中药制剂申报资料8年前模板-15号资料

1、第二部分：药学研究资料 *颗粒申报资料15 药品标准草案及起草说明，并提供药品标准物质及有关资料15.1 药材质量标准草案1丹参 Danshen RADIX ET RHIZOMA SALVIAE MILTIORRHIZAE 基源：本品为唇形科植物丹参Ralvia miltiorrhiza Bge的干燥根及根茎。本品应符合中华人民共和国药典2005版一部第52页丹参项下的有关规定。2没药 Moyao MYRRHA基源：本品为橄榄科植物没药树Commiphora myrrha Engl.或爱伦堡没药树Balsamodendron ehrennbergianum Berg.的干燥胶树脂。前者习称“天

2、然没药”，后者习称“胶质没药”。本品应符合北京市中药饮片标准第329页没药项下的有关规定。3鸡血藤 Jixueteng CAULIS SPATHOLOBI基源：本品为豆科植物密花豆 Spatholobus suberectus Dunn的干燥藤茎。本品应符合中华人民共和国药典2005版一部第134页鸡血藤项下的有关规定。4血竭 Xuejie SANGUIS DRACONIS基源：本品为棕榈科植物麒麟竭Daemonorops draco Bl.果实渗出的树脂经加工制成。 本品应符合中华人民共和国药典2005版一部第96页血竭项下的有关规定。5延胡索 Yanhusuo RHIZOMA CORYDA

3、LIS基源：本品为罂粟科植物延胡索Corydalis yanhusuo W.T.的干燥块茎。本品应符合中华人民共和国药典2005版一部第94页延胡索项下的有关规定。6当归 Danggui RADIX ANGELICAE SINENSIS基源：本品为伞形科植物当归Angelica sinensis(Oliv.）Diels的干燥根及根茎。 本品应符合中华人民共和国药典2005版一部第89页当归项下的有关规定。7郁金 Yujin RADIX CURCUMAE基源：本品为姜科植物温郁金Curcuma wenyujin Y.H.Chenet C.Ling姜黄Curcuma longa L.广西莪术Cur

4、cuma kwangsiensis S.G.Lee et C.F.Liang 或蓬莪术Curcuma phaeocaulis Val.的干燥块根。本品应符合中华人民共和国药典2005版一部第144页郁金项下的有关规定。8制何首乌 Zhiheshouwu RADIX POLYGONI MULTIFLORI PRAEPARATA CUM SUCCO GLUCINES SOTAE基源：本品为何首乌的炮制加工品。本品应符合中华人民共和国药典2005版一部第123页制何首乌项下的有关规定。9桃仁 Taoren RADIX ET RHIZOMA SALVIAE基源：本品为唇形科植物丹参Ralvia mil

5、tiorrhiza Bge的干燥根及根茎。本品应符合中华人民共和国药典2005版一部第52页桃仁项下的有关规定。10黄精 Huangjing RHIZOMA POLYGONATI基源：本品为百合科植物颠黄精Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.、黄精Polygonatum sibiricum Red.或多花黄精Polygonatum cyrtonema Hua的干燥根茎。本品应符合中华人民共和国药典2005版一部第215页黄精项下的有关规定。11红花 Taoren RADIX ET RHIZOMA SALVIAE基源：本品为菊科植物红花Ralvia milti

6、orrhiza Bge的干燥根及根茎。本品应符合中华人民共和国药典2005版一部第103页红花项下的有关规定。12粉葛 Fengen RADIX PUERARIAE THOMSONII基源：本品为豆科植物甘藤葛Pueraria thomsonii Benth.的干燥根。本品应符合中华人民共和国药典2005版一部第203页粉葛项下的有关规定。13乳香（炒） Ruxiang OLIBANUM基源：本品为橄榄科植物卡氏乳香树Boswellia Carterii Birdw.及同属其它数种植物渗出的油胶树脂。本品应符合北京市中药饮片标准第332页乳香项下的有关规定。14冰片 Bingpian BORN

