食品检验检疫学5动物性食品中致病微生物和寄生虫的检验检疫实用教案

1、动物性食品中微生物污染的可能途径主要有：动物性食品中微生物污染的可能途径主要有：食品原料本身的污染；食品原料本身的污染；动物养殖环境动物养殖环境(hunjng)中的微生物对食品原料中的微生物对食品原料的污染；的污染；屠宰过程中的污染；屠宰过程中的污染；深加工动物食品可能受到加工车间、加工设备深加工动物食品可能受到加工车间、加工设备表面残存微生物污染；表面残存微生物污染；食品从加工出厂、贮存、运输、销售过程中可食品从加工出厂、贮存、运输、销售过程中可以受到相应环境以受到相应环境(hunjng)中微生物的污染；中微生物的污染；在家庭、宾馆等厨房中生熟食品的交叉污染。在家庭、宾馆等厨房中生熟食品的交

2、叉污染。第一节第一节 动物性食品中菌落总数动物性食品中菌落总数(zngsh)(zngsh)与大肠菌群的检验与大肠菌群的检验第1页/共125页第一页，共125页。食品微生物检测所涉及食品微生物检测所涉及(shj)的的类群类群第2页/共125页第二页，共125页。 微生物检测微生物检测(jin c)程序程序 样品的采集 注意： 1 所用接触(jich)样品的用具经过灭菌 2 取样要均匀、特殊样品要控制温度 3 样品采好后要贴上标签（注明：样品名称、来源、数量、采样人、地点及时间）样品的微生物检验样品的微生物检验注意：注意：1 采好的样品送检采好的样品送检不要超过不要超过3小时小时2 检完的样品的存

3、检完的样品的存放放(cnfng)时间时间 3 报告的填写报告的填写 第3页/共125页第三页，共125页。 微生物对食品的污染问题是我国乃微生物对食品的污染问题是我国乃至全世界食品安全中最突出至全世界食品安全中最突出(t ch)的的问题，我国为此数次颁布食品微生物检问题，我国为此数次颁布食品微生物检验标准。按照食品安全国家标准要求，验标准。按照食品安全国家标准要求，菌落总数和大肠菌群是食品企业出厂时菌落总数和大肠菌群是食品企业出厂时必检的微生物指标。必检的微生物指标。第4页/共125页第四页，共125页。菌落总数是指一定培养条件下（如需氧状况、培菌落总数是指一定培养条件下（如需氧状况、培养基成

4、分、养基成分、PH、培养温度和时间等）每克（每毫升）、培养温度和时间等）每克（每毫升）食品样品中所生长出来的细菌菌落总数。食品样品中所生长出来的细菌菌落总数。检测菌落总数，可以判定食品被细菌污染程度，检测菌落总数，可以判定食品被细菌污染程度，反映出食品的新鲜程度和卫生状况。如果某食品的反映出食品的新鲜程度和卫生状况。如果某食品的菌落总数严重超标，说明其产品的卫生状况达不到菌落总数严重超标，说明其产品的卫生状况达不到基本基本(jbn)的卫生要求，食品将加速腐败变质，失的卫生要求，食品将加速腐败变质，失去食用价值。去食用价值。第5页/共125页第五页，共125页。 菌落总数菌落总数(zngsh)的

5、检验程序的检验程序第6页/共125页第六页，共125页。第7页/共125页第七页，共125页。 注意事项：注意事项：1 操作要在无菌的状态下进行。操作要在无菌的状态下进行。2 操作时间越短越好。操作时间越短越好。3 样品不同选择的稀释倍数不同。样品不同选择的稀释倍数不同。4 培养基冷却培养基冷却(lngqu)温度不宜过高或过低。温度不宜过高或过低。第8页/共125页第八页，共125页。大肠菌群系指一群能发酵乳大肠菌群系指一群能发酵乳糖、需氧和兼性厌氧的革兰糖、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性氏阴性(ynxng)无芽孢杆菌，包括肠无芽孢杆菌，包括肠杆菌科的大肠埃希氏菌属、柠檬杆菌属、肠杆菌杆菌科的大肠

