常用生物化学检验技术学习教案

1、会计学1常用生物化学检验常用生物化学检验(jinyn)技术技术第一页，共62页。2概念：利用物质具有吸收、发射或散射光谱谱系的特点，对物质进行概念：利用物质具有吸收、发射或散射光谱谱系的特点，对物质进行(jnxng)定性或定量的分析方法定性或定量的分析方法第1页/共61页第二页，共62页。3u发射光谱发射光谱u 火焰光度法、原子发射光谱法、荧光光谱法火焰光度法、原子发射光谱法、荧光光谱法u吸收吸收(xshu)光谱光谱u 紫外、可见光、红外光及原子吸收紫外、可见光、红外光及原子吸收(xshu)分光光度法分光光度法u散光光谱散光光谱u 比浊法比浊法光谱分析光谱分析(un p fn x)技术技术第2

2、页/共61页第三页，共62页。4第3页/共61页第四页，共62页。5第4页/共61页第五页，共62页。6第5页/共61页第六页，共62页。第6页/共61页第七页，共62页。8分光光度分光光度(gungd)技术的基本原理技术的基本原理透光度透光度(gungd)与吸光度与吸光度(gungd)T=I/IOT%=T100%A=-lgT=-lg I/IO =lgIO/I第7页/共61页第八页，共62页。9Lambert-Beer定律定律(dngl)A=KLC适用用于可见光、紫外光、红外光和适用用于可见光、紫外光、红外光和均匀均匀(jnyn)非散射的液体非散射的液体（摩尔吸光系数）：（摩尔吸光系数）：当液

3、层厚度当液层厚度(hud)(hud)为为1cm1cm，物质浓度为，物质浓度为1mol/L1mol/L时时波长下的吸光度值波长下的吸光度值第8页/共61页第九页，共62页。10第9页/共61页第十页，共62页。11第10页/共61页第十一页，共62页。12第11页/共61页第十二页，共62页。13第12页/共61页第十三页，共62页。14第13页/共61页第十四页，共62页。15第14页/共61页第十五页，共62页。16第15页/共61页第十六页，共62页。17第16页/共61页第十七页，共62页。18第17页/共61页第十八页，共62页。19第18页/共61页第十九页，共62页。20第19页/

4、共61页第二十页，共62页。21第20页/共61页第二十一页，共62页。22 溶液中带电粒子在直流电场中向电性相反电极溶液中带电粒子在直流电场中向电性相反电极(dinj)(dinj)移动的现象称为电泳。移动的现象称为电泳。 电电 泳泳第21页/共61页第二十二页，共62页。23 利用带电粒子在电场作用利用带电粒子在电场作用(zuyng)下定向移动的特性，对下定向移动的特性，对混合物组分进行分离、纯化和测定混合物组分进行分离、纯化和测定的技术称为电泳技术。的技术称为电泳技术。电泳技术电泳技术第22页/共61页第二十三页，共62页。24 COO- H C NH3+ R COO- H C NH2 R

5、 COOH H C NH3+ RH+H+OH-OH-pH = pIpHpI原理原理(yunl)第23页/共61页第二十四页，共62页。人血清蛋白的等电点和电泳迁移率人血清蛋白的等电点和电泳迁移率 蛋白质蛋白质 等电点等电点 电泳迁移率电泳迁移率cm2.s-1.v-1 白蛋白白蛋白 4.84 5.910-5 球蛋白球蛋白 5.06 5.110-5 球蛋白球蛋白 5.06 4.110-5 球蛋白球蛋白 5.12 2.810-5 球蛋白球蛋白 6.857.30 1.010-5 第24页/共61页第二十五页，共62页。26第25页/共61页第二十六页，共62页。27vcmsvcmsv第26页/共61页

6、第二十七页，共62页。28根据根据(gnj)Stoke(gnj)Stoke定律定律第27页/共61页第二十八页，共62页。291 1、根据被分离的样品多少分为、根据被分离的样品多少分为(fn wi)(fn wi) 分析电泳分析电泳 制备电泳制备电泳2 2、根据电泳时电压的高低分为、根据电泳时电压的高低分为(fn wi)(fn wi) 高压电泳高压电泳 （50 V/cm50 V/cm以上）以上） 常压电泳常压电泳 （50 V/cm50 V/cm以下）以下） 电泳电泳(din yn)的分类的分类第28页/共61页第二十九页，共62页。303 3、根据电泳媒介的不同分为、根据电泳媒介的不同分为 自由

