毕业论文范文——家族遗传对Th1Th2型细胞因子表达调控的影响

1、本科生毕业论丈g殳计）题目：家族遗传对thl/th2型细胞因子表达调控的影响姓 名指导教师二级学院 基础学院专业生扬技术年级学号年 月 日目录中文摘要英文摘要3前言4材料与方法6结果8讨论11结论22参考文献23致谢25诚信声明26家族遗传对thl/th2型细胞因子表达调控的影响摘要目的：通过观察儿童及其家族的thl/th2细胞因子表达情况，了解家族过敏史与儿童thl/th2细胞偏移的关系。方法：通过一份包含基本信息，本人过皱史，家族过敬史的问卷，选取10个家庭(共 20人)进行抽血检查，分为有家族过敏史组和无家族过皱史组，每组各10人。用流式细 胞术检测全血白介素4 (interleukin

2、-4, il-4)和丫干扰素(interferon- y , ifn- y )的 含量。结果：过皱性疾病患者的全血il-4水平高于正常人，差别有显著意义(t=2.401,p< 0. 05);有家族过皱史组全血il-4水平明显高于无家族过皱史组，差别有显著意义 (t=5. 770, p < 0. 05)有家族过皱史组儿童的全血il-4水平也明显高于无家族过皱史组儿 童，差别有统计学意义(t=13. 774,p<0.01)o全血ifn-丫水平在两组间比较虽有差别但 无统计学意义。有家族过皱史组成人全血ifn-y水平低于儿童且有统计学意义(t=-4. 110, p < 0.

3、05);无家族过敏史组成人全血il-4水平高于儿童且有统计学意义 (t=4. 554, p < 0. 05)o结论：家族过墩史对儿童thl/th2的平衡存在影响，有家族过皱史儿童的全血il-4 明显增高。il-4水平是th2细胞功能水平的直观体现，故有家族过敏史的儿童，th2具有 相对优势。关键词：家族过敬史，thl/th2,过皱性疾病，儿童effects of familial inheritance on regulation of thl/th2 cytokine expressionabstractobjective:this question was answered thro

4、ugh observing thl/th2 cytokine expressions of the children and their family.method:we conducted a questionnaire survey in children, which included general condition, history of allergic disease (yes/no), familial allergic history (yes/no). 10 families, a total of 20 people (children and parents of e

5、ach family) were recruited for blood test. five families had familial allergic history and five did not.then, flow cytometry (fcm) was used to detect the content of il-4 and ifn-y in whole blood. the results were analyzed by spss 17.0. measurement data were expressed by mean±sd.results:the leve

6、l of il-4 were increased significantly of allergic patiens compared with normal(2.401,p< 0.05);have a family history of allergy group il-4 levels were significantly higher than those without family history of allergy(t=5.770,p < 0.05);children with a family history of allergies,whole blood lev

7、el of il-4 was significantly higher than children without a family history of allergies.the difference was statistically significant(t=13.774,p < 0.01).there were no significant differences in whole blood levels of ifn-y between groups whether have a family history of allergy or not,but have a fa

8、mily history of allergy group ifn-y levels were lower than controls.in family history of allergy group,the whole blood of ifn-y levels in adult were significantly lower than children,and the difference was statistically significant(t二-4.110,p < 0.05) ;on the other hand,in no family history of all

9、ergy group, the whole blood level of il-4 in adult was significantly higher than that in children,the difference was statistically significant (t=4.554,p < 0.05).conclusion:familial inheritance may have effects on the balance of thl/th2 cytokine in children. the level of il-4 cytokine, which repr

10、esents th2 cell function in children with familial inheritance, increases significantly. in them, th2 shows relative predominance.key word： allergic familial history; thl/th2; allergic disease; children刖 5过敏性疾病是一种常见疾病，其临床表现有很多种，包括过敏性哮喘、过敏性休克、 过敏性紫瘢、变应性鼻炎、过敏性皮炎等。过敏性疾病是由i型超敏反应（乂名速发型超 敏反应）引起的，由ige类抗体介导

