生物样品前处理方法

1、生物样品前处理方法生物样品前处理方法姓名：朱文兵姓名：朱文兵学号：学号：201312282995201312282995专业：药剂学专业：药剂学Company Logo生物样品前处理的目的生物样品前处理的目的将药物从缀合物或结合物中释放出来，以测定药物的总浓度。将微量药物从复杂的介质中纯化、富集出来。为适应和符合分析方法所要求的专属性、灵敏度等。防止分析仪器的污染，提高测定灵敏度、准确度、精密度和选择性等。Company Logo生物样品前处理的重要性生物样品前处理的重要性进行体内药物分析时，除了极少数情况下只需将样品进行简单处理就可以直接测定外，都要采取分离、净化、浓缩、化学衍生化等预处理技

2、术，为测定创造良好的条件。样品预处理是体内药物分析中极为重要的环节，也是分析中最困难、最繁复的工作。由于药物在体内存在形式不同、待测药物浓度低、生物介质组分繁杂、待测药物类型众多、理化性质各异等原因，所以样品前处理过程的好坏会直接影响到样品的测定结果。Company Logo生物样品前处理的考虑因素生物样品前处理的考虑因素药物的理化性质和存在形式待测药物的浓度范围选用的生物样品类型样品预处理与分析技术的关系药物测定的目的Company Logo生物样品前处理生物样品前处理- -有机破坏法有机破坏法湿法破坏 硝酸-高氯酸法、电热消化器法、电热板消化法、烘箱消化法。干法破坏 高温电阻炉灰化法、低温

3、等离子灰化法。氧瓶燃烧法注意事项 有机破坏法均是破坏有机物，只能进行生物样品中的元素分析。Company Logo生物样品前处理生物样品前处理- -沉淀蛋白法蛋白沉淀法简介n蛋白沉淀法一般是通过加入有机溶剂、酸碱盐等使蛋白质蛋白沉淀法一般是通过加入有机溶剂、酸碱盐等使蛋白质变性而与待测组分分离。变性而与待测组分分离。n适用于强极性药物或两性类药物，这些药物难以用有机溶适用于强极性药物或两性类药物，这些药物难以用有机溶剂从血浆中提取。剂从血浆中提取。常用蛋白沉淀的方法n盐析法盐析法n有机溶剂沉淀法有机溶剂沉淀法n等电点沉淀法等电点沉淀法n离子型聚合物沉淀法离子型聚合物沉淀法Company Log

4、o生物样品前处理生物样品前处理- -沉淀蛋白法沉淀蛋白法甲醇、乙睛、丙酮和乙醇是沉淀蛋白常用的有机溶剂，中性盐常用的有硫酸铵、氯化铵等。n当药物水溶性强时，一般使用甲醇和乙腈。当药物水溶性强时，一般使用甲醇和乙腈。n当对药物定量回收要求高时，一般使用三氯醋酸当对药物定量回收要求高时，一般使用三氯醋酸。n通常通常1体积的血浆加入体积的血浆加入1.5体积以上的乙腈或加入体积以上的乙腈或加入2体积以上的甲醇可体积以上的甲醇可以除去以除去98%以上的蛋白质。以上的蛋白质。沉淀蛋白法优点n 操作简便易行操作简便易行 沉淀蛋白法缺点 n此法仅除去了蛋白质，内源性杂质并没有除去。此法仅除去了蛋白质，内源性杂

5、质并没有除去。n运用此法处理后的样品浓度会被稀释，不利于检测。运用此法处理后的样品浓度会被稀释，不利于检测。n此法所得样品不能用光谱法检测。此法所得样品不能用光谱法检测。 。Company Logo生物样品前处理生物样品前处理- -液液萃取法液液萃取法液液萃取法简介 多数药物是亲脂性的，在适当的有机溶剂中的溶解度大于在水相中的溶解度，而生物样品中的大多数内源性杂质是强极性的水溶性物质。因而用有机溶剂萃取一次即可除去大部分杂质。溶剂的选择原则n了解药物与溶剂的化学结构与性质，按相似相溶原则选用。了解药物与溶剂的化学结构与性质，按相似相溶原则选用。n对药物的未电离分子可溶，而对电离形式的分子不溶。

