副溶血弧菌耐药现状及耐药机制

1、副溶血弧菌耐药现状及耐药机制 2.2.1.3生物膜系统 生物膜是细菌附着在固体表面生长，并形成由菌体及其分泌的基质包裹在一起的膜状复合物。生物膜形成后，细菌对环境的适应性、耐药性及反抗宿主免疫细胞的吞噬作用明显增加。细菌生物膜耐药机制并未完全阐明。大部分观点认为：一方面，细菌形成的生物膜可以构成一个外部屏障，限制或减缓抗生素的渗入;另一方面，细菌在生物膜状态下，类整合酶基因表达上调,突变率提高，这种相互接触更为紧密的环境导致菌体间质粒的接合、转导等频率也随之增高，这为菌体间耐药基因的扩散供应了有利条件。 致病性副溶血弧菌能形成生物膜，从而与载体进行特异性的结合。生物膜的形成与菌浓度、温度、Na

2、Cl浓度、pH值等因素亲密相关，Ca2+能促进副溶血弧菌形成生物膜。有研究发觉，耐药较高的弧菌形成生物膜的能力也相对较强,但关于副溶血弧菌生物膜与耐药性之间的关系还有待进一步研究。 2.2.2靶位基因突变 细菌与抗生素结合的靶位基因突变，导致抗生素不能产生作用，这是细菌产生耐药性的重要原因。目前对该机制研究最多的是喹诺酮类药物的靶位基因突变。细菌对喹诺酮类药物的耐药主要是由于编码DNA旋转酶或拓扑异构酶的基因突变所致.DNA旋转酶由GyrA和GyrB亚基组成，分别由gyrA和gyrB基因编码，拓扑异构酶由ParC和ParE亚基组成，分别由parC和parE基因编码。细菌对喹诺酮类药物的耐药主要

3、与gyrA和parC基因突变有关.大部分喹诺酮类耐药突变发生于gyrA基因序列上67-106位氨基酸残基之间，称为喹诺酮耐药打算区（QuinoloneResistance-DeterminingRegion,QRDR）. 研究表明，大部分对环丙沙星等喹诺酮类药物耐药的副溶血弧菌，其gyrA基因83位氨基酸由丝氨酸突变为异亮氨酸；对于耐药水平高的菌株，其parC基因也会发生点突变，第85位氨基酸由丝氨酸突变为苯丙氨酸. 2.2.3耐药酶 细菌可以通过产生钝化酶或灭活酶来破坏或灭活抗生素的活性。细菌产生的耐药酶主要有-内酰胺酶、氨基糖苷类钝化酶、氯霉素乙酰转移酶和大环内酯类-林克霉素类-链阳菌素类

4、钝化酶。 现有研究发觉，副溶血弧菌对？内酰胺类（氨苄西林、头孢菌素）、氨基糖苷类（卡那霉素）及氯霉素类（氯霉素）抗生素的耐药主要通过-内酰胺酶、氨基糖苷磷酸转移酶及氯霉素乙酰转移酶等耐药酶类介导.目前对副溶血弧菌该机制研究最多的是其产生的-内酰胺酶。-内酰胺酶能够特异性地打开分子结构中的-内酰胺环，使-内酰胺类抗生素失去抗菌活性。研究表明，在副溶血弧菌中存在组氨酸激酶/应答调整蛋白-VbrK/VbrR,可以掌握-内酰胺酶的表达，介导副溶血弧菌对-内酰胺类抗生素的耐药.RuichaoLi等发觉携带有编码-内酰胺酶基因（blaTEM-1、blaPER-1、blaCMY-2、blaVEB-2等）的可

5、结合质粒介导了副溶血弧菌对广谱头孢菌素的耐药。 3副溶血弧菌耐药性检测 3.1耐药表型检测 细菌耐药表型检测的常规方法为药敏试验，药敏试验的方法主要包括纸片扩散法、肉汤稀释法、浓度梯度法和自动化检测系统.药敏结果的判定是依据美国临床试验室标准化协会（ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,CLSI）弧菌属的标准M45.纸片扩散法不需要特别的仪器，具有抗生素选择敏捷、成本较低等优点，是副溶血弧菌药敏试验中最常采用的一种方法，由于副溶血弧菌是嗜盐菌，因此进行药敏试验的比浊液中应添加适量的NaCl,一般为0.85%.肉汤稀释法能够获得最小抑菌浓度（Minima

6、lInhibitionConcentration,MIC），商品化的药敏板具有操作便利、可重复性强的优点。浓度梯度法是通过抗生素在琼脂板上扩散成浓度梯度来定量测量抗生素敏感性，商品化的方法为E-test法，操作便利，可作为副溶血弧菌耐药模糊结果的确认。临床常用于检测副溶血弧菌的自动化仪器系统主要为Vitek系统和BDPhoenix系统，可以全自动地对耐药结果进行定性和定量的分析，具有简便、快速的优点。 3.2耐药基因检测 在药敏试验的基础上，假如能知道细菌是否携带有耐药基因，能更好地预估药物治疗的效果，解释耐药机制。常用的细菌耐药基因检测的方法包括PCR法、DNA探针法、基因芯片技术、飞行时间

7、质谱技术（MALDI-TOFMS）、全基因组测序等.这些检测方法具有快速、简便、灵敏度和特异度高等特点，同时可以结合基因克隆和测序来分析耐药基因的结构及突变状况。 目前，在副溶血弧菌中已经检测到多种耐药基因，主要包括：-内酰胺类耐药基因blaTEM、blaCMY、blaPER;氯霉素类耐药基因catA、catB;氨基糖苷类耐药基因aphA;四环素类耐药基因tetA、tetB、tetC、tetD、tetG、tetM、tetS等.抗生素耐药基因数据库（AntibioticResistanceGenesDatabase,ARDB）公布的副溶血弧菌耐药基因主要有两类：一类是编码MATE家族的多药物外排

8、泵基因，介导环丙沙星、卡那霉素、诺氟沙星、链霉素等药物的耐药；另一类是编码黄嘌呤磷酸核糖转移酶的基因，介导四环素的耐药，其机制尚不清晰。 细菌耐药基因与耐药表型之间存在一定的相关性，大多数状况下，细菌携带某种耐药基因可以表现出相应的耐药表型。但有些状况下副溶血弧菌中虽检出了某种耐药基因，但是却对相应的抗生素敏感;而有些状况下发觉副溶血弧菌对某些抗生素耐药却未能检测到相应的耐药基因.造成这种不全都的原因比较复杂，值得进一步深入研究。 4小结 传统的副溶血弧菌对大部分抗生素是敏感的，但近些年研究发觉，很多国家和地区分别的副溶血弧菌都观看到多耐药现象。质粒等可移动遗传元件介导的耐药基因的传播及扩散，加速了副溶血弧菌多耐药菌株的出现，从而增加了抗生素治疗失败的可能性。因此，应