11、，肥大细胞和嗜碱粒细胞释放的活性介质引起生理功 能紊乱或组织损伤。随着全球工业化程度的不断提高，过敏性疾病在过去几十年中发病率显著上升，已经成为影响人类健康的主要疾病乞一，是全球关注的公众卫生问题，世界变 态反应组织公布的30个国家过敏性疾病流行病学调查结果显示：在这些国家的12亿总人 口中，22% (约2. 5亿人)患有tge介导的过敏性疾病，例如，过敏性鼻炎、哮喘、湿疹、 食物过敏、药物过敏等。据who统计，全球约有1.5亿哮喘患者，其中50%以上成人及至 少80%儿童患者均由过敏因素诱发，每年死于哮喘的患者在18万人以上。2009年，陈燕 等对广州初中牛做的流行病学调查结果显示：哮喘、过

12、敏性鼻炎、过敏性皮炎的发病率 分别是6.8%、24.7%、12.7%。在美国，从1991年-2003年，4岁以上的儿童哮喘发病率增 加了 160%,每年用于治疗过敏性鼻炎的费用至少有12亿美元。在近8年间，美国咲院 的门诊和急诊用于治疗儿童特异性皮炎的费用已经接近740万美元宀引。湿疹在世界儿童中 的发病率为10%-20%,成人为1%-3%，尤其是在发达的工业化国家，经济条件较好和居住 在城市的人群中发病率有持续上升的趋势i】。儿童一般在2岁内达到食物过敏发病率的最 高峰，1岁时为6%-8%,成年时下降为1%-2%。过敏性疾病严重影响患者的生活和健康，尤其对于儿童的体质、性情和学习等会造成 很

13、人的不利影响，严重的全身过敏反应其至会威胁生命，同时也给社会造成巨大的经济负 担。过敏性疾病的致病因素很多，例如，饮食、气候、环境变应原接触、产前危险因素的 暴露、遗传易感性等。有研究表明，过敏性疾病是多基因遗传病，一级亲属的遗传因素在 过敏性疾病中起了主要作用。国内外报道显示，父母亲有哮喘或过敏性鼻炎的儿童患哮 喘等过敏性疾病的风险明显高于父母亲无过敏性疾病的儿童。在父母双方均无过敏性疾病 时，其子女患过敏性疾病的儿率为10%-20%；父母任一方患过敏性疾病时，其子女的患病 儿率为30%-50%；父母双方均患过敏性疾病时，子女的患病儿率高达60%-100%tlolo目前， 家族过敏史影响儿童

14、过敏性疾病易感性的机制尚未明确，继续深入研究是十分必要的。根据细胞因子的分泌模式，ce4t细胞可分为thl和th2亚群，它们來自同一个前体 细胞tho, thl和th2是tho发展出的两种极化形式。thl主要分泌il-2、ifn-丫、112、 tnf- a和tnf- p ,称为thl型细胞因子，并介导细胞免疫，例如，激活细胞毒性t细胞(ctl) 和巨噬细胞，介导迟发型超敏反应(dth)； th2主要分泌il-4、il-5、16、il-9、ti-10 和tl-13,称为th2型细胞因子，并介导体液免疫，如激活b细胞核嗜酸性粒细胞当 thl/th2平衡失调时，即某一亚群功能增强，另一亚群功能减弱，

15、liblan称这种现象为“克 隆转换” (cloned diversion)，也有人形象地称之为“thl/th2漂移”。在过敏性疾病中, th2及其细胞因子占优势,即thl/th2异常偏向th2漂移问。而一般认为ifn-丫/il-4的 相互作用是维持thl/th2平衡的关键。1fn-丫和1l-12等thl型细胞因子可以抵抗并抑制 th2型反应导致的过敏性疾病m。il-4是ige合成过程中最重要的调节因子，能促进t 细胞和b细胞增殖并诱导粘附分子表达。il-5可协同il-4刺激b细胞合成ige,诱导嗜 酸性粒细胞活化、增殖、分化、移行，延长其存活期。我们怀疑家族过敬史可能与thl/th2失平衡有

16、关，因此，本研究旨在用流式细胞术探 究家族遗传因素对thl/th2型细胞因子(主要是ifn-y和il-4)表达调控的影响。材料与方法1 对象选择选择问卷调查中10个家庭共20人（包含儿童及父亲或母亲）进行抽血检查。20人屮 有10名成人，男4例，女6例（年龄32土5岁，体重指数22. l±1.8kg/m2）； 10名儿童, 男5例，女5例（年龄4±1岁，体重指数16. l±1.8kg/m2）o分两组观察，家族过敏史阴 性组中有5个家庭共10人，家族过敏史阳性组中也有5个家庭共10人。阴性组成人男2 例，女3例（年龄31±5岁,体重指数21.8±