7、EOLUM SYNTHETICUM基源：本品为合成龙脑。本品应符合中华人民共和国药典2005版一部第98页冰片项下的有关规定。15.2 成品质量标准草案*颗粒Guanmaining Keli【处方】丹参 112.5g 没药(炒) 25.5g 鸡血藤 112.5g 血竭 25.5g 延胡索(醋制) 45g 当归 45g 郁金 45g 制何首乌 75g 桃仁(炒) 30g 黄精(蒸) 75g 红花 30g 粉葛 112.5g 乳香(炒) 5.5g 冰片 4.5g甜菊素 10g 糊精适量 制成颗粒 1000g【制法】以上十四味，冰片研细；粉葛、乳香、没药、血竭、郁金、延胡索粉碎成细粉，过100目筛；

8、其余丹参等七味加水煎煮二次，第一次加10倍量水煎煮3小时，第二次加8倍量水煎煮2小时，合并煎液，滤过，浓缩成相对密度为1.20（60）的清膏，与上述粉葛等细粉混合，加入适量甜菊素、糊精制成颗粒，干燥，整粒，将冰片用适量乙醇溶解，喷入至上述颗粒，混匀，低温干燥，制成1000g，即得。【性状】 本品为棕黄色至棕褐色的颗粒；气清香、味微甜后微苦。【鉴别】 （1）取本品适量，研细，取约5g，加甲醇20ml，浸泡30分钟，取上清液蒸干，残渣加甲醇使溶解，浓缩至0.5ml，作为供试品溶液。另取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各

9、5l，分别点于同一硅胶H薄层板上，以氯仿甲醇水(7:2.5:0.25)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝色荧光斑点。（2）取本品适量，研细，取约5g，加氯仿10ml，浸泡30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取血竭素对照品，加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯乙醇(10:1)为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。（3）取本品适量，研细，取约2g，加氯仿

10、10ml，浸泡30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取冰片对照品，加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯丙酮(9:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5香草醛硫酸溶液，加热数分钟至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。（4）取本品适量，研细，取约5g，加乙醚20ml超声处理10分钟，滤过，滤液浓缩至约1ml，作为供试品溶液。另取没药对照药材0.5g，加乙醚 5ml，同法制成没药对照药材溶液；取乳香对照药材0.5g，加乙醚5ml，同法制成乳香对照

11、药材溶液。照薄层色谱法（附录VI B）试验，吸取上述各种溶液各10l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯（9:0.7）为展开剂，展开，取出，晾干。喷以5香草醛硫酸溶液，105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与没药对照药材色谱相同的位置上，显相同颜色的斑点；在与乳香对照药材色谱相同的位置上，显相同颜色的斑点。（5）取本品适量，研细，取约5g，加甲醇20ml，超声处理20分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，加氨试液调节pH值至9，用乙醚振摇提取3次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含

12、1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各10µl，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶薄层板上，以正已烷-氯仿-甲醇（1582）为展开剂，展开，取出，晾干，用碘蒸气熏至斑点显色清晰，在空气中挥尽板上吸附的碘后，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。【检查】 应符合颗粒剂项下有关的各项规定（中国药典2005年版一部附录I C）。【含量测定】 照高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录 D）测定。色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲

13、醇乙腈水甲酸（42：5：52：1）为流动相；检测波长为287nm。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备 精密称取丹酚酸B对照品，加75甲醇制成每1ml含0.14mg的溶液，即得。供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品内容物，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加75甲醇50ml，称定重量，超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用75甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜（0.45µm）滤过，取续滤液即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每袋含丹参以丹酚酸B（C36H30O16）计，不得少于12

