脐血淋巴细胞亚群水平及其临床意义

1、脐血淋巴细胞亚群水平及其临床意义作者：王军，何艳芳，陈群娥，张绍美，赵光，高莉莉【摘耍】目的检测新生儿脐血淋巴细胞亚群水平，探讨新生儿 脐血的免疫功能。方法24例止常足月口然分娩新生儿脐血作为研究 对象，26例健康成年献血员(男女不分)的血液作为对照，采用流式 细胞术(fcm)检测脐血和成人血液中cd3 ( + )、cd4 ( + )、cd8 ( + )、 cd19 ( + )、cd16+56 ( + )、cd4 ( + ) /cd8 ( + )的水平，对结果进行统 计学分析。结果脐血中cd3 ( + )、cd4 ( + )、cd8 ( + )的量明显低于 对照组(p<0. 01或v0.

2、 05)； cd4 ( + ) /cd8 ( + )的水平明显高于对 照组(pv0.01)； cd19 ( + )、cd16+56 ( + )的水平与对照组相比差异 无显著性(p>0. 05)o结论 脐血的淋巴细胞免疫功能低于健康成人。【关键词】脐血；免疫功能；淋巴细胞亚群；流式细胞术abstract: objective to study the levels of lymphocyte subsets in cord blood and learn the immune function of cord blood. methods flow cytometry was used t

3、o show the levels of lymphocyte subsets (cd3 (+) , cd4 (+) , cd8 (+) , cd19 (+) and cd16+56 (+ ) ) and to calculate the ratio of cd4 ( + ) /cd8 ( + ) in the cord blood from normal full-term neonates (cord blood group) and in the peripheral blood taken from healthy adult blood donors (control group)

4、the results were analyzed statistically.results the levels of cd3 ( + ) , cd4 ( + ) and cd8 ( + ) were significantly lower than that in control group (p<0.01 or < 0. 05). the value of cd4 ( + ) / cd8 ( + ) was significantly higher in the cord blood than that in the control (p < 0.01) no sig

5、nificant differences in the levels of cd19 ( + ) and cd16+56 (+ ) were found be twee n the cord blood and the con trol (p&gt;0.05) . conclusion the lymphocyte immune function of neonates' cord blood is lower than that of the peripheral blood from healthy adultskey words : cord blood ； immune

6、 function; lymphocyte subsets; flow cytometry脐血中具有高质量的未成熟造血干/祖细胞，比骨髓和外周血更 有利丁造血功能的重建，脐血在基础研究和临床应用中不受道德伦理 的限制，脐血细胞的收集不会对新生儿造成伤害，脐血造血干/祖细胞 可以低温保存，解冻后并不丢失增生能力。脐血屮含有丰富的免疫活 性物质和功能不成熟的免疫细胞，这些活性物质和免疫细胞在脐血造 血干/祖细胞的成功移植及肿瘤免疫中发挥重要作用。本研究利用流式 细胞术(fcm)检测脐血中 cd3 ( + )、cd4 ( + )、cd8 (+)、cd19 ( + )、 cd16+56 ( + )、c

7、d4 ( + ) /cd8 ( + )的水平,探讨脐血淋巴细胞免疫功 能特点，为脐血在临床的应用提供实验依据。1资料和方法1. 1研究对象24例脐血是我院2004年9月一2006年4月采集 的，均为足月自然分娩健康新生儿脐血，胎龄3742周，平均(38. 4 ±2. 5)周；出生体重为 25004000 g,平均(3293±386) g, apgar 评分均为810分。26例对照组血清来自社会健康成年献血员，无男 女区分。1.2方法 取脐血和对照组血液各4 ml,当日测定。采用fcm测 定脐血中 cd3 ( + )、cd4 ( + )、cd8 ( + )、cd19 ( +