6、埃希氏菌属、柠檬杆菌属、肠杆菌属和克雷伯菌属细菌。属和克雷伯菌属细菌。检测大肠菌群，可以判定食品被与粪便污染有关检测大肠菌群，可以判定食品被与粪便污染有关的细菌污染的程度。如果某食品的大肠菌群超标，的细菌污染的程度。如果某食品的大肠菌群超标，则可以推测其产品中存在着肠道致病菌污染的可能则可以推测其产品中存在着肠道致病菌污染的可能性，食用之可能导致食物中毒或罹患流行病。性，食用之可能导致食物中毒或罹患流行病。第9页/共125页第九页，共125页。第二节第二节 动物性食品中致病性细菌的检验动物性食品中致病性细菌的检验沙门氏菌沙门氏菌致病性大肠杆菌致病性大肠杆菌(gnjn)(gnjn)副溶血弧菌副溶

7、血弧菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌溶血性链球菌溶血性链球菌产单核细胞李斯特菌产单核细胞李斯特菌肉毒梭菌肉毒梭菌结核分枝杆菌结核分枝杆菌(gnjn)(gnjn)空肠弯曲杆菌空肠弯曲杆菌(gnjn)(gnjn)炭疽杆菌炭疽杆菌(gnjn)(gnjn)产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌蜡样芽孢杆菌蜡样芽孢杆菌(gnjn)(gnjn)变形杆菌变形杆菌(gnjn)(gnjn)第10页/共125页第十页，共125页。食品食品(shpn)中沙门氏中沙门氏菌检验菌检验第11页/共125页第十一页，共125页。一、实验目的一、实验目的1、掌握食品中沙门氏菌的检验原理、掌握食品中沙门氏菌的检验原理(yunl)。2、掌握食品

8、中沙门氏菌的检验方法。、掌握食品中沙门氏菌的检验方法。第12页/共125页第十二页，共125页。 二、实验原理二、实验原理(yunl)（一）沙门氏菌属简介（一）沙门氏菌属简介 沙门氏菌属是一群符合肠杆菌科定义并与其血清学相关的革兰氏阴性沙门氏菌属是一群符合肠杆菌科定义并与其血清学相关的革兰氏阴性(ynxng)(ynxng)、需氧性、无芽孢杆菌。本菌属种类繁多，抗原结构复杂，现已发、需氧性、无芽孢杆菌。本菌属种类繁多，抗原结构复杂，现已发现现20002000多个血清型，我国已发现血清型近多个血清型，我国已发现血清型近200200个。个。第13页/共125页第十三页，共125页。沙门氏菌沙门氏菌(

9、sh mn sh jn)属属生物学特性生物学特性形态特征：形态特征： 革兰氏阴性，大小为革兰氏阴性，大小为1-31-30.4-0.9m0.4-0.9m的两的两端 钝 圆 的 短 杆 菌端 钝 圆 的 短 杆 菌(gnjn)(gnjn)，无芽孢，无芽孢，一般无荚膜，除鸡沙一般无荚膜，除鸡沙门氏菌和雏沙门氏菌门氏菌和雏沙门氏菌以外，都有周身鞭毛，以外，都有周身鞭毛，运动力强。运动力强。第14页/共125页第十四页，共125页。培养特性：培养特性：沙门氏菌需氧或兼性厌氧，沙门氏菌需氧或兼性厌氧，1042都可都可生长，最适生长温度生长，最适生长温度(wnd)为为37，最，最适适pH为为6.87.8。营

10、养琼脂平板上：营养琼脂平板上：3537培养培养18-24h，其菌落大小一般为其菌落大小一般为23mm，光滑、湿润、，光滑、湿润、无色、半透明、边缘整齐。无色、半透明、边缘整齐。血平板上：中等大小的灰白色菌落。血平板上：中等大小的灰白色菌落。第15页/共125页第十五页，共125页。沙门氏菌沙门氏菌(sh mn sh jn)属的抗原属的抗原 菌体抗原菌体抗原(kngyun)(kngyun)（O O抗原抗原(kngyun)(kngyun)） 表面抗原表面抗原(kngyun)(kngyun)（K K抗原抗原(kngyun)(kngyun)）：）：ViVi抗原抗原(kngyun)(kngyun)和和M