17、1.9kg/m2）,儿童男2例，女3例（年龄4 ±1岁，体重指数16±1.9kg/m2）o阳性组成人男2例，女3例（年龄32±5岁，体重指 数22.3±1.8kg/m2）,儿童男3例，女2例（年龄4±1岁，体重指数16o l±1.7kg/m2）o 阳性组家长患过敬性疾病，儿童经家长口述及皮试检查，确定没有过敏性疾病。阴性组的 家长和儿童均为正常。阳性组屮5名成人均患有过敏性鼻炎，其屮2人还合并其他过皱性 疾病，一人合并支气管哮喘，一人合并过敏性皮炎。2试剂和检测方法患者分别釆集静脉血5ml,置于含肝素钠抗凝剂的绿头管中，标本需在抽血后

18、2小时 内处理，用流式细胞术检测全血中il4和ifn丫的含量。2.1主要试剂cd3> cd8检测试剂盒及同型对照购自德国becknicin公司。ti-4, tfn- y细胞因子的流式细胞检测试剂盒购自美国ebioscience公司。2.2主要仪器co?培养箱及离心机购自徳国beckman公司；流式细胞仪（beckman coulter epics xl）2.3实验步骤2.3.1检测项目cd3、 cd8、 ifn-r. il-42.3.2四色法检测步驿（1）取200卩1全血于试管中,用rpmi 1640（不含小牛血清-fbs） 1:1等体积稀释。（2）力0 10 u 1 1 u g/ml

19、pma 工作液+8 u 1 50 u g/ml ionomycin 工作液+6. 8 u 1 0. lmg/ml monensin i作液（或 4 u 1 0. 5mg/ml bfa 工作液），混匀（3）37°c, 5%c02培养箱培养4-6ho混匀，取100 n 1已刺激全血（或pbmc液）加入10 ml cd3和10卩1 cd8,室温，避光孵育15分钟。a: ifn-r-fitc（10 m 1）+il-4-pe（10 卩 1）+cd8-pc5（5 卩 1）+cd3-ecd（5 卩 1）b: iggl-fitc（10 ul）+iggl-pe（10 u1） +cd8-pc5（5 u1

20、） +cd3-ecd（5 u1）c: cd69-pe（10 u 1）+cd3-ecd（5 u 1）（4）每管中加入0.5ml新制备的固定/破膜液（固定/破膜液工作液：1份原液+3份专用 释液），混匀，4°c避光孵育45mino（5）加2nd ix破膜液（ix破膜工作液：1份原液（10x） +9份纯水），混匀，1800rpm 离心5min,弃上清。（6）重复d步骤一次（此时需用剩余的些许pbs轻轻震荡来重悬细胞，以免在后面的步 骤中造成重悬细胞困难）(7) 各管屮按下表加入相应的抗体：a: ifn-r-fitc(10 ul)+il-4-pe(10 u1)+cd8-pc5(5 u1)+c

21、d3-ecd(5 u1)b: iggl-fitc(10 ul)+iggl-pe(10 n1) +cd8-pc5(5 u1) +cd3-ecd(5 u1)(8) 4°c避光孵育30min(9) 每管加2ml的ix破膜液洗涤1次，1800rpm离心5min,弃上清。(9) 300-500 p 1的1%多聚甲醛固定液重悬细胞，上机检测。3 统计学分析用spss 17.0软件进行数据分析，计数资料以率表示，各组间的比较采用独立t检验, p < 0.05具有统计学意义。1.spss数据分析结果1.1两组间比较分析有家族过敏史组的全血il-4水平明显高于无家族过敏史组，差别有统计学意义 （

22、匸5.力0, p<0. 05）o有家族过敏史组的全血ifn-丫水平低于无家族过敏史组，但差别无统计学意义（t=0.105, p > 0.05）（见表1、图1）表1有无家族过敏史的ifn-y> il-4分组结果table 1有家族过敏史无家族过敏史ifn-y (%)16.5±6.416.9±9.8il-4 (%)4.1 ±0.92.2±0.4with famitial allergic hrstorylfn with familial allergic history il without familial allergic histor