14、.0mg。【功能与主治】活血化瘀，行气止痛。用于以胸部刺痛、固定不移、入夜更甚、心悸不宁，舌质紫暗，脉沉弦为主症的冠心病，心绞痛，冠状动脉供血不足。【用法与用量】 开水冲服。一次5 g，一日3次。【规格】 每袋装5g【贮藏】 密封。【有效期】2年。15.3 药材质量标准起草说明丹参为唇形科植物丹参Ralvia miltiorrhiza Bge的干燥根及根茎。本品应符合中华人民共和国药典2005版一部第52页丹参项下的有关规定。经对三批丹参药材进行检验，结果均符合规定。没药为橄榄科植物没药树Commiphora myrrha Engl.或爱伦堡没药树Balsamodendron ehrennbe

15、rgianum Berg.的干燥胶树脂。前者习称“天然没药”，后者习称“胶质没药”。本品应符合北京市中药饮片标准第329页没药项下的有关规定。经对三批没药药材进行检验，结果均符合规定。鸡血藤为豆科植物密花豆 Spatholobus suberectus Dunn的干燥藤茎。本品应符合中华人民共和国药典2005版一部第134页鸡血藤项下的有关规定。经对三批鸡血藤药材进行检验，结果均符合规定。血竭为棕榈科植物麒麟竭Daemonorops draco Bl.果实渗出的树脂经加工制成。本品应符合中华人民共和国药典2005版一部第96页血竭项下的有关规定。经对三批血竭药材进行检验，结果均符合规定。延胡索

16、为罂粟科植物延胡索Corydalis yanhusuo W.T.的干燥块茎。本品应符合中华人民共和国药典2005版一部第94页延胡索项下的有关规定。经对三批延胡索药材进行检验，结果均符合规定。当归为伞形科植物当归Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根及根茎。本品应符合中华人民共和国药典2005版一部第89页当归项下的有关规定。经对三批当归药材进行检验，结果均符合规定。郁金为姜科植物温郁金Curcuma wenyujin Y.H.Chenet C.Ling姜黄Curcuma longa L.广西莪术Curcuma kwangsiensis S.G.Lee et C.F

17、.Liang 或蓬莪术Curcuma phaeocaulis Val.的干燥块根。本品应符合中华人民共和国药典2005版一部第144页郁金项下的有关规定。经对三批郁金药材进行检验，结果均符合规定。制何首乌为何首乌的炮制加工品。本品应符合中华人民共和国药典2005版一部第123页制何首乌项下的有关规定。经对三批制何首乌药材进行检验，结果均符合规定。桃仁为唇形科植物丹参Ralvia miltiorrhiza Bge的干燥根及根茎。本品应符合中华人民共和国药典2005版一部第52页桃仁项下的有关规定。经对三批桃仁药材进行检验，结果均符合规定。黄精为百合科植物颠黄精Polygonatum kingia

18、num Coll.et Hemsl.、黄精Polygonatum sibiricum Red.或多花黄精Polygonatum cyrtonema Hua的干燥根茎。本品应符合中华人民共和国药典2005版一部第215页黄精项下的有关规定。经对三批黄精药材进行检验，结果均符合规定。红花为菊科植物红花Ralvia miltiorrhiza Bge的干燥根及根茎。本品应符合中华人民共和国药典2005版一部第103页红花项下的有关规定。经对三批红花药材进行检验，结果均符合规定。粉葛为豆科植物甘藤葛Pueraria thomsonii Benth.的干燥根。本品应符合中华人民共和国药典2005版一部第2

19、03页粉葛项下的有关规定。经对三批粉葛药材进行检验，结果均符合规定。乳香为橄榄科植物卡氏乳香树Boswellia Carterii Birdw.及同属其它数种植物渗出的油胶树脂。本品应符合北京市中药饮片标准第332页乳香项下的有关规定。经对三批乳香药材进行检验，结果均符合规定。冰片为合成龙脑。本品应符合中华人民共和国药典2005版一部第98页冰片项下的有关规定。经对三批冰片药材进行检验，结果均符合规定。15.4 成品质量标准起草说明15.4.1 名称和汉语拼音【名 称】 本品是由卫生部药品标准（中药成方制剂）第十册收载的的“*片”改剂型而得，故命名为“*颗粒”。【汉语拼音】 Guanmaini

