最大耐受量试验研究报告

1、多次给予化合物抗肿瘤药 在Balb/c Nude雌性小鼠最大耐受量试验研究报告多次给予化合物抗肿瘤药 在Balb/c Nude雌性小鼠最大耐受量试验研究报告摘要我们对 公司提供的受试物抗肿瘤药在正常Balb/c Nude小鼠上进行了最大耐受量试验，以期找到不同给药剂量的抗肿瘤药通过尾静脉给药，在4种给药频率下分别对应的最大耐受剂量。4种给药频率分别为第1天和第8天给药、第1、5、9、13天给药、第1、3、5、7天给药及连续7天给药，每个给药频率对应3个不同的给药剂量。结果显示：给药频率为只第1天、第8天给药及给药频率为连续7天给药的最大耐受量分别为225mg/kg和30mg/kg。给药频率为第

2、1、5、9、13天给药和第1、3、5、7天给药所对应的剂量均均未降低动物体重，需进一步摸索这两种给药频率的最大耐受剂量。目录1实验目的52遵循原则53研究进度表54药品试剂和仪器55受试物配制66实验动物饲养77实验设计88数据统计99数据和文件保存910实验结果911总结1712附件17实验目的本实验是研究多次尾静脉给予受试物抗肿瘤药对Balb/c Nude小鼠的毒性反应，确定该受试物的最大耐受量（MTD）。最大耐受量(MTD)是指不会发生动物死亡，动物的体重降低不会超过10%（与Day 1相比），或者不产生明显毒副作用的剂量。最大耐受量的确定对药效试验剂量的设计有一定的参考价值。1 遵循原

3、则该实验为非临床实验研究，属于非GLP实验，不完全参照美国FDA的GLP管理规范来实施，并且不需要质量保证部门的审察。但实验设计，动物选择和动物饲养等都严格按照实验计划书和上海 生物医药股份有限公司标准操作规程（SOP）进行。2 研究进度表给药开始日期：2017年08月28日§实验结束日期：2017年09月10日报告发出日期：2017年10月18日§：首次给药，定义为实验第1天3 药品试剂和仪器4.1 受试物名称：抗肿瘤药批号：CZFY05-32-抗肿瘤药性状：白色粉末分子量：808.69纯度：99.29%储存条件：44.2 其他试剂无水乙醇级别：药用级批号：1701120

4、09B来源：南京化学试剂股份有限公司Cremophor ELP批号：99258816K0来源：BASF公司生理盐水批号：16083102来源：华裕（无锡）制药有限公司4.3 实验仪器分析天平型号：BSA223S编号：MI-A-01-01厂家：Sartorius超声波清洗器型号：KQ-500型编号：R-B-14-01厂家：昆山市超声仪器有限公司立式压力灭菌蒸汽锅型号：YXQ-LS-100G编号：P-B-16-01厂家：上海博迅实业有限公司4 受试物配制5.1 储备液5.1.1 储备液的配制比例：供试品：60mg；无水乙醇：0.3ml；Cremophor ELP：0.5ml5.1.2储备液的配制：

5、储备液由上海 生物医药股份有限公司CMC部门配制，共10ml，检测后终浓度为74.2mg/ml配制方法：按比例加入无水乙醇，搅拌或超声使抗肿瘤药溶解完全，再加入相应体积的Cremophor ELP，混合充分至完全澄清。5.2工作液配制以第一天给药为例：生理盐水抗肿瘤药 6 mg/ml：1.474 ml 6 mg/ml稀释时，先加入相应量的生理盐水，再量取一定量的储备液，充分混合至溶液完全澄清。5.3 受试物处理和安全防护受试物将根据客户提供的受试物储存条件进行储存。项目结束以后由上海 生物医药有限公司保存或者存放在客户指定的地点。实验人员应遵循实验设施要求的所有安全防护措施。5 实验动物饲养6

6、.1 动物品系：Balb/c nude小鼠级别：SPF性别: 雌性来源: 上海斯莱克实验动物责任有限公司动物数量：订购40只，选择体重适宜的36只小鼠用于实验动物到达日期：2017-08-18动物合格证号：2015000541918动物生产许可证号：SCXK（沪）2012-0002实验开始时动物年龄：6-8 周龄 实验开始时动物体重: 18-22 克适应环境时间：5-7 天动物编号方式：每个鼠笼均佩挂有实验编号、实验组别、实验人员姓名、小鼠品种和性别等信息的身份卡片，小鼠用尾根部画线标记。6.2 环境动物房环境保持温度23±2°C, 湿度40-70%, 12小时明暗交替。6