23、y ifn without familial allergic htstoryll注：n=10, p<0.05, p > 0.05图1两组血中ifny、il4分析结果l2有家族过敏史组的成人与儿童比较有家族过敏史组中，成人全血ifn-7水平明显低于儿童，差别有统计学意义（t=-4.110,p<0. 05）o全血il-4水平在成人与儿童间的差别无统计学意义（t二0.096, p > 0.05）（见ifn-y (%)il-4 (%)11.5±34.0 ±1.421.5±4.54.1 ±0.3表2)o表2有家族过敏史组ifn-y>

24、 il-4结果table2成人儿童注：n=5, p < ().05, p > 0.0513无家族过敏史组的成人与儿童比较无家族过敏史组中，全血ifn-y水平在成人与儿童间的差别无统计学意义（匸0.781, p>0.05）o成人全血il4水平明显比儿童高，差别有统计学意义（匸4.554, p < 0.05）（见表3）表3有家族过敏史组ifny、il4结果table3成人儿童ifn-y (%)19.5 ±12.714.4 ±6.4il-4 (%)2.5 ±0.31.8±0.2注：n=5, p<0.05, p > 0.051

25、4过敏性疾病患者与正常人比较过敏性疾病患者的全血tfn-y水平明显低于正常人，但差别无统计学意义（匸1.351, p >0.05）o过敏性疾病患者的全血il4水平高于正常人,差别有统计学意义（t二2.401, p< 0.05）（见表4）。有家族过敏史组的成人全都是过敏性疾病患者，原始数据见图2。表4过敏性疾病患者与正常人的ifn-y. il-4结果table4过敏性疾病患者正常人ifn-y (%)11.5±3.019.4±12.7il-4 (%)4.0 ±1.42.5±0.3注：n=5, p< 0.05, p > 0.05 ifn

26、-r (%) of adults with familial allergic history ifn-r (%) of adults without familial allergic historyil-4 (%) of adults with familial allergic history il-4 (%) of adults without familial allergic history图2成人血中ifnr和il4原始数据两组间比较15两组儿童间比较有家族过敏史的儿童，全血ifn*水平明显低于无家族过嬪史的儿童，但差别无统计学 意义（匸2.025, p>0,05）o有家族

27、过皱史的儿童全血il4水平明显高于无家族过嬪史的儿 童,差别有统计学意义（ = 13.774, p<0.01）（见表5）。原始数据见图3。表5有家族过皱史儿童的ifn*、il4结果table5有家族过敏史无家族过敏史ifn-y (%)21.5±4.514.4 ±6.4il-4 (%)4.1 ±0.31.8±0.2注：n=5, p<0.05, p > 0.05 ifn-r (%) of children with familial allergic history ifn-r (%) of children without familia

28、l allergic history il-4 (%) ofchildrenwith familial allergic history il-4 (%) ofchildren without familial allergic history图3儿童血中1fn和il4原始数据两组间比较16两组间相关性分析有家族过敏史组与无家族过敏史组的全血il-4和ifn-y水平无显著相关性（=0.676, p>0.05）o讨论过敏性疾病的发病率近年来呈上升趋势是影响儿童健康的常见慢性疾病之一。过 敏性疾病的发病机理至今仍有许多尚待阐明的问题，但“卫生假说”在一定程度上解释了 近年來过敬性疾病发病率上

29、升的原因。该假说认为，在人群基因组未发生变化的情况下， 过去几十年中过敏性疾病发病率显著增加主要是环境因素的影响。随着疫苗、抗生素的应 用和卫牛条件的改善，人群微牛物暴露水平及感染性疾病发病率下降，特异性th2细胞“卫 生假说”泗建立在t细胞在免疫应答中发挥不同作用的理论上，t淋巴细胞的活化依赖于 特定抗原刺激抗原递呈细胞(apc) 2,当特异性抗原刺激后，树突状细胞(des)将信息传 递给未致敬、处于初始状态的th细胞(pth),使其变为tho细胞，并最终分化为thl, th2, th9, thl7和th22,不同t细胞亚群效应器释放各种细胞因子类及辅因子。外周成熟的 t细胞按照表型不同，可