20、ng Keli15.4.2 处方与制法【处方】按照颗粒剂与片剂每次和每天服用生药量一致的原则，依照颗粒剂的处方比例确定1000g的处方量。丹参 112.5g 没药(炒) 25.5g 鸡血藤 112.5g 血竭 25.5g 延胡索(醋制) 45g 当归 45g 郁金 45g 制何首乌 75g 桃仁(炒) 30g 黄精(蒸) 75g 红花 30g 粉葛 112.5g 乳香(炒) 25.5g 冰片 4.5g甜菊素 10g 糊精适量 制成颗粒 1000g【制法】见申报资料12号。以上十四味，冰片研细；粉葛、乳香、没药、血竭、郁金、延胡索粉碎成细粉，过100目筛；其余丹参等七味加水煎煮二次，第一次加10

21、倍量水煎煮3小时，第二次加8倍量水煎煮2小时，合并煎液，滤过，浓缩成相对密度为1.20（60）的清膏，与上述粉葛等细粉混合，加入适量甜菊素、糊精制成颗粒，干燥，整粒，将冰片用适量乙醇溶解，喷入至上述颗粒，混匀，低温干燥，制成1000g，即得。15.4.3 性状根据本制剂的三批中试产品进行性状描述。本品为棕黄色至棕褐色的颗粒，气清香、味微甜后微苦。表15-1 性状观察结果供试品批号性状20050801本品为棕黄色的颗粒，气清香、味微甜后微苦。20050802本品为棕黄色的颗粒，气清香、味微甜后微苦。20050803本品为棕黄色的颗粒，气清香、味微甜后微苦。15.4.4 鉴别原“*片”的质量标准中

22、鉴别（1）项下为丹参的薄层色谱鉴别，本标准中由于对丹参进行含量测定，故未将其鉴别方法纳入*颗粒质量标准草案中丹参的薄层色谱鉴别项下。（1）粉葛的薄层色谱鉴别参照原*片标准中鉴别（2）项下粉葛的薄层鉴别，我们制定了*颗粒质量标准中粉葛的薄层鉴别方法，结果证明，该方法可靠，准确，重现性好，故将其鉴别方法纳入*颗粒质量标准草案中粉葛的薄层色谱鉴别项下。鉴别结果如表15-2。表15-2 粉葛的鉴别批 号鉴 别 结 果20050801在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。20050802在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。20050803在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结

23、果：三批供试品的色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，都显相同颜色的斑点，且阴性对照无干扰（详见第14号资料）。（2）血竭的薄层色谱鉴别参照原*片标准中鉴别（3）项下血竭的薄层鉴别，我们制定了*颗粒质量标准中血竭的薄层鉴别方法，结果证明，该方法可靠，准确，重现性好，故将其鉴别方法纳入*颗粒质量标准草案中血竭的薄层色谱鉴别项下。鉴别结果如表15-3。表15-3 血竭的鉴别批 号鉴 别 结 果20050801在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。20050802在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。20050803在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果：三批供试品的色谱中

24、，在与对照品色谱相应的位置上，都显相同颜色的斑点，且阴性对照无干扰（详见第14号资料）。（3）冰片的薄层色谱鉴别参照原*片标准中鉴别（4）项下冰片的薄层鉴别，我们制定了*颗粒质量标准中冰片的薄层鉴别方法，结果证明，该方法可靠，准确，重现性好，故将其鉴别方法纳入*颗粒质量标准草案中冰片的薄层色谱鉴别项下。鉴别结果如表15-4。表15-4 冰片的鉴别批 号鉴 别 结 果20050801在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。20050802在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。20050803在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果：三批供试品的色谱中，在与对照品色谱相应的

25、位置上，都显相同颜色的斑点，且阴性对照无干扰（详见第14号资料）。（4）乳香、没药的薄层色谱鉴别参照文献方法，我们制定了*颗粒质量标准中乳香和没药的薄层鉴别方法，结果证明，该方法可靠，准确，重现性好，故将其鉴别方法纳入*颗粒质量标准草案中乳香和没药的薄层色谱鉴别项下。鉴别结果如表15-5。表15-5 乳香、没药的鉴别批 号鉴 别 结 果20050801在与对乳香和没药对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。20050802在与对乳香和没药对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。20050803在与对乳香和没药对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色的斑点。结果：三批供试品的色谱