6、对药物的未电离分子可溶，而对电离形式的分子不溶。n沸点低、易挥发、浓集，与水不相混溶，无毒，不易燃烧。沸点低、易挥发、浓集，与水不相混溶，无毒，不易燃烧。n不易形成乳化，具有较高的化学稳定性和惰性。不易形成乳化，具有较高的化学稳定性和惰性。Company Logo生物样品前处理生物样品前处理- -液液萃取法液液萃取法液-液萃取法优点n应用范围广应用范围广n提取效率较高提取效率较高液-液萃取法缺点n操作费时操作费时n有机溶剂用量大有机溶剂用量大n易发生乳化现象易发生乳化现象液-液萃取新技术n液相微萃取（液相微萃取（LPMELPME）是在）是在LLELLE基础上发展起来的，与基础上发展起来的，与L

7、LELLE相比，相比，LPMELPME可以达到相同的灵敏度，同时所需的溶剂更少，比较适合于生物样可以达到相同的灵敏度，同时所需的溶剂更少，比较适合于生物样品中痕量、超痕量物质的测定。品中痕量、超痕量物质的测定。nLPMELPME一般包括分散液相微萃取、单滴液相微萃取以及中空纤维液相一般包括分散液相微萃取、单滴液相微萃取以及中空纤维液相微萃取等。微萃取等。Company Logo生物样品前处理生物样品前处理- -固相萃取法固相萃取法固相萃取法简介n固相萃取技术（固相萃取技术（SPESPE）是从上世纪八十年代中期发展起）是从上世纪八十年代中期发展起来的，广泛运用于医学、制药、环境、食品等领域。来的

8、，广泛运用于医学、制药、环境、食品等领域。n固相萃取法（固相萃取法（SPESPE）就是用固体物质作为萃取剂，采用）就是用固体物质作为萃取剂，采用高效、高选择性的固定相，进行萃取的样品预处理技术。高效、高选择性的固定相，进行萃取的样品预处理技术。固相萃取法原理n以吸附剂为固定相，当液体样品通过固定相时，保留其以吸附剂为固定相，当液体样品通过固定相时，保留其中某些组分，再用适当溶剂冲出杂质。中某些组分，再用适当溶剂冲出杂质。n然后用少量溶剂洗脱，从而达到分离、净化与浓缩的目然后用少量溶剂洗脱，从而达到分离、净化与浓缩的目的。的。Company Logo生物样品前处理生物样品前处理- -固相萃取法固

9、相萃取法固相萃取法适用范围n大多数液体生物样品的前处理（如血浆、尿等）。大多数液体生物样品的前处理（如血浆、尿等）。n固体、半固体样品经过处理后也可使用固体、半固体样品经过处理后也可使用SPESPE进行分离。进行分离。固相萃取法操作步骤n活化：根据所选择固定相的类型使用相应的活化溶剂活化：根据所选择固定相的类型使用相应的活化溶剂n上样：上样溶剂强度不宜过高上样：上样溶剂强度不宜过高n淋洗：中等强度溶剂冲去干扰杂质，同时使分析物保留n洗脱：选用离子强度较弱但能洗下待测物的洗脱溶剂Company Logo生物样品前处理生物样品前处理- -固相萃取法固相萃取法Company Logo生物样品前处理生

10、物样品前处理- -固相萃取法固相萃取法固相萃取法优点n分析速度快，回收率高，自动化程度高。分析速度快，回收率高，自动化程度高。n溶剂用量少，不易产生乳化。溶剂用量少，不易产生乳化。固相萃取法缺点n截面积小，流量低。截面积小，流量低。n易堵塞，尤其是对生物样品。易堵塞，尤其是对生物样品。n易产生缝隙，降低提取效率。易产生缝隙，降低提取效率。n重复性较差。Company Logo生物样品前处理生物样品前处理- -固相萃取法固相萃取法固相萃取发展趋势n改善填料性能，开发适用范围广的通用性填料。改善填料性能，开发适用范围广的通用性填料。n与更多仪器实现在线联用。与更多仪器实现在线联用。n使使SPESPE小柱更加耐压且易于更换。小柱更加耐压且易于更换。固相萃取新技术n固相微萃取技术固相微萃取技术n基质分散固相萃取技术基质分散固相萃取技术n分子印迹固相萃取技术分子印迹固相萃取技术n磁力搅拌棒吸附萃取技术磁力搅拌棒吸附萃取技术Company Logo主要参考文献主要参考文献李章万,徐秀荣.色谱分析中生物样品的前处理方法J.药物分析杂志,1996,16(1):55-59.刘松青,刘芳.药物色谱分析中生物样品的前处理方法J.中国医药用药评价与分析,201