8、)、cd 16+56 ( + )、cd4( + )/cd8( + ),实验所需的单克隆抗体(单抗)fitc-cd3(+)、fitc-cd4 (+)、 fitc-cd8 (+)、 fitc-cd19 (+)、 fitc-cd16+56 (+)、 fitc-cd4 (+ ) /cd8 ( + )购自美国becton-dickinson公司,流式细胞仪为美国 becton-dickinson 公司产品。1.3统计学处理 数据以土s,采用spss13. 0软件包处理结果。 所有数据进行t检验，p<0. 05为差异有显著性。2结果脐血清cd19 ( + )、cd16+56 ( + )水平与对照组比

9、较差异无显著 性(p>0. 05)；脐血中cd3 ( + )、cd4 ( + )、cd8 ( + )水平显著低于对 照组(p<0. 01或<0. 05), cd4 ( + ) /cd8 (+)水平显著高于对照组 (p<0.01)o见表1。表1脐血和成人血液中淋巴细胞亚群测定结果 比较3讨论t淋巴细胞在宿主抗移植物免疫反应屮发挥重要作用，因此，从 亚群变化来观察t淋巴细胞显得尤为必要。外周成熟的t细胞无论在 表型还是在功能上都是异质性群体，根据其表面标志细胞黏附分子 (cd)的不同，淋巴细胞可分为cd4 ( + )和cd8 ( + )细胞两大亚群。cd3 ( + )为全细

10、胞标准，代表着t淋巴细胞总数，一般为cd4 ( + )和 cd8 ( + )细胞之和，cd4 ( + ) / cd8 ( + )比值恒定维持细胞免疫反应 的平衡。通常用检测t淋巴细胞亚群的方法来间接反映细胞免疫功能 的状况。cd4 ( + )能识别抗原，分泌多种淋巴因子，能辅助b细胞、t 细胞活化，从多方面调节和增强免疫力。cd8 ( + )细胞常在免疫应答 后期增多，能识别可溶性抗原，分泌抑制因子，减弱或抑制免疫应答。 cd3 ( + )、cd4 ( + )、cd8 ( + )、cd4 ( + ) /cd8 ( + )表达水平高低代表 细胞免疫建立与否或免疫表达强弱，cd4 ( + ) /c

11、d8 ( + )比例关系是 机体免疫功能网络调控的重要枢纽，调控免疫进行的方向。本实验屮 脐血清cd3 ( + )、cd4 ( + )、cd8 ( + )水平显著低于对照组(pv0.01 或v0.05 ), cd4 ( + ) /cd8 ( + )水平显著高于对照组(pv0.01),表 明脐血中t淋巴细胞免疫功能比健康成人低，因所采用的脐血均为止 常足月健康新生儿脐血。分析其原因可能是脐血中的免疫细胞发育不 成熟，抗原表达和功能活性低下所致。贾廷珍等1等研究认为新生 儿脐血t淋巴细胞发育不成熟，多为幼稚细胞或处于“抑制”状态。 通常胎儿循环血中的t淋巴细胞数量在妊娠中期逐渐增加，其cd4( +

12、 ) /cd8 ( + )比例在出生时相对高于成人2o本研究结果显示，与健康 成人相比，新生儿脐血t淋巴细胞亚群cd4 ( + ) /cd8 ( + )明显升高, 此结果与既往部分研究结果一致，而与刘敬等3研究屮发现的cd4(+ ) /cd8 ( + )倒置，新生儿脐血t淋巴细胞亚群分布与正常人无显 著性差异结果不同。究其原因，主要是由于众多因素(包括种族、母体、 胎龄等)可影响新生儿t淋巴细胞亚群分布有关4o其中有可能影响 实验结果的因素包括：实验设计的差异(包括检测方法、样木量大 小)；影响t细胞亚群的因素较多，如药物、心理活动变化等，t细 胞亚群的变化有昼夜节律，抽取血样的时间对结果会有