26、中，在与乳香和没药对照药材色谱相应的位置上，分别都显相同颜色的斑点，且阴性对照无干扰（详见第14号资料）。（5）延胡索的薄层色谱鉴别参照中国药典2005年版一部延胡索项下的薄层鉴别方法，我们制定了*颗粒质量标准中延胡索的薄层鉴别方法，结果证明，该方法可靠，准确，重现性好，故将其鉴别方法纳入*颗粒质量标准草案中乳香和没药的薄层色谱鉴别项下。鉴别结果如表15-6。表15-6 延胡索的鉴别批 号鉴 别 结 果20050801在与延胡索乙素对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。20050802在与延胡索乙素对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。20050803在与延胡索乙素对照品色谱相应的位置

27、上，显相同颜色的斑点。结果：三批供试品的色谱中，在与延胡索乙素对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性对照无干扰（详见第14号资料）。（6）鸡血藤的薄层色谱鉴别参考文献，我们对处方中的鸡血藤进行了薄层色谱鉴别，但由于阴性有干扰，故未收入*颗粒质量标准草案正文。（详见14号资料）。（7）何首乌的薄层色谱鉴别参考文献，我们对处方中的何首乌进行了薄层色谱鉴别，但由于阴性有干扰，故未收入*颗粒质量标准草案正文。（详见14号资料）。（8）郁金的薄层色谱鉴别参考文献，我们对处方中的郁金进行了薄层色谱鉴别，但由于阴性有干扰，故未收入*颗粒质量标准草案正文。（详见14号资料）。（9）当归的薄层色谱鉴别

28、参考文献，我们对处方中的当归进行了薄层色谱鉴别，但由于样品色谱中在与与对照药材色谱相应的位置上没有相同颜色的斑点，考虑到当归在本处方中所占的比例太小，故未进行进一步摸索，在*颗粒质量标准草案正文中未收入当归的薄层色谱鉴别。（详见14号资料）。由于方中的桃仁（炒）、黄精（蒸）、红花三味药材所占的比例都很小，且为煎煮入药，故未做进一步摸索。15.4.5 检查按中华人民共和国药典2005年版一部附录IC颗粒剂项下有关的各项规定，检查三批制剂样品的装量差异、水分、溶化性、粒度、微生物限度等项目；此外，增做了重金属及砷盐检查。（1）装量差异取不同批号的供试品适量（批号：20050801、20050802

29、、20050803），按照中华人民共和国药典2005年版一部附录IC项下装量差异检查法检查，结果装量差异应在±7.0%以内，应符合规定。结果：三批供试品的装量差异均符合规定。（2）水分按照中华人民共和国药典2005年版一部附录H项下水分测定法第一法检查，结果水分应在6.0以内，应符合规定。结果：三批供试品的水分均符合规定。（3）粒度取不同批号的供试品适量（批号：20050801、20050802、20050803），照中华人民共和国药典2005年版一部附录B第二法测定，不能通过一号筛与能通过五号筛的总和，不得过15，应符合规定。结果：三批供试品的粒度均符合规定。（4）溶化性取不同批号

30、的供试品各1袋（批号：20050801、20050802、20050803），加热水200ml，搅拌5分钟，立即观察，混悬性颗粒剂应全能混悬均匀。结果：三批供试品的溶化性均符合规定。（5）微生物限度根据中华人民共和国药典2005年版一部附录XIII C微生物限度检查法，我们对*的微生物限度检查方法进行了方法学验证，结果表明，*颗粒可以按照常规方法检查。在上述方法验证的基础上对三批样品进行了微生物限度检查。结果：三批供试品的微生物限度均符合药典规定。（6）重金属检查取本品约1g，置已炽灼至恒重的坩埚中，精密称定，缓缓炽灼至完全炭化，放冷至室温，加硫酸1ml使湿润，低温加热至硫酸除尽后，加硝酸0.

