实验六人参中人参皂苷的提取分离及鉴定

1、实验六人参中人参皂昔的提取分离及鉴定人参为五加科植物人参panax ginseng c.a.mey. 干燥根，是 传统名贵中药，始载于我国第一部本草专著神农本草经。其栽培 者称为“园参"，野生者称为“山参"。人参具有大补元气、复脉固脱、 补脾益肺、生津、安神之功能，用于体虚欲脱、肢冷脉微、脾虚食少、 肺虚喘咳、津伤口渴、内热消渴、久病虚羸、惊悸失眠、阳痿宫冷、 心力衰竭、心源性休克等的治疗。人参的化学成分很复杂，有皂昔、挥发油、糖类及维生素等。经 现代医学和药理研究证明，人参皂昔为人参的主要有效成分，它具有 人参的主要生理活性。人参的根、茎、叶、花及果实中均含有多种人 参皂

2、甘(ginsenosides)。到目前为止，文献报道从人参根及其它部位已 分离确定化学结构的人参皂昔有人参皂昔ro、阳2、-rbi、-rb2> -rb3> rc、-rd、-re、-rf、-rgi、-rg?、-rg3、-rhj> -rh?及-rh3 50余种人参皂昔。根据皂昔元的结构可分为a、b、c三种类型：人参二醇型-a 型，人参三醇型b型，齐墩果酸型c型。a型和b型皂甘均属 四环三话皂昔，其皂昔元为达马烷型四环三菇,a型皂貳元称为20(s)- 原人参二醇20 (s) -protopanaxadiolo b型皂貳元称为20(s)-原人参 三醇20 (s) -protopana

3、xatriolo c型皂昔则是齐墩果烷型五环三祜的 衍生物,其皂昔元是齐墩果酸(oleanolic acid)。小r.r220(s)jk 人二弊h .h人皂仔ra,glc(2-*l)glcglc(6-l)ara(p)(4-*l)xyl人參电普r血glc(2-*l)gtcglc(6-l)ara(f)(4-l)xyl人發电苦rb,gic(2-*l)glcglc(6-l)rlc人參a苗rihglc(2-l)glcglc(6-l)ar«(p)人rcgic( 2*l)glcglc(6-l)ar«(f)人番电昔rdgkk2-l)<iclc人电音r&gk(2-*l)glch

4、人參电tt rhj :gk h :(2)人参三醇型-bffl: : 门(1)人參二肄型a«hr>ri20(s原入三静* h h人參电昔regic(2l )rhaglc人發宅昔rfglc(2-?-l)gtch人鑫皂昔r&.glc <.glc人参皂昔r&gk(2-*l )rhah人畚皂昔rhglch(3)齐駭果酸型目的要求1通过实验进一步掌握三祜类化合物的理化性质及提取、分离 和检识方法。2.学习和掌握简单回流提取法、两相溶剂萃取法、旋转蒸发器、 大孔树脂柱色谱等基本实验操作技能。实验原理人参的主耍成分为人参皂昔，总皂昔含量约4%,人参皂昔大 多数是白色无定形

5、粉末或无色结晶，味微甘苦，具有吸湿性。人参皂 昔易溶于水，甲醇、乙醇,可溶于正丁醇、乙酸、乙酸乙酯，不溶于 乙瞇、苯等亲脂性有机溶剂。水溶液经振摇后可产生大量的泡沫。人 参总皂昔无溶血作用，分离后，b型和c型人参皂昔有显著的溶血作 用，而a型人参皂甘有抗溶血作用。人参中除含有皂昔外，还含有脂溶性成分如挥发油，脂肪、帑体 化合物及大量的糖类等，这些类成分对人参皂昔的分离和精制有干 扰，所以必须除去，方可得到纯度较高的皂昔。本实验以人参根为原料提取分离人参总皂昔，利用人参总皂昔易 溶于甲醇，不溶于乙醍性质采用溶剂法进行初步提取去杂；然后根据 皂昔在含水丁醇中有较好的溶解度的性质采用萃取法进行分离；

6、再用 沉淀法或大孔吸附树脂法进行进一步分离精制；对提山的总皂廿采用 检测三菇类化合物通性的理化检识方法一一泡沫试验及显色反应进 行初步定性检识；最后根据人参总皂昔中各单体皂昔分子结构中糖基 个数和轻基数不同而极性大小不同的性质，通过薄层色谱法对人参总 皂昔进一步分离和专属定性检识。实验内容一、人参总皂昔的提取分离任选一种方案方案人参根粗粉(60 s 10g )用滤纸筒包好，置索氏提取器中， 加卩醉加热回流提取至三氯化怫氯仿饱和溶液反应呈阴性，提取液减压回收甲醇浸膏j川10倍量熬憎水溶解水溶液用乙瞇在分液漏斗中，振摇脱脂4次乙陋液(脂类)水层用水饱和的正丁醇萃取6次, v合并正丁醇液|减压回收正

7、丁醇，蒸干方案人参根粗粉（60目10g）乙瞇液（脂类）残渣川滤纸筒包好，置索氏提取器屮, 加10倍量乙讎冋流脱脂至无色，|加甲醇加热冋流提取至三氯化铢氯仿饱和溶液反应呈阴性卬醇捉取液|减压回收卬醇浸膏|用10倍量熬他水溶解 水溶液|用水饱和的正丁醇萃取6次，合并 止丁醇液|减压回收止丁醇，蒸干残留物（总皂甘粗品）二、人参总皂昔的分离精制将人参总皂昔粗品分为两份方法（1）沉淀法1份总皂昔粗品甲醇溶解，倾入约10倍量丙酮, 不断搅拌，析出黄口色沉淀|过滤 总皂昔v母液j冋收溶剂，用少量甲醇溶解，再倾入约10倍量丙酮 黄白色沉淀1过滤合并，减压60°c下真空干燥，称重计算收率精制总皂昔方法

