，采集标本上如有错误或疏忽，都会标本上如有错误或疏忽，都会影响检验结果。影响检验结果。标本采集的规范标本采集的规范 一般阴道感一般阴道感 染诊断的取染诊断的取 材，须取阴

15、材，须取阴 道后穹隆部道后穹隆部 位的分泌物。位的分泌物。 要尽量使用要尽量使用 大一些的棉大一些的棉 签取样，要签取样，要 将棉签在取将棉签在取 材部位旋转材部位旋转 并停留并停留20秒秒 要使用试剂盒要使用试剂盒 配套的保存液配套的保存液 保存标本。标保存标本。标 本在本在2-8保存保存 不宜超过不宜超过2天。天。取材之前取材之前24小时小时内，应无性交、内，应无性交、无盆浴或阴道冲无盆浴或阴道冲洗；在洗；在48小时内小时内未使用阴道润滑未使用阴道润滑剂或阴道剂或阴道“兴奋剂兴奋剂”等化学物质等化学物质一般要求一般要求取材部位要准确取材部位要准确取材方法要得当取材方法要得当标本量要充足标本

16、量要充足标本要正确保存标本要正确保存及时检验及时检验正确取材要把握一下几点正确取材要把握一下几点标本采集的规范标本采集的规范检验原理检验原理nH2O2阴道乳酸杆菌标志物n唾液酸苷酶NAase加德纳菌、游动弯曲杆 菌等BV致病菌的标志物。n白细胞酯酶炎性细胞的标志物。H2O2（反应装置上部的反应孔） 阴道液中过氧化氢经过过氧化物酶作用，释放出新生态氧，后者在4-氨基安替吡啉存在下，使3,5-二氯-2-羟基苯磺酸氧化成红色或紫色，在反应系统中加入3,5-二氯-2-羟基苯磺酸的拮抗物，当标本中H2O2浓度2mol/L，反应结果呈红色或紫色，呈色深度与H2O2 浓度成正比，标本中H2O2浓度 2mol

17、/L，反应结果呈蓝色。结果判读：u 阴性：显红色、紫色或蓝紫色u 阳性：蓝色u参考范围： 2mol/L为阴性唾液酸苷酶活性测定（反应装置中部的反应孔） 唾液酸苷酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸盐，释放出溴吲哚基遇重氮盐起反应呈红色或紫色，呈色深度与唾液酸苷酶活性呈正比。结果判读：u阴性：不显色或黄色u阳性：红色、紫色或蓝色，显蓝色表示唾液酸 苷酶活性浓度很高。u参考范围： 7U/ml为阴性白细胞酯酶（反应装置下部的反应孔） 白细胞酯酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐，释放出溴吲哚基，后者在氧的条件下呈蓝色或绿色，呈色深度与白细胞酯酶活性成正比。结果判读：参照比色板比色判读结果u阴性：“

18、-”或“”u阳性：“+”、“+”、“+”u参考范围：白细胞酯酶7U/ml为阴性 产过氧化氢乳酸产过氧化氢乳酸 菌占优势地位菌占优势地位 粘膜修复粘膜修复 炎症消失炎症消失 无引发无引发BV的的 细菌繁殖细菌繁殖正正 常常正正 常常阴阴 性性异异 常常增增 高高阳阳 性性过氧化氢浓度过氧化氢浓度LE活性活性SNa活性活性乳酸菌减少或消失乳酸菌减少或消失各种阴道感染各种阴道感染致病菌、条件致致病菌、条件致病菌增加病菌增加阴道微生态评价适宜技术阴道微生态评价适宜技术纠正了以白细胞纠正了以白细胞升高才为升高才为“炎症炎症”的的生殖道感染的概念生殖道感染的概念阴道感染诊断阴道感染诊断治疗思路的新治疗思路

19、的新突破突破临床用途临床用途指导妇产科临床医师从微生态角度重指导妇产科临床医师从微生态角度重新审视妇科感染性疾病；新审视妇科感染性疾病；关注感染及治疗后的阴道微生态状况，关注感染及治疗后的阴道微生态状况，树立树立“将阴道微生态恢复正常作为阴道将阴道微生态恢复正常作为阴道炎治疗的最终目标炎治疗的最终目标”的理念。的理念。A、弥补现有白带常规检查只做形态学检查、不弥补现有白带常规检查只做形态学检查、不做生化检查，不能准确判断感染的程度及阴道微做生化检查，不能准确判断感染的程度及阴道微生态、不能评价预后等不足；生态、不能评价预后等不足；B、 阴道微生态评价阴道微生态评价C、从微生态角度评价阴道炎是否治愈；从微生态角度评价阴道炎是否治愈