动物传染病诊断与现代诊疗技术

1、山东农业大学动物传染病诊断与现代诊疗技术 减蛋综合征的诊断与防治 学 院 动物科技学院 专 业 兽医硕士 学生姓名 * 学 号 指导老师 减蛋综合征的诊断与防治摘要：减蛋综合征病毒（EDSV）是禽腺病毒属禽腺病毒群的唯一成员，本文从鸭减蛋综合征的防治机制的进展作一综述。关键词：减蛋综合征；减蛋综合征病毒；诊断；防治；机制 减蛋综合征病毒具有典型的腺病毒形态结构，而且主要感染产蛋鸡。1976年荷兰科学家首次报道了该病，并且命名为产蛋下降综合征，简称EDS-76。世界许多国家都曾有此病流行，造成巨大经济损失,我国部分地区亦有报道,并从发病鸡群中分离到病毒尽管发生本病 的都是产蛋鸡(少数人认为EDS

2、在鸭中可以引起产蛋下降和蛋壳变粗 糙变薄即）但自然宿主是鸭和鹅6。国外大多学者认为本病的发病机理 主要是由于在输卵管蛋壳分泌腺有大量病毒分布并产生明显的炎症反应从而导致蛋壳异常。本病的主要症状是鸡产蛋率下降和产异常蛋。产褐壳蛋的肉用种鸡发病较多，发病鸡群产蛋高峰期产蛋率突然下降，在病的极期多数异常蛋因破损而不能收集，恢复期仍产褪色、薄皮、表面凸凹不平、呈砂纸状的蛋4。病鸡轻微下痢，肛门周围常污秽不洁。组织学病变局限于输卵管，黏膜皱褶水肿，有白色渗出物或奶酪样物，卵巢可见成熟卵泡软化的现象。发病极期能见到子宫黏膜固有层、黏膜下层以及肌肉层的疏松结缔组织呈明显水肿，淋巴细胞、浆细胞、伪嗜酸性细胞浸

3、润，子宫腺体萎缩和减少，黏膜上皮细胞变性和剥离，有时细胞核内能见到包涵体2。我国大部分地区均发现了该病原。据耿亚杰等报道，产蛋鸡一旦感染EDS-76后，集群产蛋量无法达到高峰期或产蛋量大幅度下降。有研究发现，该病原存在于鸡的输卵管狭窄部、输卵管伞部、蛋壳分泌部以及鼻粘膜等上皮细胞中，且输卵管峡部是检测和分离病毒的最佳部位19，并且可随着卵子的形成进入蛋中形成垂直传播16。最新有研究发现，该病毒能使9日龄的鸭子出现呼吸道症状1。樱桃谷种鸭群初期症状不期显，采食和外观无异常。后期表现精神沉抑，部分种鸭羽毛松乱，下痢；该批樱桃谷种鸭155日龄才见蛋，开产日龄推迟，产蛋上升缓慢及不能达到产蛋高峰，18

4、0日龄产蛋达45%，220日龄时产蛋升到70%，最高峰产蛋率为75%；种蛋合格率明显下降，不合格种蛋比例上升，产畸形蛋、薄壳蛋、破壳蛋，蛋壳表面粗糙，外面布满石灰状物。畸形蛋蛋白、蛋黄正常。后来蛋形变小，蛋重变轻，蛋壳色泽变淡，蛋壳变薄、变软、粗糙。发病后期采食量有明显下降变化。1 EDSV的基本生物学特性EDSV病毒粒子的大小约为80nm，呈现二十面体对称，具有典型的腺病毒形态，其DNA的分子质量为22.6×103Kb14。EDSV能凝集鸡、鸭、鹅的红细胞，不能凝集哺乳动物的红细胞，对乙醚、氯仿不敏感。2 EDSV基因组的分析EDSV是一种无囊膜的双股DNA病毒，基因组全长3321

5、3个碱基12，通过中和试验仅发现一个血清型，但是用限制性内切酶图谱分析发现不同地区分离的毒株之间DNA序列有所不同。3 实验室诊断技术3.1套式PCR检测技术以优化过程中选择的最适变性温度及时间、退火温度及时间、延伸温度及时间进行PCR反应13。在Eppendorf臂中顺序混匀PcR缓冲液、4dNTp、引物、Mgcl、模板和TaqDNA聚合酶。将上述试剂在旋涡式混匀器混匀后-离心5s,94水浴5 min，置于冰上冷却，迅速离心数秒，然后加入TaqDNA聚合酶O.5µL；混匀后，加50µL灭菌液体石蜡盖上盖子在PCR扩增仪上按以下程序进行第一轮PcR扩增：先94预变性5 mi

6、n，进入三步PCR；94变性40s54退火30s，74延伸40s。反复35个循环最后74保温6 min。第二轮PCR用内引物20。以第1次扩增产物为模板进行扩增。除退火温度改为57外其他与第一轮扩增相同。3.2.1 病毒DNA的提取将纯化的病毒用SDS（10%）终浓度为1蛋白酶消化饱和酚/氯仿/异戊醇（25241）抽提沉淀用无水乙醇洗涤，并用TE缓冲液溶解DNA，存于20保存备用。3.2.2 实时荧光定量RT-PCR使用THUNDERBIRD qPCR Mix试剂盒，按照20µL反应体系，其中H2O7.26µL;probeqpeRMix10µL;TGEv-Fo.6