30、分为cd4+t细胞和cd8+t细胞。根据cd4+th细胞所分泌的细胞因 子不同則，可以分为thl和th2两个亚群。th2细胞主要参与调节ige应答及包括寄生虫 感染引起的过敏性炎症反应4, 541 o在过敏性疾病中，th2细胞的分布存在多种因素影响。 thl细胞偏向于分泌il-2、ifn-y和tnf- b ,与迟发型超皱反应t细胞和细胞毒性t细胞 的增值、分化、成熟有关，因此thl细胞可促进细胞介导的免疫应答。有研究认为tfn- y碎片及cxcr3+t细胞容易增加个体变态反应的细胞凋亡閃，thl细胞更易于活化或凋亡。 在细胞介导的应答过程中，thl细胞参与防御细胞内微生物及机体识别抗原后产生的

31、igg 抗体记忆。除此之外，thl细胞在变态性疾病中的效应机制中也起重要作用。th2细胞偏 向于分泌il-4、il-5及il-13,它与b细胞增殖、成熟和促进抗体生成有关，故可增强抗 体介导的免疫应答。il-4还作用于pth细胞，促进其向th2细胞分化，进而分泌更多的 il-4和il-13,被公认是特异性哮喘发病中最重要的细胞因子悶，il-4基因存在一系列多 态性，它们与哮喘的多种表型相关联。染色体上il-4基因附近，如il-13基因可能是5q31 上特应性和哮喘的位点。单核细胞趋化因子t及0x40配体贰能提供t细胞增殖和刺激信 号，诱导th2细胞产生能促使它产生极性刖的细胞因子il-4,因子

32、与b细胞表面的相关受 体结合，促进b细胞增值、生长。胸腺基质淋巴细胞生成素(tslp)是在上皮细胞上的异 常生长因子，能代替il-7促进生长和分化定性b细胞，表达出包括ige受体在内的多种 抗原。il-4是ige合成必不可少的因子画，与嗜酸性粒细胞增多症的发病机制相关。研究 a表明tslp含量在哮喘患者中明显增加。tslp激活dc细胞表达0x40,启动过敏原特异 性cd4+t细胞前提想th2细胞分化，并迁移至炎症发生处，由th2炎症细胞产生的th2类细胞因子通过促进ige,嗜酸性粒细胞和黏液的产生而启动过敏性炎症。因此起源于上皮 细胞的tslp不仅能够活化dc,而且能够通过dc促进cd4+t细

33、胞向炎症th2细胞转化，是 过敏性炎症发牛的一种主要启动因子。因此，th2细胞的优势分化及th2细胞因子的过度 表达会引起过敏性疾病的发生。在妊娠期间，为减少母体与胎儿之间的免疫应答，thl细胞的免疫反应会下调，thl 细胞分泌的细胞因子如il-2及ifn-y受到抑制。与此同时，th2细胞分泌的细胞因子il-4 及tl-13相对增多，th2细胞的免疫反应占优势。岀生后，机体会暴露在各种微生物环境 中，tho细胞会分化为thl细胞，在儿童5岁左右，thl/th2会恢复免疫平衡状态。如果 在婴幼儿期间缺乏与微生物抗原的充分接触，发育中的免疫系统会丧失使tho细胞向thl 分化，从而向th2分化，使

34、th2的发育占优势，容易导致过敏性疾病的发生7* 47* 60o本研究结果显示，过嬪性疾病患者全血il-4水平比正常人高，差别有统计学意义，过 敏性疾病患者的全血ifn-y水平明显低于正常人，但差别无统计学意义，与韩睿的报道相 似昭。证明在过敏性疾病患者中，th2细胞分泌的因子水平明显增高，thl细胞分泌的因 子水平下降。这可能与th2细胞的免疫应答亢进从而抑制thl应答有关，因为tfn-y可以 抑制th2细胞的活性，对th2细胞分泌的因子il-4有拮抗作用，而il4是ige合成的因 子，因此,ifn-y阻断了体内ige的合成。由此可见，在过皱性疾病的发病机制屮thl/th2 失衡起一定作用。

35、过敏反应是一种与遗传因素和环境因素有关的i型超敏反应引起的，由ige类抗体介 导，肥大细胞和嗜碱粒细胞释放的活性介质引起生理功能紊乱或组织损伤。在和同抗原、 相同剂量的刺激下，具有遗传病史的人更容易岀现较强的特异性免疫应答，在体内迅速合 成ige,因而更容易发生i型超敬反应8> 62jo本次结果显示，有家族过敬史的儿童全血ifny 水平明显低于无家族过敏史的儿童，但差异无统计学意义；而il4水平明显比无家族过敏 史的儿童高，差别有统计学意义（呈现th2细胞优势）。全血ifn-y水平在有家族过敏史 组中低于无家族过敏史组，有家族过敏史组的全血il4水平明显比无家族过敏史组高，差 别有统计学

