细胞因子及其受体检测-下篇临床免疫学及检验

1、下篇临床免疫学及检验第二十五章 细胞因子及其受体检测chapter 25 assays for cytokine and cytokine receptor第一部分 教学内容和要求一、目的要求掌握：细胞因子的匸物学和免疫沖各种检测方法的原理及评价；熟悉：生物宁和免疫学方法检测细胞因 子的技术耍点及方法评价；了解：细胞因子的分子牛物学检测方法、细胞因子受体及可溶性受体的检测技 术。二、教学内容1. 生物学检测法：细胞增殖法，靶细胞杀伤或抑制法，细胞病变抑制法，趋化活性测定法，生物学检测法 的评价。2. 免疫学检测法：双抗体夹心elisa,放射免疫分析，酶联免疫斑点试验，细胞内细胞因子的检测，免

2、疫学检测法的评价。3. 分子生物学检测：细胞i大i子的dna检测，细胞因子mrna表达的测定，分子生物学检测法的评价。4. 细胞因子受体检测技术：膜结合受体的测定，可溶性受体的测定。第二部分测试题一、选择题（一）单项选择题（a型题）1 .能够川细胞増殖法检测的细胞因了是a. csf b. tnf c. ifn2. 生物学检测法最重要的优点是a.高特异性b.高灵敏性3. 免疫化学测定法最重要的优点a.高特异性b.高灵敏性dil6e.il-8c.操作简单d.活性单位测定c.含量测定d.活性单位测定e.实验成木低e.实验成木低4.能够川细胞病变抑制法检测的细胞i人1了a. csfb tnfc.ifn

3、dil6e. il-85.检测il2的依赖细胞株是:a. b9b 7td1c.ctlld. l929e. wish6.检测tnf的靶细胞株a. b9b 7td1c.ctlld l929e. wish7. 检测人干扰素的指示细胞株a. b9 b. 7td1 c. ctll d. l929 e. wish8. mtt比色法的测定波氏为a. 570nm b 450nm c 490nm d 670nmm e 630nm9. 可测定单个细胞分泌细胞因子的方法a. elisa b. ria c.凝集反应d. elispot e.免疫比浊10. 可同时测定两种细胞因子的方法是a. elisa b. ria

4、c.生物学检测法d. elispot e. pcr11. 细胞内细胞因子的检测主要用于测定的细胞是a. tcb. thc. b细胞d. nk细胞e.巨噬细胞（二）多项选择题（x型题）1. 生物学法检测细胞因子的特点具冇a.高特异性b.髙灵敬性 c.操作简单d.活性单位测定e.实验成本低2. 免疫化学法检测细胞因子的特点包括a.高特异性b.髙灵敬性 c.操作简单d.活性单位测定e.含量测定3. 能够用细胞増殖法检测的细胞因子冇a. il-2 b. tnf c. ifn d. il-6 e. il-84. 用于检测细胞増殖程度的方法a.直接计数 b. elispot c. 3h-tdr掺入法d.

5、mtt 比色法 e. bas-elisa5 .能够用于检测细胞毒反应程度的方法有a.结晶紫染色法b. mtt比色法 c. bas-elisad. elispot e. 51 cr 释放法6. 测定细胞因子含量常用的技术有a. elisa b. ria c.凝集反应d. elispot e.免疫比浊7. 在mtt比色法屮，用于溶解反应产物的溶剂有a. dmso b. peg c. sds d. nbt e.酸化异内醇8. 检测膜型细胞因了受体的方法是a.荧光抗体技术b. elisa c.斑点-elisad.流式细胞术e. ria9. 检测细胞因子的主要方法包括a.用elisa检测细胞因了及其受体

6、b.用依赖性细胞株检测相应细胞因子c.用分子杂交技术检测细胞因了 mrna的表达 d.用pcr技术检测细胞因子e. 用生物活性检测法检测细胞因了活性水平10. 检测可溶性细胞因了受体的方法冇：a.荧光抗体技术 b. elisa c.斑点-elisad.流式细胞术e. r1a11. el前细胞内细胞因子的检测方法有a. ria b.免疫荧光染色技术c.流式细胞术 d. elisa e.细胞病变抑制法二、填空题1. 测定细胞因子的方法可分为、和，其中检测细胞因了的生物活性，其结果以表示。2. 免疫学检测法检测细胞因子的，其结果以表示。3. 细胞生物活性测定包括、和等方法。4. 检测il-2的生物活

7、性采用法，检测干扰素的活性采用法，检测肿瘤坏死因了活性采用法。5. 检测细胞增殖程度常采用的试验方法有和。6. 在mtt比色法中，代谢产物为紫色结晶颗粒，该产物经或溶解显色，测定波长为nm, 参考波长为nm。7. 用于测定il-2的细胞株为,用于测定tnf的细胞株为或。8. 用于测定人干扰素的细胞株为,攻击病琏为。9. 测定il-8生物活性的方法是。10. 用免疫化学法测定细胞因子含量常采用的方法有、和。三、名词解释1. 依赖细胞株（dependence cell strain）2. 细胞因子活性单位（cytokine activity unit）四、问答题1. 细胞因子检测的临床意义及其注意