8、（2）大孔树脂柱色谱法大孔树脂色谱是近年来用于分离和富集天然化合物的一种常用方法，应用大孔树脂分离皂甘，主要用于皂甘的富集和初步分离。将 含有皂昔的水溶液通过大孔树脂柱吸附后，先用水洗脱除去糖和其他 水溶性杂质，然后改用不同浓度的甲醇或乙醇进行梯度洗脱。极性大 的皂昔可被低浓度的甲醇或乙醇洗脱下来，极性小的皂昔则被高浓度 的甲醇或乙醇洗脱下来。1份总皂昔粗品用少量水溶解，加样丁处理好的d101型大孔树脂柱上，吸附1小时后，用3倍柱体积蒸帑水洗脱除朵质v继用60%乙醇洗脱至三氯化怫氯仿饱和溶液反应呈阴性洗脱液|减压回收溶剂残留物|减压60°c下真空干燥，称重计算收率秸制总皂昔三、人参皂

9、昔的鉴定（一）理化检识1. 泡沫试验取人参根粗粉1g,加水浸泡（1： 10） 1小时或置80°c水浴上 温浸30分钟，过滤得滤液供以下试验。取供试液2ml于试管屮，紧塞试管口后猛力振摇，试管内液体则 产生大量的持久性的似蜂窝状泡沫（示有皂昔）。注：含蛋白质和粘液质的水溶液虽也能产生泡沫，但不持久，放 置很快消失。2. 显色反应（1 ）醋酉干一浓硫酸反应（liebermann-burchard反应）取样品适量，加冰醋酸0.5ml使溶解，续加醋酹0.5ml搅匀，再 于溶液的边沿滴加1滴浓硫酸，观察并记录现象。（2）三氯甲烷一浓硫酸反应（salkowski反应）取样品适量，加一氯甲烷1 m

10、l使溶解，沿试管壁加等量的浓硫酸, 分别置可见光及紫外灯下，观察并记录现象。（3）五氯化餅反应（kahlenberg reaction）取样品适量，加五氯化铢的氯仿溶液反应呈紫色。或将样品的氯 仿或醇溶液点于滤纸上，喷20%五氯化钮的氯仿溶液（或不含乙醇和 水的三氯化铢饱和的氯仿溶液），干燥后60°c70°c加热，显色，观察 并记录现象。（二）色谱检识1. 薄层色谱吸附剂：硅胶-cmc薄层板样品溶液：称取由沉淀法及大孔吸附树脂法制得的精制总皂昔 各一份，加甲醇制成lml含2mg的样品溶液。对照晶溶液：称取人参皂昔rbl、re、rgl对照品，加甲醇制 成lml含2mg的对照品

11、混合溶液。对照药材溶液：取人参对照药材粉末lg,加氯仿40ml,置水 浴上回流1小时，弃去氯仿液，纱渣挥干残存溶剂，加水0.5ml拌匀 湿润后，加水饱和的正丁醇10ml,超声处理30分钟，吸取上清液， 加氨试液三倍量，摇匀，放置分层，取上层液蒸干加甲醇溶解，使成 lml,作为对照药材溶液。展开剂：a. 氯仿甲醇冰（65： 35： 10）10°c以下放置后的下层溶 液；b. 氯仿-乙酸乙酯-甲醇水（15： 40： 22： 10） 10°c以下 放置后的下层溶液；显色剂:10%硫酸乙醇溶液显色方式:10%硫酸乙醇溶液喷雾后，105°c加热至斑点显色 清晰。分别置h光及

12、紫外灯（365nm）下检视.实验说明及注意事项1. 萃取操作时，注意振摇不能过度剧烈，以防产生乳化现象。2. 在使用旋转蒸发器进行甲醇提取液减压浓缩时，因含皂昔易 产生大量泡沫发生倒吸现象。故应注意观察随时调整水浴温度及旋转 蒸发器转速，避免事故的发生。3. 在连续回流提取过程中，水浴温度不宜过高，应与溶剂沸点 相适应。此外可加快冷凝水的流速，以增加冷凝效果。4. 回收乙瞇的蒸惚操作，不必另换蒸惚装置。只将索氏提取器 屮的滤纸筒取出，再照原样装好，继续加热冋收烧瓶屮的溶剂，待溶 剂液面增加至高虹吸管顶部弯曲处1cm处，暂停回收，取下提取器, 将其中乙醯移置另外容器中，如此反复操作，即可完成回收乙醯的操 作。5. 在连续提取过程中，欲检查有效成分是否提取完全，可取提 取器屮提取液数滴，滴于白瓷皿屮，挥散溶剂，观察有无残留物，或 滴于滤纸片上，然后进行醋酊一浓硫酸反应或三氯化铢氯仿饱和溶液 反应。若反应呈阴性，示已提尽。6. 大孔树脂在使用前应按说明书处理好，加乙醇浸泡24 h后， 再用乙醇洗脱至流出液与3倍水混合后不呈混浊，继续用蒸憎水洗至 无醇为止备用。思考题1. 三菇皂昔可用哪些反应进行鉴定？如何与笛体皂昔区别？2