海南大学分析化学B 第9章吸光光度法

1、下一页下一页返回返回退出退出分析化学第9章 吸光光度法Spectrophoto metry返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出基本内容和重点要求n掌握物质对光的选择性吸收、吸光度和透光度、朗伯比耳定律及摩尔吸光系数等知识；n了解比色分析和分光光度法的特点、基本原理、仪器构造和各部件的作用；n学习显色反应和显色条件的选择；n理解分光光度法定量分析中各种影响因素；n了解紫外吸收光谱法的特点及应用。返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出第9章 吸光光度法9.1 吸光光度法基本原理9.2 目视比色法及光度计的基本部件9.3 显色反应及显色条件的选择9.4 吸光度测量条件的选择9.

2、5 吸光光度法的应用9.6 紫外吸收光谱法简介9.7 分子发光分析法简介返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出9.1 吸光光度法基本原理一、方法依据及分类二、方法特点三、光的基本性质四、物质对光的选择性吸收五、光的吸收基本定律朗伯比耳定律六、偏离比耳定律的原因返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出一、方法依据及分类基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法，包括比色法、可见及紫外光度法及红外光谱法等。n通过目视比较颜色的深浅来测定物质的浓度。n使用光度计测定的方法。返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出二、方法特点n灵敏度高、选择性好n准确度较高n分析快速、仪器

3、简单、操作简便n应用广泛返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出三、光的基本性质1. 光的波动性和微粒性2. 电磁波谱图3. 单色光与复合光4. 互补色光返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出1. 光的波动性和微粒性-110scm 103 - Hz- nm- 光光速速，真真空空中中频频率率，为为单单位位以以波波长长，在在紫紫外外可可见见区区cc sJ106.625-Plank- J- 34- 常常数数，光光子子的的能能量量，hEchhE 返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出2. 电磁波谱图波长/nm10-1 1 10 102 400 760 103 104 105

4、 106 107 108光谱名称X射线紫外光可见光红外光微波跃迁类型内层电子中层、外层电子外层电子分子振动或转动分子转动分析方法X射线光谱法紫外光度法比色及可见光度法红外光谱法微波光谱法UltravioletVisible Spectrophotometry返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出3. 单色光与复合光n单色光：具有同一波长的光n复合光：不同波长组成的光n可见光的波长大约在400760nm之间，由红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等各种色光按一定比例混合而成，各种色光具有一定的波长范围。返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出4. 互补色光n如果把适当颜色的两种色光按一定

5、强度比例混合，可以组成白光，这两种色光称为互补色光。返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出四、物质对光的选择性吸收1. 物质颜色和吸收颜色的关系2. 双原子分子能级示意图3. 吸收光谱图4. 分析依据返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出1. 物质颜色和吸收颜色的关系白光KMnO4紫色返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出表9-1 物质颜色和吸收颜色的关系物质颜色吸收光颜色波长范围/nm黄绿紫400450黄蓝450480橙绿蓝480490红蓝绿490500紫红绿500560紫黄绿560580蓝黄580600绿蓝橙600650蓝绿红650750返回返回上一页上一页下

6、一页下一页返回返回退出退出152. 双原子分子能级示意图AV43210V43210BJ420返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出16返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出3. 吸收光谱图400 450 500 550 600 650 /nmA0.80.60.40.2最大吸收波长最大吸收波长 max返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出4. 分析依据n定性分析：最大吸收波长maxn定量分析：吸光度大小400 450 500 550 600 650 /nmA0.80.40.60.2 1 2返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出五、光的吸收基本定律朗伯比耳定

7、律1. 透光度（率）与吸光度2. 朗伯比耳定律3. 吸光系数、摩尔吸光系数4. 吸光度的加合性返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出1. 透光度（率）T与吸光度AI0IrIaItTIIAIITIIIIIIItttartalglg0000 透光率或透光率或透射比透射比吸光度吸光度nTransmittance and Absorptivity返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 T% 1.0 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0.05 0 AAttTTTIIAIIT 10lg1lglg00

8、透光度 T与吸光度A的关系返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出2. 朗伯比耳定律nLambert-Beers LawKbcA A吸光度吸光度K比例常数，与吸光物比例常数，与吸光物质的性质、入射光波长、质的性质、入射光波长、温度等有关温度等有关b液层厚度，液层厚度，cmc溶液的浓度，溶液的浓度，mol L-1或或g L-1返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出3. 吸光系数、摩尔吸光系数v 吸光系数a：v 摩尔吸光系数（或）：v关系： M aKbcA abcA cg L-1bcma=A/( b c)， Lg-1cm-1bcA c mol L1bcm =A/(b c)，Lmo