36、显著意义。提示父母的遗传因素对儿童免疫状态有一定的影响。有家族过敏史 的儿童口后更易于患过敬性疾病。有家族过嬪史组屮，成人全血ifn-y水平明显低于儿童, 差别有统计学意义，而全血il4水平在成人与儿童之间比较无统计学意义。无家族过敏史 组中，全血ifn-y水平在成人与儿童之间比较无统计学意义，成人全血il4水平明显比儿 童高，差别有统计学意义。这可能与实验例数相对较少有关；也有可能是因为实验中有过 敏性疾病史组的成人均是过敏性疾病患者，而儿童只是有家族过敏性疾病史，而无过敏性 疾病的表现，免疫表现为th2细胞占有优势；无过敏性疾病史组屮，由于成人及儿童均为 正常人，儿童不会表现th2细胞发育

37、占优势；由于参与实验的儿童年龄是4±1岁，而 thl/th2平衡要到儿童5岁才会恢复，因此在过敏性疾病组中成人thl细胞分泌的细胞因 子ifn-y水平明显低于儿童，无过敏性史组的成人th2细胞分泌的细胞因子il-4水平比儿 童高。在遗传背景下，环境因素也起重要作用，因此过敏性疾病患者在不断受致病过敏原 的刺激下，thl细胞表达的ifn-y水平明显降低。综上所述，家族过敏史对儿童thl/th2平衡存在影响，有家族过敏史的儿童其代表th2 细胞功能水平的细胞因子il4明显增高，th2表现为相对优势，具有过敏性疾病的发牛倾 向。这类儿童需要尽量避免接触过敏原，及早采取防止措施，减低过敏性疾

38、病发生的机率。 目前过敏性疾病的治疗主要包括避免接触致敏的过敏原、药物治疗过敏症状及脱敏治疗 等，脱皱治疗是从细胞及体液免疫的角度，调节患者的免疫平衡，其基本的免疫学原理是 通过刺激tho细胞向thl分化，达到抑制th2细胞的免疫反应，从而控制过敏性疾病的症 状。脱敏治疗在治疗过敏性疾病中起着重要作用。thl/th2平衡与i型超敏反应引起的过 敏性疾病的发生发展密不可分，通过调节thl/th2平衡来调节t淋巴细胞功能是有家族过 敏史儿童的免疫治疗的重要方法。家族过敏史对儿童thl/th2的平衡存在影响，有家族过敏史儿童的全血il-4明显增 高。il-4水平是th2细胞功能水平的直观体现，故有家

39、族过敏史的儿童，th2具有相对优 势。参考文献i warner jo, kaliner ma, crisci cd,et al. allergy practice worldwide:a report by the world allergy organization specialty and training council j. int arch allergy ininiunol, 2006, 139:166-174.陈燕，李靖，钟南山.广东省城市与乡村儿童哮喘及过敏性疾病的流行情况比较c.中 华医学会2010年全国变态反应学术会议暨中欧变态反应高峰论坛论文汇编.2010.3 eich

40、enfield lf, hanifin jm, beck la, et al. atopic dermatitis andasthma parallels in the evolution of treatmentj. pediatrics, 2003, 111:608-616.4 sicherer sh, munoz-furlong a, sampson ha. prevalence of peanut and tree nut allergy in the united states determined by means of a random digit dial telephone

41、survey:a 5-year follow-up study j,j allergy clin inununol, 2003, 112:1203-1207.5 horii ka, simon sd, liu dy,et al. atopic dermatitis in children in the united states, 1997-2004:visit trends, patient and provider characteristics, and prescribing patternsj, pediatrics, 2007, 120:e527e534.6 wuthrich b, cozzio a, roll a, et al. atopic eczema:genetics or environment?j. ann agric environ med, 2007. 14:195-201.7 ker ker, tina v,hartert j,hartert tv.the atopic march:what' s the evidence?j. ann allergy asthma ininiunol, 2009, 103:282-289.8 ha