7、.3 食物和水动物饲料购自北京科澳协力饲料有限责任公司。实验动物用水采用过滤灭菌水。实验过程中动物自由饮食和饮水。6.4 实验动物选择说明由于后续药效实验使用雌性Balb/c nude小鼠的肿瘤模型，所以本实验选用雌性Balb/c nude小鼠。6 实验设计7.1 实验设计的依据及原则实验根据动物体重随机分成12组，每组3只，按照委托方提供的实验方案要求给药。给药后每天进行一次临床观察，每天同一时间测量体重并进行笼边观察，连续观察称重14天，最终根据实验结果确定Balb/c Nude小鼠对受试物抗肿瘤药的耐受性，确定多次给药的安全范围。7.2 动物分组动物分组情况如下：组别受试物动物数剂量(m

8、g/kg)给药浓度(mg/mL)给药体积(mL/kg)给药方式给药方案（裸鼠以20g计）1抗肿瘤药3300650i.v.0.5ml*2times，D1,82抗肿瘤药3225637.5i.v.0.375ml*2times，D1,83抗肿瘤药3150625i.v.0.25ml*2times，D1,84抗肿瘤药3120620i.v.0.4ml*1time，D1,5,9,135抗肿瘤药390615i.v.0.3ml*1time，D1,5,9,136抗肿瘤药360610i.v.0.2ml*1time，D1,5,9,137抗肿瘤药380613.3i.v.0.267 ml*1time，D1,3,5,78抗肿

9、瘤药360610i.v.0.2ml*1time，D1,3,5,79抗肿瘤药34066.67i.v.0.133ml*1time，D1,3,5,710抗肿瘤药34066.67i.v.0.133ml*1time，D1-711抗肿瘤药33065i.v.0.1ml*1time，D1-712抗肿瘤药32063.33i.v.0.067 ml*1time，D1-77.3 动物实验期观察7.3.1 笼边观察所有动物每天进行两次笼边观察，观察内容包括发病、死亡率和供食供水情况。如动物处于不好的健康状态进行进一步观察。7.3.2 详细临床观察实验过程中需对所有的受试动物进行详细临床观察，给药后每天两次（上10:00

10、、下午16：00各一次），连续观察14天，观察包括但不仅限于：皮肤，毛发，眼，耳，鼻，口腔，胸腹部，外生殖器，四肢和脚，呼吸及循环系统，自主效应（如流涎），神经系统（如震颤，抽搐，应激反应以及反常行为）。7.3.3 体重给药前称量动物的体重，随后每天在同一时间称量动物的体重并记录。7 数据统计实验数据除特别指出外，均以Mean±SEM 表示。8 数据和文件保存所有与本实验相关的记录，包括电子数据和文本数据，将会保管在上海 生物医药有限公司的保密电脑中和安全区域。9 实验结果10.1 临床症状给药频率为第1天、第8天给药的三个剂量组中，G1组的三只动物及G2-1动物在第一次给药后第3天

11、活动减少，到第5天全部恢复；第8天给药后没有明显临床症状。给药频率为连续7天给药的三个剂量组中，G10-1在第7天活动减少；第8天，G10-1活动减少，弓背，G10-2活动减少，G10-3活动减少并伴有血便；第9天和第10天，G10-3持续活动减少但未见血便；从第11天开始动物逐渐恢复。其它动物未见明显临床症状。10.2 致死率未出现小鼠死亡。16 of 1610.3 受试物抗肿瘤药不同给药剂量及4种给药频率对实验动物体重的影响受试物抗肿瘤药统一给药浓度为6mg/ml。共4种给药频率，每种频率对应3个给药剂量，实验共进行了14天。（见表1，图1）表1-1 受试物抗肿瘤药不同给药剂量及4种给药频

12、率对实验动物体重（g）的影响（n=3，Mean±SEM）Group2017/8/282017/8/292017/8/302017/8/312017/9/12017/9/22017/9/31234567G1 抗肿瘤药 300mg/kg IV/0.5ml*2times，D1,820.60±0.2620.20±0.2518.57±0.2217.43±0.4518.30±0.7819.20±0.8419.93±0.52G2 抗肿瘤药 225mg/kg IV/0.375ml*2times，D1,820.57±0.7

13、520.33±0.8219.20±1.0319.17±1.4520.03±1.0320.30±0.9320.63±0.73G3 抗肿瘤药 150mg/kg IV/0.25ml*2times，D1,820.50±0.6620.23±0.7319.17±0.6619.30±0.8020.37±0.6320.80±0.5021.20±0.49G4 抗肿瘤药 120mg/kg IV/0.4ml*1time，D1,5,9,1320.50±0.5920.87±

14、;0.4320.60±0.4520.77±0.4421.20±0.5921.10±0.4221.13±0.47G5 抗肿瘤药 90mg/kg IV/0.3ml*1time，D1,5,9,1320.53±0.5220.77±0.4420.73±0.3720.90±0.3121.47±0.3821.07±0.3521.13±0.47G6 抗肿瘤药 60mg/kg IV/0.2ml*1time，D1,5,9,1320.50±0.5220.97±0.3221.27