31、5ml，蒸干，至氧化氮蒸汽除尽后，放冷，在500600炽灼使完全炭化。按中华人民共和国药典2005年版附录E第二法检验。结果：三批供试品含重金属均小于10µg/g，故暂不列入质量标准草案检查项下。（7）砷盐 取本品约1g，缓缓炽灼至完全炭化，在500600炽灼至完全灰化，放冷，加盐酸5ml与水23ml，按中华人民共和国药典2005年版附录F第一法检验。结果：三批供试品含砷盐量均小于2µg/g，故暂不列入质量标准草案检查项下。15.4.6 含量测定原*片质量标准中没有含量测定项，为了更加有效地控制产品质量，我们拟增加含量测定。丹参是方中的君药，丹参中的丹酚酸B是治疗冠心病的主

32、要成分，故我们建立了“*颗粒”中丹酚酸B的高效液相色谱含量测定方法。照高效液相色谱法中华人民共和国药典2005年版一部附录 D测定。色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇乙腈水甲酸（42：5：52：1）为流动相；检测波长为287nm。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备 取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加75甲醇制成每1ml含0.14mg的溶液，即得。供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品内容物，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75甲醇50ml，称定重量，超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用75甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔

33、滤膜（0.45µm）滤过，取续滤液即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每袋含丹参以丹酚酸B（C36H30O16）计，不得少于12.0mg。方法学考察：1、实验仪器与材料：岛津LC-10ATvp溶剂输送泵，SPD-10Avp紫外检测器。HW-2000色谱工作站（南京千谱软件有限公司）。色谱柱：Lichrospher5-C18 （250mm×4.6mm，5µm）天平：METTLER TOLEDO AG135丹酚酸B对照品：中国药品生物制品检定所提供（批号：111562-200403）乙腈（色谱纯）：山东

34、禹王实业有限公司禹城化工厂（批号：2005071007）样品：自制2、色谱条件的确定对丹酚酸B的75甲醇溶液进行紫外扫描，发现其在287nm处有最大吸收，可选择该波长为样品测定检测波长。通过查阅相关文献材料及试验筛选，最终确定的色谱条件如下：色谱柱：Lichrospher5-C18（250mm×4.6mm，5µm）检测波长：287nm 流动相：甲醇乙腈水甲酸（42：5：52：1）流速：1.0ml/min 柱温：室温在上述条件下，丹酚酸B和样品中其他组分色谱峰达到基线分离，为使定量分析准确，在系统适应性试验中规定理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2000。同时取不含丹参的阴性供

35、试品进样，结果表明，阴性供试品在丹酚酸B色谱峰相应位置无色谱峰出现。对照品、样品及阴性供试品的色谱图分别见图15-1、15-2、15-3。图15-1 丹酚酸B对照品色谱图图15-1对照品色谱图图15-2样品色谱图图15-3 阴性供试品色谱图3、提取条件的选择提取方法、提取溶剂和提取时间是影响丹酚酸B提取的主要因素，参考相关文献资料，并结合丹酚酸B的理化性质，我们拟对样品中丹酚酸B的提取条件进行选择。3.1提取方法的考察 超声和加热回流是丹酚酸B常用的两种提取方法，现对两种提取方法进行比较：超声：取重量差异项下的本品内容物，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75甲醇50ml，称定

36、重量，超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用75甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，用微孔滤膜（0.45µm）滤过，取续滤液10µl注入高效液相色谱仪，测定其含量。结果见表15-8。加热回流：取重量差异项下的本品内容物，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75甲醇50ml，称定重量，加热回流40分钟，放冷，再称定重量，用75甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，用微孔滤膜（0.45µm）滤过，取续滤液10µl注入高效液相色谱仪，测定其含量。结果见表15-7。表15-7 不同提取方法的比较提取方法 超声 加热回流丹酚酸B含量（mg/g） 3.02 3.