7、µL;TGEv-Ro.6µL;TGEV-p0.5µL;3条引物浓度均10µM;50XROXrefereneedyeo.O4µL;质粒模版1µL混匀加入专用96孔板进行反应，反应的程序为502min;95lmin;95155;60lmin，40个循环，其中每个模版浓度均做3个重复。然后取平均值分析结果，每次均设立阴性对照。4 防治策略 4.1鸭减蛋综合征的预防  鸭减蛋综合征主要发生在冬春季节，各品种的产蛋期母鸭都有发生。该病是由禽型副粘病毒、某些腺病毒及其它一些病原因素和营养缺乏因素（如蛋氨酸、精氨酸、维生素E、维

8、生素A缺乏等）引起的，以鸭群产蛋率急剧下降为特征的急性、低致死率的传染病。主要发生于产蛋鸭群，其传染途径既可经蛋垂直传播，也可通过呼吸道、消化道水平传播。病毒主要侵害生殖系统，经繁殖、喉头和排粪时排毒。本病尚无特效的治疗药物，在饲粮中增加维生素、鱼肝油和矿物质以利于产蛋的恢复。该病重点在于预防，在开产前接种鸭减蛋综合症疫苗可有效防制本病。4.1.1.对种鸭群，从幼龄期起，坚持用“鸭产蛋下降综合症油乳剂灭活疫苗”实施合理的免疫接种程序：于1520日龄接种该疫苗一次，皮下注射0.5毫升/只，产蛋前1个月接种1次肌注11.5毫升/只，以后每年春末、冬初（或中秋）各接种一次，1.01.5毫升/只。在此

9、免疫接种过程可以同时考虑配合免疫接种大肠杆菌灭活苗和鸭瘟疫苗，并作好常规的饲养管理与卫生消毒工作。4.1.2控制好环境（1）由于此病是垂直传播，因此要严格注意从非疫区引种，杜绝EDS76病毒的传入，以减少发病机会。坚决不能使用来自感染鸭群的种蛋。（2）病毒能在粪便中存活，具有抵抗力，因此要有合理有效的卫生管理措施。严格控制外人及野鸟进入鸭舍，以防疾病传播。（3）对肉用鸭采取“全进、全出”的饲荞方式，对空鸭舍全面清洁及消毒后，空置一段时间方可进鸭。对种鸭采取鸭群净化措施，即将产蛋鸭所产蛋孵化成雏后，分成若干小组，隔开饲养，每隔6周测定一下抗体，一般测定10%25%的鸭，淘汰阳性鸭，直到100%阴

10、性小鸭继续养殖15。4.2加强饲养管理加强饲养管理，认真打扫舍内及过道的环境。清扫后的粪便要堆放在指定位置，并且做相应处理，对饲养工具等定期进行清洗和消毒。舍内过道使用4%的火碱溶液进行消毒，饲养工具用百毒杀或碘伏进行消毒，还可以使用氯制剂带鸡喷雾消毒。消毒剂要经常更换使用，严禁无关人员外来运输车辆等进入鸡场，以防止将病毒带入。严禁从疫区购进种蛋或引种，若需引种尽量从无该病的鸡场引入，并且隔离观察一定时间后再进行饲养。要定期淘汰病残鸡做到无害化处理。4.3温度及光照冬季鸡舍要做好保温措施，并且注意通风换气，使氨气含量低于15mg/L，硫化氢低于10 mg/L。冬季阴冷天气较多要保证舍内有充足的

11、光照每天光照时间不低于1416h，光照强度在20lx以上。夏季气温过高要打开所有通风设施进行降温，要保证有充足干净的饮水。控制好湿度。4.4药物预防 定期在饮水中添加新霉素每100kg水添加5g，饲料中添加增蛋散金蟾毒败或毒瘟清散每千克饲料中添加40g，连续饲喂7d停止用药。3d后用量减半再用药7d同时全群应补充多种维生素加快其恢复16。 4.5免疫接种在蛋鸡115135日龄时，使用EDS-76油乳剂灭活苗或EDS-76-新城疫-传染性支气管炎三联苗肌肉注射每只鸡0.51.0mL。2周后便可产生抗体35周龄时再免疫接种1次。4.6本病治疗原则早发现，早治疗。因本病鸭群发生率较鸡小，发病迅速且发

12、病初期症状不明显，故一般容易被忽视而延误治疗，从而影响种鸭生产性能恢复的最佳时期，导致产蛋量不易恢复。因此在病变早期发现有利于疾病的治疗和生产性能的恢复。参考文献：1 Se-yeoun Cha,min Kang,Oun-Kyoung Moon,et al.Respiratory disease due to current egg drop syndrome virus in Pekin ducksj,Veterinary Microbiology 2013,165:305-311.2G.DhinakarRaj,S.Sivakumar,S.Sudharsan,etal.Gmnomicchara

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