9、l-1cm-1返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出例 1n50mL比色管中，加入含有0.025mg的Fe2+溶液，加入邻二氮菲显色剂，用水稀释至50mL，用2cm比色池，在分光光度计上测得吸光度A=0.190，计算摩尔吸光系数？解：4-110.1901.1 10 (L molcm )0.025255.85 50Abc返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出4. 吸光度的加合性n多组分体系中nnnbcbcbcAAAA .221121返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出六、偏离比耳定律的原因1. 标准曲线（校正曲线）2. 非单色光引起的偏离3. 化学因素引起的偏离4

10、. 介质不均匀引起的偏离返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出nStandard curve，calibrated curve，working curve（一）. 标准曲线（校正曲线） A0.500.400.300.200.100 2.0 4.0 6.0 8.0 10m mg/mLKbcA 返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出A0.500.400.300.200.100 2.0 4.0 6.0 8.0 10m mg/mL正偏离正偏离负偏离负偏离返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出（二）偏离原因1. 非单色光引起的偏离n目前各种分光光度计得到的入射光实际上都是具

11、有某一较窄波段的复合光，物质对不同波长光的吸收程度的不同，因而导致对朗伯比耳定律的偏离。n克服非单色光引起的偏离的措施：v使用比较好的单色器；v人射光波长选择在被测物质的最大吸收处；v测定时应选择适当的浓度范围。返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出2. 化学因素引起的偏离n稀溶液能很好服从比耳定律。n溶液中吸光物质常因解离、络合、缔合或互变异构等化学变化而形成新化合物或改变其浓度，因而导致偏离朗伯比耳定律。n在分析测定中，要控制溶液的条件，使被测组分以一种形式存在，以克服化学因素所引起的对朗伯比耳定律的偏离。返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出9.2 目视比色法及光度计

12、的基本部件一、目视比色法二、光度计的基本部件三、方法比较返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出一、目视比色法（ Colorimetry ）n方法依据n用眼睛观察、比较溶液颜色深度以确定物质含量的方法。12481632x返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出n优点n仪器简单（或不需要）、操作简便，适宜于大批试样的分析。灵敏度高，因为是在复合光白光下进行测定，故某些显色反应不符合朗伯比耳定律时，仍可用该法进行测定。n缺点n准确度不高，标准系列不能久存，需要在测定时临时配制。返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出二、光度计的基本部件1. 光源2. 单色器3. 吸收池4.

13、 检测系统返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出1. 光源n在可见光区，常用钨灯或碘钨灯作光源，它们辐射3202500nm波长的光；n在近紫外区，常使用氢灯或氘灯，它们能辐射180375nm波长的光。 具有足够的光强度，并能稳定。光源单色器检测系统吸收池返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出2. 单色器n滤光片由有色玻璃片制成，只允许和它颜色相同的光通过，得到的是近似的单色光。n棱镜用光学玻璃或石英制成，光通过棱镜发生折射而色散。n光栅光通过光栅发生衍射和干涉现象而分光。光源单色器检测系统吸收池返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出3. 吸收池n也称比色皿，用于盛

14、吸收溶液；n由无色透明的光学玻璃或石英制成；n液层厚度为0.5、1、2、3cm等的一套长方形比色皿。光源单色器检测系统吸收池返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出4. 检测系统n硒光电池或光电管或光电二极管阵列作检测器，检流计或毫伏表作读数装置。n另可配置记录仪、数字显示器及计算机等。光源单色器检测系统吸收池返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出 上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出双光束紫外可见分光光度计双光束紫外可见分光光度计上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出9.3 显色反应及显色条件的选择一、显色反应二、显色反应的选择三、显色条件的选择四、显色剂返回返回上一

15、页上一页下一页下一页返回返回退出退出一、显色反应（ Color reaction ）n待测物质本身有较深的颜色，直接测定。n待测物质是无色或很浅的颜色，需要选适当的试剂与被测离子反应生成有色化合物再进行测定，此反应称为显色反应，所用的试剂称为显色剂（color reagent）。n显色反应的类型：主要有氧化还原反应和络合反应（最常用）两大类。返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出二、显色反应的选择n灵敏度高，有色物质的应大于104；n选择性好，干扰少，或干扰容易消除；n有色化合物的组成恒定，化学性质稳定(至少保证在测量过程中溶液的吸光度基本恒定)；n显色剂在测定波长处无明显吸收，即显