8、的问题。2. 生物学测定法测定细胞因子原理及其优缺点。3. 生物学测定法测定细胞因了的技术类型及其应用。4. 免疫化学法测定细胞因了原理及其优缺点。第三部分参考答案与题解一、选择题（一）单项选择题（a型题）1. d 2. d 3. a 4. c 5. c 6. d 7. e 8. a 9. d 10. d 11. b（二）多项选择题（x型题）1. bde 2. ace 3. ad 4. acd 5. abe 6. abd 7. ae 8. ad9. abcde 10. bce 11. bc二、填空题1. 生物学测定法、免疫化学测定法、分子生物学测定法、生物学测定法、活性单位/毫升（u/ml）。

9、2. 蛋白含暈、皮克/毫升（pg/ml）或纳克/毫升（ng/ml）o3. 细胞増殖法、靶细胞杀伤法、细胞病变抑制法、趋化活性测定法。4. 细胞増殖法、细胞病变抑制法、靶细胞杀伤法。5. 3h-tdr掺入法、mtt比色法。6. 酸化界内醇、二甲基亚佩、570 nm、630 nm。7. ctll、l929、weh1164.138. wish、vs vo9. boyden小室法。10. 双抗体夹心elisa、放射免疫分析、酶联免疫斑点试验（elispot）。三、名词解释1. 依赖细胞株：是指人们为检测某一种细胞因了而筛选的，该细胞株的分裂増殖只依赖于某一种细胞 因子的存在，并在一定浓度范围内与细胞増

10、殖程度呈正相关。若培养基中缺乏这种细胞因子，依赖株则不 能存活。2. 细胞因了活性单位：细胞因了使相应细胞达到最人程度增殖的50%时所需细胞因了的含量称为细 胞因子的一个活性单位。四、问答题1. 细胞因子是机体内十分巫要的免疫分子。在棊础免疫学研究中，检测细胞因子水平用于探讨细胞 因子水平与免疫细胞表熨、分化、增殖以及功能的相互关系及细胞因子与某些生理病理过程的相互关系。 在临床医学的研究中，当发生某些疾病时，体内细胞因子及受体表达可发生界常，这些异常与机体免疫功 能界常或发生病理损伤有关。凶此，检测患者细胞因子及其受体表达水平有助丁对临床某些疾病的诊断、 治疗和预后的判断。另一方面，细胞因子

11、基因工程产品的问世，促进了重组细胞因子的临床应用，这也要 求对患者体内相应细胞因子水平进行判断。总z,检测细胞因子及其受体具冇重要的应用价值。由于细胞因子多以自分泌和旁分泌的方式发挥作用，很少进入到血液循坏。因此对丁资白水平的检测 來说，检测局部体液屮细胞因子较测定血清或血浆屮细胞因子更具有实际意义。另一方面，山于细胞因子 网络的特性，细胞因了之间是相互关联的，故单独检测一种细胞因了及其受体并不能提供更多信息，常需 耍多种细胞因子的联合检测。2. 细胞因了生物学检测法是根据某些细胞因子特定的生物学功能设讣的，因此该方法是测定细胞因 子生物活性水平的方袪。其原理是应用一定的拆示系统（如细胞）与己

12、知活性的细胞因了标准品或待测标 木相互作用，最终以指示系统的变化（如细胞増殖、死亡或分泌蛋白等）來显示细胞因了的功能，将待检 标木与标准品进行比较最终得知待检标木的细胞因子水平。生物学检测方法测定的是细胞因子的生物学活性，能真实反映细胞因子在体内发生作用的情况，并仕 具有较高的灵敏度，不需商品化试剂盒，成木低适介基础研究工作。但是，山于不同细胞因子间的生物学 作用貝有重叠性，导致该方法的特异性不强。应用依赖性较强的细胞株或使用中和性单克隆抗体封闭干扰 物质的作用，可提高实验方法的特异性。此外，生物学方法操作繁琐，需进彳亍细胞培养，实验周期长，影 响因索较多，重复性差。3. 根据指示系统的农现不同，生物学检测的方法可分为细胞增殖法、靶细胞杀伤或抑制法、细胞病 变抑制法、集落形成测定法、趋化作用测定法和诱导产物测定法等。细胞增殖法是域常用的细胞因子生物 学活性测定方法，可用-f il-2. 1l-6等多种白细胞介索的测定。靶细胞杀伤法用于肿瘤坏死因子的测定， 细胞病变抑制法用于干扰素测定，集落形成测定法用于集落刺激因子测定，趋化作用测定法川于趋化因子 测定。4. 免疫学检测法是建立在抗原抗体反应基础上的免疫化学分析技术。细胞因子的化学本质是哥白质 或多肽，因此很容易制备相