enu与疾病动物模型学习教案

1、会计学1enu与疾病动物模型与疾病动物模型第1页/共78页第2页/共78页第3页/共78页第4页/共78页小鼠在人类遗传病研究中的独特作用小鼠在人类遗传病研究中的独特作用第5页/共78页第6页/共78页第7页/共78页第8页/共78页第9页/共78页第10页/共78页指标分类具体指标一般状况精神状态、体重、体形、营养状况神经行为步态、摇头、转圈、震颤、活动状况皮肤、毛发皮色、皮质、毛色、毛质、胡须、斑点、淤斑、纹理眼位置、大小、形态、颜色、角膜、虹膜、有无白内障耳耳廓位置、形态、大小、外耳道是否闭锁尾长短、粗细、形态、颜色骨骼头形、有无下颌、脊柱侧弯、四肢长短粗细、趾数多少，趾长短、并趾口腔牙

2、齿长短、色质、质地、角度；舌的形态、色质；有无腭裂尿、粪尿液颜色、浑浊度；粪便颜色、质地血生化血糖、胆固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、尿素氮血常规白细胞数、红细胞数、血红蛋白、平均红细胞体积、平均红细胞血红蛋白含量其它水肿、脑积水、腹水、脊柱裂诱变小鼠的筛查项目第11页/共78页规律异常的小鼠，1997年克隆了clock基因，这是表明ENU诱变技术独特优势的里程碑。第12页/共78页第13页/共78页第14页/共78页第15页/共78页转基因和基因剔除小鼠模型。第16页/共78页第17页/共78页第18页/共78页第19页/共78页第20页/共78页第21页/共78页ENUENU诱

3、变、突变表型筛选及遗诱变、突变表型筛选及遗传试验技术路线传试验技术路线第22页/共78页突变基因的定位技术路线突变基因的定位技术路线B6B6突变系与突变系与DBA/2DBA/2交配，获得阳性表型的交配，获得阳性表型的F F1 1F1F1回交回交 DBADBA得到得到F2F2代代提取阳性表型的提取阳性表型的F2F2鼠鼠 尾尾DNADNA选择相关基因附近的微卫星优先连锁分析选择相关基因附近的微卫星优先连锁分析计算计算LODLOD值确定连锁值确定连锁第23页/共78页第24页/共78页第25页/共78页第26页/共78页第27页/共78页第28页/共78页第29页/共78页第30页/共78页第31页

4、/共78页 泳道泳道1： 野生型野生型D2品系小鼠对照；品系小鼠对照；泳道泳道 217：F2角膜浑浊小鼠的检测结果，其中第角膜浑浊小鼠的检测结果，其中第9泳道发生重组，其余连锁。泳道发生重组，其余连锁。第32页/共78页角膜浑浊小鼠突变基因的连锁分析角膜浑浊小鼠突变基因的连锁分析第33页/共78页第34页/共78页F2代代 短尾小鼠的微卫星检测短尾小鼠的微卫星检测第35页/共78页短尾突变基因与各微卫星的连锁分析短尾突变基因与各微卫星的连锁分析第36页/共78页第37页/共78页第38页/共78页突变杂合子突变杂合子繁繁殖殖学学指指标标生生长长发发育育血血常常规规血血液液生生化化免免疫疫学学指

5、指标标病病理理组组化化建立新的模型品系建立新的模型品系形形态态行行为为观观察察第39页/共78页角膜浑浊小鼠角膜浑浊小鼠第40页/共78页第41页/共78页第42页/共78页第43页/共78页第44页/共78页第45页/共78页角膜浑浊小鼠的角膜病理学特征（角膜浑浊小鼠的角膜病理学特征（1 1）第46页/共78页角膜浑浊小鼠的角膜病理学特征（角膜浑浊小鼠的角膜病理学特征（2 2）第47页/共78页角膜浑浊小鼠的角膜病理学特征（角膜浑浊小鼠的角膜病理学特征（3 3）第48页/共78页角膜浑浊小鼠的模型价值角膜浑浊小鼠的模型价值 我国盲人数约我国盲人数约670670万人，角膜浑浊是仅次于白内障的主

6、要致盲原万人，角膜浑浊是仅次于白内障的主要致盲原因（约占因（约占15.4% 15.4% ）。人类角膜病有多种类型，它们的致病原因更有许）。人类角膜病有多种类型，它们的致病原因更有许多假说，但由于缺乏合适的动物模型，相关研究一直未能深入。多假说，但由于缺乏合适的动物模型，相关研究一直未能深入。 突变小鼠角膜中有大量钙质和异物沉积，类似于人的斑突变小鼠角膜中有大量钙质和异物沉积，类似于人的斑点状营养不良，而角膜上皮细胞和基质成纤维细胞的形态学点状营养不良，而角膜上皮细胞和基质成纤维细胞的形态学变化又类似于人的先天性角膜化生症。目前尚不能确定其对变化又类似于人的先天性角膜化生症。目前尚不能确定其对应

7、的人类角膜病类型，但遗传因素在其中的决定作用是毫无应的人类角膜病类型，但遗传因素在其中的决定作用是毫无疑问的。疑问的。 对该小鼠的研究可能会对人类角膜病的正确分型及发病对该小鼠的研究可能会对人类角膜病的正确分型及发病机制提供科学理论依据。机制提供科学理论依据。第49页/共78页第50页/共78页短尾小鼠短尾小鼠后代尾巴后代尾巴的不同形态的不同形态第51页/共78页第52页/共78页短尾小鼠的繁殖学指标短尾小鼠的繁殖学指标 第53页/共78页 不同尾形小鼠的统计结果不同尾形小鼠的统计结果 各尾形所占百分比：短尾各尾形所占百分比：短尾 33.8 %，中尾，中尾 9.9 %，正常尾，正常尾 56.3

8、 %。性别性别 (:) 比值：比值：0.75 第54页/共78页 第55页/共78页第56页/共78页第57页/共78页第58页/共78页第59页/共78页第60页/共78页第61页/共78页第62页/共78页短尾小鼠的模型价值短尾小鼠的模型价值第63页/共78页第64页/共78页短尾突变基因序列鉴定与分析技术路线短尾突变基因序列鉴定与分析技术路线第65页/共78页第66页/共78页天 B6-St 小鼠胚胎总 RNA RT-PCR扩增产物，得到了 1494 bp 的特异性产物 突变突变T基因基因RT-PCR产物电泳图产物电泳图第67页/共78页T T基因、突变基因、突变T T基因的基因的cDNAcDNA序列与序列与数据库序列的比对数据库序列的比对 第68页/共78页1 1：正常小鼠胚胎：正常小鼠胚胎T T基因基因PCRPCR电泳结果。电泳结果。2 2：短尾小鼠胚胎：短尾