16、色剂对光的吸收与络合物的吸收有明显区别，要求两者的吸收峰波长之差（称为对比度）大于60 nm。 返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出三、显色条件的选择1. 显色剂用量2. 酸度3. 显色温度4. 显色时间5. 干扰的消除6. 溶剂返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出1. 显色剂的用量M + R = MR（被测组分） （显色剂） （有色络合物）n为使显色反应进行完全，需加入过量的显色剂。但有些显色反应，显色剂加入太多，反而会引起副反应，对测定不利。n在实际工作中根据实验结果来确定显色剂的用量。返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出cA0cA0cA0123返回返回

17、上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出2. 酸度M+HR=MR + H+n影响显色剂的平衡浓度和颜色n影响被测金属离子的存在状态n影响络合物的组成 n制作pH与吸光度关系曲线确定pH范围。 pHA0返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出3. 显色温度n显色反应大多在室温下进行；有些显色反应需加热至一定温度完成；有些有色物质温度偏高时易分解。n制作温度与吸光度关系曲线确定显色温度范围。返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出4. 显色时间n有些显色反应瞬间完成，溶液颜色很快达到稳定状态，并在较长时间内保持不变；n有些显色反应虽能迅速完成，但有色络合物的颜色很快开始褪色；n有些

18、显色反应进行缓慢，溶液颜色需经一段时间后才稳定；n制作吸光度-时间曲线确定适宜时间。返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出5. 干扰的消除n干扰物质本身有颜色或与显色剂反应，在测量条件下也有吸收，造成正干扰；n干扰物质与被测组分反应或与显色剂反应，使显色反应不完全，也会造成干扰；n干扰物质在测量条件下从溶液中析出，使溶液变混浊，无法准确测定溶液的吸光度。返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出干扰的消除n加入络合掩蔽剂或氧化还原掩蔽剂，使干扰离子形成无色络合物或无色离子；n选择适当的显色条件以避免干扰；n选择适当的光度测量条件；n分离干扰离子。 返回返回上一页上一页下一页下一

19、页返回返回退出退出6. 溶剂n有机溶剂降低有色化合物的解离度，提高显色反应的灵敏度。如在Fe(SCN)3的溶液中加入丙酮颜色加深；n还可能提高显色反应的速率，影响有色络合物的溶解度和组成等。返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出四、显色剂1. 无机显色剂2. 有机显色剂3. 多元络合物返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出1. 无机显色剂n无机显色剂不多，因为生成的络合物不稳定，灵敏度和选择性也不高，目前应用不多。n如用KSCN显色测铁、钼、钨和铌；用钼酸铵显色测硅、磷和钒等。返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出2. 有机显色剂n有机显色剂分子中含有生色团和助色

20、团。n生色团（chromophoric group）：n含不饱和键的基团，如偶氮基、对醌基和羰基等。这些基团中的电子被激发时需能量较小，可吸收波长400nm以上的可见光而显色。n助色团（auxochromic group）：n含孤对电子的基团，如氨基、羟基和卤代基等。助色团与生色团的不饱和键作用，使颜色加深。 返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出常用有机显色剂n常用2类：n偶氮类，如：偶氮胂(铀试剂)n强酸性溶液中测Th()、Zr()、U()等；在弱酸性溶液中测稀土金属离子。n三苯甲烷类，如：铬天青S：n测定Al3+等许多金属离子； 由如：结晶紫：n测定Tl3+。 返回返回上一页上

21、一页下一页下一页返回返回退出退出3. 多元络合物n三元络合物n离子缔合物n金属离子络合剂表面活性剂体系n杂多酸返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出多元络合物n由三种或三种以上的组分所形成的络合物。n目前应用较多的是由一种金属离子与两种配位体所组成的三元络合物。三元络合物在吸光光度分析中应用较普遍。返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出三元配合物特性（1）比较稳定，可提高分析测定的准确度和重现性。 如：Ti-EDTA-H2O2稳定性比Ti-EDTA和Ti-H2O2二元配合物的稳定性分别增强1000倍和100倍。返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出（2）具有更高的