15、±0.4321.23±0.4821.43±0.4921.20±0.3521.27±0.18G7 抗肿瘤药 80mg/kg IV/0.267 ml*1time，D1,3,5,720.57±0.5520.83±0.4120.90±0.4420.27±0.3320.67±0.5320.47±0.6120.30±0.46G8 抗肿瘤药 60mg/kg IV/0.2ml*1time，D1,3,5,720.60±0.5321.07±0.6121.17±0.6

16、520.50±0.4020.67±0.2320.30±0.1520.33±0.20G9 抗肿瘤药 40mg/kg IV/0.133ml*1time，D1,3,5,720.60±0.5621.20±0.6121.40±0.6120.83±0.5020.90±0.4720.70±0.5520.80±0.57G10 抗肿瘤药 40mg/kg IV/0.133ml*1time，D1-720.63±0.5521.40±0.7020.80±0.7820.13±

17、;0.8719.03±1.0317.53±1.2716.93±1.02G11 抗肿瘤药 30mg/kg IV/0.1ml*1time，D1-720.53±0.3821.07±0.5220.93±0.4120.20±0.1219.97±0.3319.97±0.5019.70±0.40G12 抗肿瘤药 20mg/kg IV/0.067 ml*1time，D1-720.57±0.9021.10±0.8421.13±0.7321.03±0.6121.20±

18、;0.5321.13±0.6521.03±0.73表1-2 受试物抗肿瘤药不同给药剂量及4种给药频率对实验动物体重（g）的影响（n=3，Mean±SEM）Group2017/9/42017/9/52017/9/62017/9/72017/9/82017/9/92017/9/10891011121314G1 抗肿瘤药 300mg/kg IV/0.5ml*2times，D1,820.37±0.1519.83±0.3519.20±0.4419.83±0.4220.13±0.5020.47±0.5420.57&#

19、177;0.35G2 抗肿瘤药 225mg/kg IV/0.375ml*2times，D1,820.57±0.7820.10±0.7619.70±0.8920.43±0.8820.43±0.9020.83±0.7821.03±0.72G3 抗肿瘤药 150mg/kg IV/0.25ml*2times，D1,821.10±0.5220.47±0.3920.23±0.4720.80±0.6021.07±0.5921.57±0.5421.70±0.45G4 抗肿

20、瘤药 120mg/kg IV/0.4ml*1time，D1,5,9,1320.90±0.4221.20±0.3520.63±0.4320.57±0.4420.43±0.5020.67±0.4720.33±0.50G5 抗肿瘤药 90mg/kg IV/0.3ml*1time，D1,5,9,1321.10±0.5921.27±0.5220.97±0.7020.90±0.7020.77±0.7821.17±0.5820.97±0.59G6 抗肿瘤药 60mg/k

21、g IV/0.2ml*1time，D1,5,9,1321.20±0.1021.27±0.3921.07±0.3821.07±0.4520.90±0.2621.00±0.1220.83±0.12G7 抗肿瘤药 80mg/kg IV/0.267 ml*1time，D1,3,5,719.77±0.4220.03±0.4820.50±0.3520.80±0.3121.07±0.3821.10±0.3221.03±0.24G8 抗肿瘤药 60mg/kg IV/0.2

22、ml*1time，D1,3,5,720.03±0.1920.10±0.2520.90±0.3621.03±0.4321.27±0.3821.57±0.4321.60±0.56G9 抗肿瘤药 40mg/kg IV/0.133ml*1time，D1,3,5,720.57±0.6420.67±0.6420.80±0.7020.90±0.7220.77±0.7520.97±0.7721.17±0.94G10 抗肿瘤药 40mg/kg IV/0.133ml*1tim

23、e，D1-716.17±0.8017.07±0.7817.53±0.9418.13±0.9618.53±1.0719.37±0.9820.00±0.62G11 抗肿瘤药 30mg/kg IV/0.1ml*1time，D1-720.03±0.3220.60±0.5520.67±0.5420.77±0.6920.53±0.8220.57±0.8720.70±0.89G12 抗肿瘤药 20mg/kg IV/0.067 ml*1time，D1-721.00

24、7;0.8421.40±0.8121.50±0.7021.47±0.6621.17±0.5521.57±0.5221.67±0.78图1 受试物抗肿瘤药不同给药剂量及4种给药频率对实验动物体重（g）的影响（n=3，Mean±SEM） 10.4 受试物抗肿瘤药不同给药剂量及4种给药频率对实验动物体重变化率的影响给药频率为第1天、第8天给药的三个剂量组，在第一次给药后体重逐渐下降，G1组于第4天体重下降最多，达到15.3%；G2组于第4天下降最多，达到7.06%；G3组于第3天下降最多，达到6.52%，随后三组动物都逐渐恢复体重