13、影响。今后当 进一步扩大样本数量进行研究。cd19 ( + )分布于除浆细胞外的b 细胞谱系发育的各个阶段，是b细胞的重要标记，其功能类似于t细 胞表面的cd4 ( + )、cd8 ( + ),在b细胞活化及信号传导中起协同受体 的作用，它调节b细胞的活化和增殖，为cr2复合体包括cd21 ( + )、 cd19 ( + )、cd81 ( + )的成员，参与b细胞的信号传导。b细胞一方 面可作为apc加工处理变应原而活化th细胞，另一方面可接受其他 apc提呈的抗原的刺激而活化。活化的b细胞特异性表面分子mhc、b7(cd80 ( + )和cd86 ( + )等表达上调，mhc与b7分别和t淋

14、巴细胞 表面受体分子tcr/cd3 ( + )及cd28 ( + )相结合，共同构成一对共刺 激分子，产生胞内共刺激信号，使t细胞活化。b细胞的主要功能是 产生抗体、提呈抗原及分泌细胞因子参与免疫调节等。cd10 ( + )分子 主要分布b细胞膜上，是不成熟b细胞的协同刺激分子，恒定表达于 b细胞，属于tnf受体家族。cd40 ( + )的配体cd40 ( + ) -l与b细胞 上的cd40 ( + )结合，诱导b细胞再次免疫应答及形成生发中心。cd23(+ )在静止期的b细胞上不表达，在成熟b细胞上低表达，主要在活 化的b细胞上表达，是激活b细胞亚群的表面标志。b细胞受到抗原 刺激后分裂增殖

15、，分化为浆母细胞，进而成熟为具有抗体生成能力的 浆细胞，合成并分泌免疫球蛋白发挥体液免疫功能作用。本研究结果 cd19 ( + )的表达与健康成人相比无显著性差异，许利民等5研究 认为脐血中b细胞主要以不成熟b细胞亚群(cd19 ( + )、cd10 ( + ) 为主。因此认为脐血中b细胞数量虽然与健康成人相比无显著性差异, 但是b细胞不成熟或未活化，是脐血移植早期体液免疫功能低下的主 要原因。cd 16+56 ( + )是自然杀伤细胞(nk细胞)的标志物，表达的量 可能与nk细胞的数量或功能有关。nk细胞是机体防御体系的第一道 屏障，是机体抗肿瘤、抗感染的重耍免疫因素。nk细胞起源于cd34

16、(+ )造血细胞6,在骨髓微环境内发育成熟,幼稚型nk细胞在il-2、 il-15和c-kit配基等早期造血生长因子的作用下分化成熟，形成具 有免疫活性的成熟型nk细胞。成熟型nk细胞分泌y干扰素(ifn- y )、 肿瘤坏死因了 a (tnf-a )及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因了(gm-csf) 等先天性免疫调节因子，参与机体早期抗感染免疫反应，通过自然细 胞毒性杀伤病毒感染细胞，通过fcrr iii受体与抗体fc部分结合介导 抗体依赖性细胞毒性作用。本研究结果显示，脐血屮cd16+56 ( + )的 量和健康成人相比差异无显著性。脐血移植后抗感染、抗肿瘤作用弱, 可能是因为脐血中的nk细胞

17、以幼稚型为主，nk细胞耒分化成熟从而 不能发挥正常的免疫功能。综上所述，我们认为脐血淋巴细胞免疫功能较健康成人低，部分 原因是淋巴细胞发育尚不完全成熟或没有受到抗原刺激而活化，至于 其他的因素尚需要进一步探讨。【参考文献】1 贾廷珍，刘长安，杨光脐血基础与临床研究j 中华放射医学与防护杂志，2006, 26 (1)： 10-14.2 lapolla a, dalfra mg, sanzari m, et a 1. lymphocyte subsets and cytokines in women with gestational diabetes mel 1 itus and their ne

18、wborn j cytokine, 2005, 31 (4) :280-287.3 刘 敬，赵莉，李华，等脐血免疫功能初步研究j 中华儿童保健杂志，1997, 5 (1)： 6-74 cairo ms , wagner el , fraser j , et al. characterization of banked umbilical cord blood hematopoietic progenitor cells and lymphocyte subsets and correlation with ethnicity, birth weight, sex, and type of delivery: a cord blood transplantation (coblt) study report