22、灵敏度和更大的对比度。 如： V(V)、H2O2 的二元配合物，测钒灵敏度低，而V(V)，H2O2和吡啶偶氮间苯二酚(PAR)形成1:1:1的有色络合物，用于钒的测定，其灵敏度高，最大吸收波长红移。 返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出（3）具有更高的选择性。 如： 铌和鉭都可以与邻苯三酚生成二元配合物，但在草酸中，只有鉭-邻苯三酚-草酸的黄色三元配合物形成。返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出（4）可以改善显色条件。 如如：有：有CTMACCTMAC（氯化十六烷基三甲基胺）（氯化十六烷基三甲基胺）存在时存在时,Al,Al3+3+与络天青与络天青S S形成三元络合物比形

23、成三元络合物比没有没有CTMACCTMAC时形成二元络合物的时形成二元络合物的pHpH范围宽范围宽。等.。返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出9.4 吸光度测量条件的选择一、入射光波长的选择二、参比溶液的选择三、吸光度读数范围的选择返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出一、入射光波长的选择n“最大吸收原则”（maximum absorption）n不仅灵敏度高，且能减少或消除由非单色光引起的对朗伯-比耳定律的偏离。n“吸收最大、干扰最小” n在最大吸收波长处有其他吸光物质干扰测定时选择。返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出A /nm0 1 2A /nm0 1

24、2返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出二、参比溶液的选择n参比溶液的作用：n调节仪器零点，消除由吸收池壁及溶剂、试剂等对入射光的反射和吸收造成透射光强度的减弱，使光强度的减弱仅与溶液中待测物质的浓度有关。n使用参比溶液校正： A=(I0/I) (I参比/I试液) 返回返回上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出n选择参比溶液的原则：n纯溶剂作参比液：仅待测物与显色剂的反应产物有吸收。n不加试样溶液的试剂空白作参比液：显色剂或其它试剂略有吸收。n不加显色剂的被测试液作参比液：显色剂为无吸收，被测试液中存在其他有色离子；若同时显色剂略有吸收，可在试液中加适当掩蔽剂掩蔽被测组分后再加显色

25、剂作参比液。返回返回当A=0.434(或透射比T=36.8%)时，测量的相对误差最小。待测溶液的透射比T在15%65%之间，或 使 吸 光 度 A 在0.20.8之间，才能保证测量的相对误差较小。0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 T108642108642|Et|%0.368返回返回上一页上一页下一页下一页退出退出三、吸光度读数范围的选择上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出n为使测量结果得到较高的准确度，一般应控制标准溶液和被测试液的吸光度在适宜范围内。n可通过控制溶液的浓度（如改变试样的取样量或改变显色体系的体积）或选择不同厚度的吸收池来达到目的。 返回返回上一页上一页下一页下

26、一页返回返回退出退出 1.2810-4 mol.L-1KMnO4溶液在波长溶液在波长525nm处用处用1cm吸收池测得透光度为吸收池测得透光度为0.500，试问（，试问（）计算计算KMnO4溶液的摩尔吸光系数为多少？（溶液的摩尔吸光系数为多少？（）在相对误差最小时的吸光度测定，则在相对误差最小时的吸光度测定，则KMnO4溶溶液的浓度为多少？液的浓度为多少？例题例题（）A=（1/T）= (1/0.500) =0.301A=bc， =A/ bc=0.3011（1.2810-4） =2.35103 （L.mol-1cm-1） （）在相对误差最小时测定，其A=0.434C=A/b=0.4341（2.3

27、5103） = 1.8510-4 mol.L-1上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出9.5 吸光光度法的应用1吸光系数法 2对照法3标准曲线法KbcA 上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出标准曲线法标准曲线法条件前提：固定仪器和测定CACKA样样同上条件固定条件查得测定样品曲线分别测定配制标准系列过程：CAACA上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出示例 芦丁含量测定mLmgmLmLmLmg250 . 32550/200. 0样品标样分别移取上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出续前cbaAAAA总定量依据：三种情况（如两组分两组分）： 1吸收光谱不重叠吸收光谱不重叠（互不干扰）在

28、各自在各自max下不重叠下不重叠分别按单组分分析分别按单组分分析aaaaaaACCA1111由bbbbbbACCA2222由bbaaAA222111；测定；测定过程：上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出续前2吸收光谱部分重叠吸收光谱部分重叠 1测测A1b组分不干扰组分不干扰可按单组分定可按单组分定量测量测Ca；2测测A2a组分干扰组分干扰不能按单不能按单组分定量测组分定量测Ca babaaaAA2222111；和测定；测定过程：aaaaaaACCA1111由bbaababaCCAAA22222由baababCAC222上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出续前3 3吸收光谱完全重叠吸收光