37、03以上结果表明，超声提取的效果与加热回流提取的效果基本相差不大，但在实际操作中，超声提取要简单方便，综合考虑，我们拟选用超声提取。3.2提取溶剂的考察 文献资料显示，丹酚酸B能溶于水和不同浓度的甲醇，而水和甲醇是提取丹酚酸B常用的溶剂，故对两种溶剂提取进行比较。取重量差异项下的本品内容物，研细，取约2g，共四份，分别精密称定，置具塞锥形瓶中，依次精密加入水、75甲醇、甲醇各50ml，称定重量，分别超声处理40分钟，放冷，再称定重量，依次用水、75甲醇、甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，用微孔滤膜（0.45µm）滤过，分别取续滤液10µl注入高效液相色谱仪，测定其含量。结果见

38、表15-8。表15-8 不同提取溶剂的比较提取溶剂水75甲醇甲醇丹酚酸B含量（mg/g）0.493.020.75以上结果表明，用75以上的甲醇提取时，其提取效率最好，能够达到充分提取*颗粒中丹酚酸B的目的，故我们拟选择用75的甲醇作为提取溶剂。3.3 提取时间的考察在确定了提取方法和提取溶剂后，我们又对超声时间进行了相应的考察。取重量差异项下的本品内容物，研细，取约2g，共三份，分别精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入75甲醇50ml，称定重量，分别超声处理30、40、50分钟，放冷，再称定重量，依次用75甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，用微孔滤膜（0.45µm）滤过，分别取续滤液

39、10µl注入高效液相色谱仪，测定其含量。结果见表15-9。表15-9 不同提取时间的比较（超声提取）超声时间304050丹酚酸B含量（mg/g）2.863.023.04试验结果表明，当超声时间低于40分钟，丹酚酸B的含量未能达到最大值，当时间超过40分钟后，其含量几乎没有增加，综合考虑，我们选择超声时间为40分钟。根据以上考察结果，确定供试品溶液的制备方法为：取重量差异项下的本品内容物，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75甲醇50ml，称定重量，超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用75甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜（0.45µm）滤过，取续滤液即得

40、。4、线性关系考察精密称取丹酚酸B对照品13.6mg，用75甲醇溶解并稀释至5ml量瓶中，摇匀，作为对照品储备液（2.72mg/ml）；分别吸取储备液稀释制成浓度为34µg/ml， 68µg/ml，136µg/ml，170µg/ml，340µg/ml，680µg/ml的丹酚酸B系列标准溶液。按上述色谱条件，分别进样10µl，记录色谱图，量取峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。结果见表15-10。表15-10 线性关系考察结果序号标准品浓度（µg/ml）进样体积（µl）进样量（&#

41、181;g）峰面积134100.34679847268100.6813758743136101.3629475364170101.7040264195340103.4081138866680106.8016277952以上数据，以峰面积（A）为纵坐标，进样量（W）为横坐标进行线性回归，回归方程如下：回归方程：A = 2.429×106 W - 2.103×105相关系数：r = 0.9999结果表明：在34.0µg/ml680µg/ml范围内，丹酚酸B的峰面积与进样量有良好的线性关系（见图15-4）。图15-4 丹酚酸B线性关系图5、仪器精密度试验取丹酚

42、酸B对照品溶液（每1ml含丹酚酸B0.136mg），分别进样5次，每次10µl，记录峰面积值，结果见表15-11。表15-11 精密度试验结果序号12345平均值RSD(%)丹酚酸B对照品峰面积2952574294884529628122938901294728229500830.29结果表明：仪器精密度良好。6、稳定性试验取同一样品适量（批号：20050801），按供试品溶液的制备方法制备，室温放置，分别在0、2、4、8、12小时取样分析，计算峰面积RSD%值。结果见表15-12。表15-12 稳定性试验结果序号0h2h4h8h12h平均值RSD(%)峰面积2855298284227428346272886123286843728573520.72结果表明：供试品的75%