DNA提取方法学习教案

1、会计学1DNA提取方法提取方法2021-12-5研究方法本实验室方法总结汇报提纲第1页/共23页2021-12-5腐殖酸等去除破 壁预处理第2页/共23页2021-12-5腐殖酸CTABPVPPPBS第3页/共23页2021-12-5表面活性剂强离子剂 玻璃珠法超声波法冻融法低渗裂解、微波裂解颗粒破碎等 溶菌酶蛋白酶蜗牛酶化学试剂法酶解法物理法细胞破碎第4页/共23页2021-12-5SDS 的高盐提取法Edgcomb 改进法Tsai 报道的方法玻璃粉吸附法方法第5页/共23页2021-12-5Your text in here1g土壤，研碎2.7 ml DNA提取液，20l蛋白酶k0.3ml

2、 20% SDS 65水浴2h12000 r/min离心10min，取沉淀0.9ml DNA提取液0.1ml 20% SDS，涡旋 10s， 65水浴10min收集上清，重复两次，合并上清，等体积苯酚:氯仿:异戊醇25:24:11520min颠倒几下6000r/min10min离心乙醇沉淀12000r/min10min，100l无菌水溶解SDS高盐提取法第6页/共23页2021-12-51g土壤，研碎2mlPBS 37摇床225r/min振荡30min12000r/min离心10min溶液I， 溶菌酶， 37水浴2h，2ml溶液II， -20冰浴， 65水浴循环三次6000r/min离心10m

3、in，取上清，等体积苯酚:氯仿:异戊醇25:24:1抽提两次12000r/min离心10min，100l无菌水溶解Tsai报道方法第7页/共23页2021-12-51g土壤，研碎加5mol/LNaCL 270l溶于的5mol/L CTAB270l乙醇沉淀， 12000r/min离心10min， 100l无菌水溶解2mlPBS取上清液等体积苯酚:氯仿:异戊醇25:24:1，抽提两次2ml溶液II， 65水浴10min，将样品轻轻移至-20冰浴，65水浴三次溶液， 溶菌酶，37水浴12000r/min离心10min取沉淀6000r/min离10minEdgcomb改进法第8页/共23页2021-1

4、2-51g Sephadex G-200水化合用含高盐的TE缓冲液洗5次,自然分离用1ml无菌注射器紧贴洗涤器底部将悬浮液抽出注入15ml的无菌螺帽塑料管中，不断离心(130g,10min)使颗粒塞紧管底直到形成的压实柱100l含高盐的TE缓冲液冲洗，离心(130g,10min )转移至新的无菌螺帽塑料管中加入用玻璃粉匀化后的粗提取液100l，用100l含高盐的TE缓冲液洗涤并离心(130g,10min）连续3次，丁醇分离出DNA玻璃粉吸附法第9页/共23页2021-12-5方法比较第10页/共23页2021-12-5方法比较第11页/共23页2021-12-5纯化第12页/共23页2021-12-5其他文献第13页/共23页2021-12-5其它文献第14页/共23页2021-12-5其它文献第15页/共23页2021-12-5其它文献第16页/共23页2021-12-5其它文献第17页/共23页2021-12-5总结总结第18页/共23页2021-12-