25、。第二次给药后（即第8天），G1组于第10天体重下降最多，达到6.73%；G2组于第10天下降最多，达到4.27%；G3组于第10天下降1.24%，随后三组动物都逐渐恢复体重。给药频率为连续7天给药的三个剂量组，G10组于给药后第8天体重下降最多，达到21.65%；G11组动物体重有一定波动；G12组体重未降低。给药频率为第1、5、9、13天给药和第1、3、5、7天给药对应的给药剂量，没有降低动物体重。（见表2，图2）表2-1 受试物抗肿瘤药不同给药剂量及4种给药频率对实验动物体重变化率（%）的影响（n=3, Mean±SEM）Group2017/8/282017/8/292017/

26、8/302017/8/312017/9/12017/9/22017/9/31234567G1 抗肿瘤药 300mg/kg IV/0.5ml*2times，D1,80.00±0.00-1.94±0.73-9.82±2.18-15.30±3.18-11.07±4.72-6.70±4.95-3.16±3.47G2 抗肿瘤药 225mg/kg IV/0.375ml*2times，D1,80.00±0.00-1.16±0.48-6.76±1.86-7.06±4.04-2.69±1.95

27、-1.36±1.210.33±0.17G3 抗肿瘤药 150mg/kg IV/0.25ml*2times，D1,80.00±0.00-1.33±0.47-6.52±0.45-5.91±0.96-0.64±0.411.52±0.903.50±1.77G4 抗肿瘤药 120mg/kg IV/0.4ml*1time，D1,5,9,130.00±0.001.84±1.160.54±1.211.35±0.933.43±1.002.99±1.403.14&#

28、177;1.08G5 抗肿瘤药 90mg/kg IV/0.3ml*1time，D1,5,9,130.00±0.001.16±0.861.02±1.221.84±1.204.59±1.032.64±0.922.96±1.41G6 抗肿瘤药 60mg/kg IV/0.2ml*1time，D1,5,9,130.00±0.002.34±1.643.80±1.803.61±1.494.60±1.793.48±1.603.85±2.20G7 抗肿瘤药 80mg/kg

29、IV/0.267 ml*1time，D1,3,5,70.00±0.001.34±0.911.66±0.87-1.39±1.680.52±1.74-0.38±3.45-1.16±3.32G8 抗肿瘤药 60mg/kg IV/0.2ml*1time，D1,3,5,70.00±0.002.25±0.382.72±0.50-0.45±0.740.41±1.89-1.30±3.14-1.14±3.15G9 抗肿瘤药 40mg/kg IV/0.133ml*1time，

30、D1,3,5,70.00±0.002.91±0.853.88±0.851.17±1.401.50±1.500.54±2.461.00±1.74G10 抗肿瘤药 40mg/kg IV/0.133ml*1time，D1-70.00±0.003.68±0.840.75±1.10-2.50±1.81-7.86±3.11-15.14±4.96-17.99±3.99G11 抗肿瘤药 30mg/kg IV/0.1ml*1time，D1-70.00±0.002.

31、57±0.661.95±0.57-1.56±1.85-2.65±3.07-2.68±3.16-4.00±2.56G12 抗肿瘤药 20mg/kg IV/0.067 ml*1time，D1-70.00±0.002.63±0.422.84±0.992.40±1.513.25±2.092.88±1.682.35±1.20表2-2 受试物抗肿瘤药不同给药剂量及4种给药频率对实验动物体重变化率（%）的影响（n=3, Mean±SEM）Group2017/9/4201

32、7/9/52017/9/62017/9/72017/9/82017/9/92017/9/10891011121314G1 抗肿瘤药 300mg/kg IV/0.5ml*2times，D1,8-1.09±1.79-3.65±2.83-6.73±3.00-3.68±2.66-2.24±2.54-0.65±2.16-0.15±1.65G2 抗肿瘤药 225mg/kg IV/0.375ml*2times，D1,8-0.01±0.27-2.28±0.19-4.27±1.01-0.69±0.69-

33、0.70±0.741.29±0.412.29±0.48G3 抗肿瘤药 150mg/kg IV/0.25ml*2times，D1,83.01±1.98-0.07±1.57-1.24±0.971.48±0.332.79±0.435.25±0.775.93±1.33G4 抗肿瘤药 120mg/kg IV/0.4ml*1time，D1,5,9,132.01±1.373.49±1.380.70±0.880.37±0.90-0.30±0.430.85±0.62-0.79±0.41G5 抗肿瘤药 90mg/kg IV/0.3ml*1time，D1,5,9,132.79±2.133.62±2.102.10±2.101.77±1.811.09±1.853.09±1.382.12±1.64G6 抗肿瘤药 60mg/kg IV/0.2ml*1time，D1,5,9,133.55±2.703.78±0.962