29、谱完全重叠混合样品测定混合样品测定 解线性方程组法解线性方程组法上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出n步骤：步骤：babababaAA22221111；和测定；和测定bbaababaCCAAA11111bbaababaCCAAA22222上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出AHL和AL-分别为有机弱酸HL在强酸和强碱性时的吸光度，它们此时分别全部以HL或L-形式存在。因此HL H+ + L-即即 A= HL + L H+cKa+H+ AHL= HLc AL= LcpKa=pH+ lg A - AL-AHL- Alg A - AL-AHL- A对对pH作图即可求得作图即可求得pKa A=

30、HLHL+ LL-Ka+H+ Kac上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出 摩尔比法摩尔比法 制备一系列含钌制备一系列含钌3.010-5 mol/L (固定不变固定不变)和和不同浓度（小于不同浓度（小于12.010-5 mol/L）的）的PDT溶液，按溶液，按实验条件，实验条件，485nm测定吸光度测定吸光度,作图。作图。PDT:Ru=2:1M + nL MLn稳定常数的测定稳定常数的测定自学。自学。上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出 原理：原理： A = A 1-A 2 = （ 1- 2）b c 波长对的选择：波长对的选择： 如如 等吸光度点法等吸光度点法应用：多组分混合物的测定；浑

31、浊样品的测定应用：多组分混合物的测定；浑浊样品的测定（消除背景吸收的干扰）；研究反应动力学。（消除背景吸收的干扰）；研究反应动力学。 上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出选选 1为参比波长为参比波长, 2为测量波长为测量波长得得 A 1= x 1bcx + y 1bcy A 2= x 2bcx+ y 2bcy A=A 2-A 1= ( x2bcx+ y 2bcy)-( x 1bcx+ y 1bcy)在等吸光度的位置在等吸光度的位置(G, F), y 2 y 1，则上式成为，则上式成为 A=( x 2- x 1）bcx A与与cx成正比成正比, 可用于测定可用于测定例例,苯酚苯酚(x)与与2

32、,4,6-三氯苯酚三氯苯酚(y)混合物中苯酚混合物中苯酚(x)的双波长分的双波长分光光度法测定。光光度法测定。上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出 9-6 紫外吸收光谱法简介 (Ultraviolet Spectrophotometry(Ultraviolet Spectrophotometry, UV ), UV ) 紫外吸收光谱法的基础是物质紫外吸收光谱法的基础是物质，与可见分光光度法一样，也是基于，与可见分光光度法一样，也是基于分子中分子中所产生的吸收。所产生的吸收。 chhE分子能级差上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出 相同：相同：产生机理（基于分子中价电子能级跃产生机理（基

33、于分子中价电子能级跃迁）；定量分析的原理相同（朗伯迁）；定量分析的原理相同（朗伯- -比尔定律）；比尔定律）；仪器组成部件相同。仪器组成部件相同。 差异：差异：仪器上仪器上 光源（氘灯）、光学材料（石英）、检测器（对紫外光响应灵敏）。 应用上，紫外光谱在有机物结构分析上有较好应用上，紫外光谱在有机物结构分析上有较好的应用。的应用。 KbcA 上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出COHnp ps sH上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出s sp p *s s *np p E上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出 1. 1. * * 跃迁：跃迁：

34、饱和烃（甲烷，乙烷）饱和烃（甲烷，乙烷） 能量很高，能量很高，150nm150nm（真空紫外区）（真空紫外区） 2. n 2. n * * 跃迁：跃迁： 含杂原子饱和基团（含杂原子饱和基团（OHOH，NHNH2 2） 能量较大，能量较大，150150 250nm250nm（真空紫外区）（真空紫外区）上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出3.3.* *跃迁：跃迁： 不饱和基团（不饱和基团（CCCC，C C O O ） 能量较小，能量较小， 200nm 200nm （近紫外区）（近紫外区） 体系共轭，体系共轭，E E更小，更小，更大更大4.n4.n* *跃迁：跃迁： 含杂原子不饱和基团含杂原子不

