PCR技术与遗传病的产前诊断实用教案

1、PCRPCR在遗传病产前诊断中的地位在遗传病产前诊断中的地位(dwi)(dwi)PCRPCR在遗传病产前诊断的应用在遗传病产前诊断的应用第1页/共14页第一页，共15页。PCRPCR在遗传病产前诊断中的地位在遗传病产前诊断中的地位(dwi)(dwi)PCRPCR技术能在短时间内将靶技术能在短时间内将靶DNADNA扩增百万扩增百万倍，操作简便，省时，准确。它不仅能倍，操作简便，省时，准确。它不仅能直检突变基因，而且可与其它技术结合，直检突变基因，而且可与其它技术结合，使其诊断的准确性几乎达使其诊断的准确性几乎达100%.100%.因而它已因而它已成为目前遗传病产前诊断的主要手段成为目前遗传病产前

2、诊断的主要手段. .第2页/共14页第二页，共15页。产前基因诊断胎儿标本的来源产前基因诊断胎儿标本的来源由于由于PCRPCR技术本身的特点，即可在短时间内将技术本身的特点，即可在短时间内将微量的微量的DNADNA扩增数百万倍，因此扩增数百万倍，因此(ync)(ync)它适它适应于应于各种来源的各种来源的DNADNA标本标本. .(1)(1)羊水穿刺，在如羊水穿刺，在如1515周后可经母亲脆壁穿刺周后可经母亲脆壁穿刺获羊水，其内含有大量的胎儿脱细获羊水，其内含有大量的胎儿脱细胞胞5-10ml5-10ml羊水即羊水即可获得足够量的可获得足够量的PCRPCR分析分析DNADNA样品样品. .(2)

3、(2)绒毛采样，在如早期绒毛采样，在如早期(9-12(9-12周周) )经阴道在经阴道在B B超超引导采取绒毛样品，它含有丰富的引导采取绒毛样品，它含有丰富的DNA.DNA.第3页/共14页第三页，共15页。(3)(3)胎儿血液胎儿血液(xuy)(xuy)采集采集: :有简条途径有简条途径: :胎儿脐静脉胎儿脐静脉穿刺，胎儿锁采集穿刺，胎儿锁采集. .(4)(4)胎儿活检胎儿活检: :可用穿刺取样，亦可经胎儿镜取样可用穿刺取样，亦可经胎儿镜取样. .可在可在始始17-1917-19周进行周进行第4页/共14页第四页，共15页。（一）（一）PCRPCR技术技术(jsh)(jsh)直接诊断遗传直接

4、诊断遗传病病（1 1）、对于由基因缺失突变引起的遗传病可利用缺失区）、对于由基因缺失突变引起的遗传病可利用缺失区域的域的DNADNA序列引物直接序列引物直接(zhji)(zhji)扩增该区域，看有无特扩增该区域，看有无特异性的扩增产物异性的扩增产物第5页/共14页第五页，共15页。型地中海贫血型地中海贫血(pnxu)(pnxu)是一组遗传性溶血性贫是一组遗传性溶血性贫血疾病。由于遗传的血疾病。由于遗传的型珠蛋白基因型珠蛋白基因(jyn)(jyn)簇致使血红蛋白中簇致使血红蛋白中珠珠蛋白链合成缺如或不足蛋白链合成缺如或不足所导致的贫血或病理状所导致的贫血或病理状态。（其中缺失的基因态。（其中缺失

5、的基因(jyn)(jyn)包括包括11、22、1 1 和部分和部分基因基因(jyn)(jyn)。）。）第6页/共14页第六页，共15页。u 通过孕通过孕15 15 周的羊膜穿刺或孕周的羊膜穿刺或孕7 10 7 10 周的周的绒毛取样获得胎儿细胞绒毛取样获得胎儿细胞, ,提取提取DNADNA进行检测进行检测(jin c)(jin c)u 用用P C RP C R法扩增法扩增22和和1 1 之间区域之间区域, , 长长13 6 b P13 6 b P。u 也在同一个标本同时扩增也在同一个标本同时扩增珠蛋白基因珠蛋白基因作为对照，长作为对照，长110bp 110bp u P C R P C R 后电

6、泳检测后电泳检测(jin c)(jin c)。第7页/共14页第七页，共15页。2021-12-8l纯合子病人电泳结果只显示一条纯合子病人电泳结果只显示一条110b p 110b p 的的珠蛋白基因片段。珠蛋白基因片段。l正常个体则同时正常个体则同时(tngsh)(tngsh)显示显示1 1 1 1 0b p 0b p 的的珠蛋白基因片段和珠蛋白基因片段和1 3 6 b p1 3 6 b p的的a a 珠蛋白基因片段。珠蛋白基因片段。l根据特异扩增带的有无即可作出判断。根据特异扩增带的有无即可作出判断。结果(jigu)：第8页/共14页第八页，共15页。（2 2）对基因的重排来说，当点突变影）

7、对基因的重排来说，当点突变影响到限制性内切酶切点时，将扩增产物响到限制性内切酶切点时，将扩增产物用适当的内切酶切割用适当的内切酶切割(qig)(qig)，然后，然后据电泳图谱复制判断有无内切酶切点的据电泳图谱复制判断有无内切酶切点的改变改变第9页/共14页第九页，共15页。镰状细胞镰状细胞(xbo)(xbo)性贫血性贫血分子基础是分子基础是珠蛋白基因珠蛋白基因(jyn)(jyn)第第6 6 密码子密码子G A G G A G G T G G T G 即即A TA T的转变的转变第10页/共14页第十页，共15页。l以以P C R P C R 法扩增法扩增-珠蛋白基因中一个珠蛋白基因中一个294

8、bp294bp片段。片段。l扩增产物以限制性内切酶扩增产物以限制性内切酶OxaNIOxaNI消化消化（内切酶（内切酶OxaNIOxaNI的作用位点为的作用位点为GAG)GAG)。l产物经产物经E BE B染色染色(rns)(rns)或银染、电泳或银染、电泳第11页/共14页第十一页，共15页。2021-12-8l正常个体产生正常个体产生191bp191bp和和103bp103bp两个片段。两个片段。l纯合子纯合子(hz)(hz)患者则只有一个未被酶解患者则只有一个未被酶解的的294bp 294bp 的片段。的片段。l杂合子杂合子(hz)(hz)患者总共产生三个片段。患者总共产生三个片段。l可直接观察到不同长度的条带可直接观察到不同长度的条带, , 由此即可由此即可进行区别。进行区别。结果(jigu)：第12页/共14页第十二页，共15页。第13页/共14页第十三页，共15页。2021-12-8感谢您的观看(gunkn)！第14页/共14页第十四页，共15页。NoImage内容(nirng)总结PCR在遗传病产前诊断中的地位。第1页/共14页。（1）、对于由基因缺失突变引起的遗传病可利用缺失区域的DNA序列引物直接扩