7、电泳自由电泳 （溶液）（溶液） 区带电泳区带电泳 （支持介质（支持介质(jizh)(jizh)） 4 4、根据电泳系统是否均一分为、根据电泳系统是否均一分为 连续电泳连续电泳 不连续电泳不连续电泳第29页/共61页第三十页，共62页。31第30页/共61页第三十一页，共62页。32组成成分组成成分pH pH pHpH与与pIpI比较，比较，4.5-9.0,4.5-9.0,正极正极pH pH 负极负极(fj)(fj)离子强度离子强度离子强度越大，缓冲容量越大，离子强度越大，缓冲容量越大，pHmol/LpHmol/L3 3、缓冲液、缓冲液第31页/共61页第三十二页，共62页。335 5、蒸发、蒸

8、发(zhngf)(zhngf)作用作用6 6、样品、样品4 4、支持物、支持物吸附吸附(xf)(xf)作用作用电渗作用电渗作用第32页/共61页第三十三页，共62页。34 电电 泳泳 仪仪 由直流电源和电泳槽两部分组成由直流电源和电泳槽两部分组成。一、直流电源一、直流电源 一般一般(ybn)(ybn)由交流电经过整流由交流电经过整流获得获得 恒压电源恒压电源 恒流电源恒流电源 恒功电源恒功电源第33页/共61页第三十四页，共62页。35二、电泳槽二、电泳槽 盖盖 电极电极(dinj)(dinj)及电极及电极(dinj)(dinj)室室 支架支架第34页/共61页第三十五页，共62页。36第35

9、页/共61页第三十六页，共62页。37第36页/共61页第三十七页，共62页。38第37页/共61页第三十八页，共62页。39第38页/共61页第三十九页，共62页。40第39页/共61页第四十页，共62页。41第40页/共61页第四十一页，共62页。42n溴化乙啶溴化乙啶（核酸）（核酸）第41页/共61页第四十二页，共62页。43第42页/共61页第四十三页，共62页。44第43页/共61页第四十四页，共62页。45第44页/共61页第四十五页，共62页。46第45页/共61页第四十六页，共62页。第46页/共61页第四十七页，共62页。48第47页/共61页第四十八页，共62页。49第48

10、页/共61页第四十九页，共62页。50 不同的蛋白质具有不同的蛋白质具有(jyu)(jyu)不同的等电点，利用具有不同的等电点，利用具有(jyu)(jyu)线性线性pHpH梯度的电泳介质来分离等电点不同的蛋白质，这种电泳技术称为等电聚焦电泳。梯度的电泳介质来分离等电点不同的蛋白质，这种电泳技术称为等电聚焦电泳。第49页/共61页第五十页，共62页。51进行等电聚焦电泳进行等电聚焦电泳(din yn(din yn) )的条件的条件1.1.有一个有一个(y (y )在电泳条件下基本稳定的、在电泳条件下基本稳定的、 重复性良好的重复性良好的pHpH 分离的区带。分离的区带。第50页/共61页第五十一

11、页，共62页。52 双向电泳是先把样品从一个方向进行电泳分离，接着双向电泳是先把样品从一个方向进行电泳分离，接着(ji zhe)(ji zhe)再与其成再与其成9090方向进行第二次电泳分离。方向进行第二次电泳分离。 第一次电泳以其电荷性质为基础；第二次电泳则按分子量不同进行分离。第一次电泳以其电荷性质为基础；第二次电泳则按分子量不同进行分离。第51页/共61页第五十二页，共62页。53 转移转移(zhuny)(zhuny)电泳是将凝胶电泳的高分辩率与放射标记或酶标记等免疫化学方法的高灵敏度结合起来的电泳技术。电泳是将凝胶电泳的高分辩率与放射标记或酶标记等免疫化学方法的高灵敏度结合起来的电泳技

12、术。第52页/共61页第五十三页，共62页。54第53页/共61页第五十四页，共62页。55第54页/共61页第五十五页，共62页。56第55页/共61页第五十六页，共62页。57 核酸核酸(h sun)(h sun)转移到硝酸纤维膜或重氮苄氨转移到硝酸纤维膜或重氮苄氨 基甲基纸上。基甲基纸上。 3. 3.鉴定纸上的蛋白质或核酸鉴定纸上的蛋白质或核酸(h sun)(h sun) 其方法其方法(fngf)(fngf)步骤步骤第56页/共61页第五十七页，共62页。58第57页/共61页第五十八页，共62页。59纸层析纸层析(cn x)比移值（比移值（Rf）=溶质谱溶质谱带中心移动带中心移动(ydng)距离距离/流动流动相前沿移动相前沿移动(ydng)的距离的距离第58页/共61页第五十九页，共62页。60凝胶层析凝胶层析(cn x)第59页/共61页第六十页，共62页。61第60页/共61页第六十一页，共62页。NoImage内容(nirng)总结会计学。第1页/共61页。第5页/共61