35、饱和基团 （C N C N ，C C O O ） 能量最小，能量最小， 200 200 400nm400nm（近紫外区）（近紫外区）上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出 2 -1-1-1-1 上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出 上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出极性溶剂的影响极性溶剂的影响 上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出 上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出 紫外吸光光度法的定量测定紫外吸光光度法的定量测定原理及步骤原理及步骤与可见区吸光光与可见

36、区吸光光度法相同。度法相同。 其应用很广泛，仅以药物分析来说，利用紫外吸收光谱其应用很广泛，仅以药物分析来说，利用紫外吸收光谱进行定量分析的例子很多，例如一些国家已将数百种药物的进行定量分析的例子很多，例如一些国家已将数百种药物的紫外吸收光谱的最大吸收波长和吸收系数紫外吸收光谱的最大吸收波长和吸收系数载入药典载入药典。 紫外吸光光度法可方便地用于直接测定紫外吸光光度法可方便地用于直接测定混合物中某些组混合物中某些组分的含量分的含量，如鱼肝油中的维生素，如鱼肝油中的维生素A A等。等。上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出 用经验规则（如用经验规则（如Woodward规则等）计算规则等）计算m

37、ax，与实测值比较判断。与实测值比较判断。 比较吸收光谱的一致性。比较吸收光谱的一致性。 在相同的条件下，比较未知物与已知标准物的紫在相同的条件下，比较未知物与已知标准物的紫外光谱图外光谱图。 若谱图一致，表明它们含有相同的生色团，但不若谱图一致，表明它们含有相同的生色团，但不一定是同一化合物。进一步可比较吸收系数。一定是同一化合物。进一步可比较吸收系数。上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出对比吸收光谱的一致性 三种甾体激素的紫外吸收光谱三种甾体激素的紫外吸收光谱(10m mg/ml甲醇溶液）甲醇溶液）醋酸泼尼松醋酸泼尼松醋酸氢化可的松醋酸氢化可的松醋酸可的松醋酸可的松上一页上一页下一页下

38、一页返回返回退出退出对比吸收系数：安宫黄体酮安宫黄体酮(M=386.53)炔诺酮炔诺酮(M=298.43) max=2401nm max=2401nm3344上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出C CHHC CHHmaxEtOH(nm) 280 295.5max 10500 29000 顺式： 短， 小 反式： 长， 大位阻效应上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出互变异构现象互变异构现象 COCH2COCH3COHCH COCH3酮式烯醇式 max 247nm 310nm共轭共轭 上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出杂质检测 HOHOCOCH

39、2CH2NHCH3HOHOHC CH2CH2NHCH3OH肾上腺酮肾上腺素肾上腺素与肾上腺酮的紫外吸收光谱max=310nm肾上腺酮肾上腺素上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出 某些物质的分子吸收一定能量后，电子某些物质的分子吸收一定能量后，电子从基态跃迁到激发态，在返回基态过程中，从基态跃迁到激发态，在返回基态过程中，以光辐射的形式释放能量，这种现象称为以光辐射的形式释放能量，这种现象称为分分子发光子发光，在此基础上建立起来的分析方法为，在此基础上建立起来的分析方法为分子发光分析法。分子发光分析法。9-6 分子发光分析概述上一页上一页下一页下一页返回返回退出退出 根据分子受激时所吸收能源

40、及辐射光的根据分子受激时所吸收能源及辐射光的机理不同分为：机理不同分为： 光致发光光致发光：以：以光源光源来激发而发光来激发而发光 化学发光化学发光：以：以化学反应能化学反应能激发而发光激发而发光化学发光分化学发光分析法析法 本书对本书对分子荧光分析分子荧光分析、磷光分析磷光分析和和化学发光分化学发光分析析这三种分子发光分析法进行简要讨论。这三种分子发光分析法进行简要讨论。上一页上一页返回返回退出退出本章小结9.1 吸光光度法基本原理9.2 目视比色法及光度计的基本部件9.3 显色反应及显色条件的选择9.4 吸光度测量条件的选择9.5 吸光光度法的应用9.6 紫外吸收光谱法简介9.7 分子发光分析法简介返回返回上一页上一页返回返回退出退出 1. 1. 什么是吸光光度法？其分析的依据是什么是吸光光度法？其分析的依据是什么？什么？ 2.2.透光度与吸光度的关系，朗伯透光度与吸光度的关系，朗伯- -比尔定比尔定律形式，摩尔吸收系数的物理意义。律形