11、 M抗原抗原(kngyun)(kngyun) 鞭毛抗原鞭毛抗原(kngyun)(kngyun)（H H抗原抗原(kngyun)(kngyun)） 纤毛抗原纤毛抗原(kngyun)(kngyun)第16页/共125页第十六页，共125页。 沙门氏菌沙门氏菌(sh mn sh jn)属属致病性致病性 沙门氏菌胃肠炎是由除伤寒沙门氏菌外任何一型沙门氏菌而沙门氏菌胃肠炎是由除伤寒沙门氏菌外任何一型沙门氏菌而所致，潜伏期一般所致，潜伏期一般6-726-72小时，主要症状为恶心、呕吐、腹绞小时，主要症状为恶心、呕吐、腹绞痛、腹泻、发热寒颤头痛。病程一般痛、腹泻、发热寒颤头痛。病程一般1 12 2天或更长。

12、感染剂天或更长。感染剂量为量为15152020个菌，死亡率达个菌，死亡率达1 14%4%。最易感群体是年幼儿童、。最易感群体是年幼儿童、虚弱者、年长老人、免疫缺陷者等。虚弱者、年长老人、免疫缺陷者等。 污染源主要是人和家畜的粪便，沙门氏菌常存在于动物中，污染源主要是人和家畜的粪便，沙门氏菌常存在于动物中，特别是禽类和猪。在许多环境中也有存在。从水，土壤，昆特别是禽类和猪。在许多环境中也有存在。从水，土壤，昆虫中，从工厂和厨房设施的表面和动物粪便中已发现该类细虫中，从工厂和厨房设施的表面和动物粪便中已发现该类细菌。它们可以存在于多类食品中，包括生肉，禽，奶制品和菌。它们可以存在于多类食品中，包括

13、生肉，禽，奶制品和蛋，鱼，虾和田鸡腿，酵母，椰子，酱油和沙拉调料，蛋糕蛋，鱼，虾和田鸡腿，酵母，椰子，酱油和沙拉调料，蛋糕粉，奶油粉，奶油(niyu)(niyu)夹心甜点，顶端配料，干明胶，花生露，夹心甜点，顶端配料，干明胶，花生露，橙汁，可可和巧克力。橙汁，可可和巧克力。第17页/共125页第十七页，共125页。 （二）检验（二）检验(jinyn)1.1.前增菌前增菌: : 第一步使食物样品在含有第一步使食物样品在含有(hn yu)(hn yu)营养的非选择性培养营养的非选择性培养基中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。基中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。2.

14、2.选择性增菌选择性增菌: : 在含选择性抑制剂的促生长培养基中间，样品进一步增在含选择性抑制剂的促生长培养基中间，样品进一步增菌的一个步骤。此培养基允许沙门氏菌持续增殖，同时阻止大多数其菌的一个步骤。此培养基允许沙门氏菌持续增殖，同时阻止大多数其他细菌的增殖。他细菌的增殖。3.3.选择性平板分离选择性平板分离: : 这一步采用固体选择性培养基，抑制非沙门氏菌的这一步采用固体选择性培养基，抑制非沙门氏菌的生长，提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的识别。生长，提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的识别。4.4.生物化学筛选生物化学筛选: : 排除大多数非沙门氏菌。也提供了沙门氏菌培养物菌排除大多数非沙

15、门氏菌。也提供了沙门氏菌培养物菌属的初步鉴定。属的初步鉴定。5.5.血清学技术提供了培养物菌种的鉴定。血清学技术提供了培养物菌种的鉴定。第18页/共125页第十八页，共125页。 三、实验仪器和材料三、实验仪器和材料1冰箱：冰箱：04。2恒温恒温(hngwn)培养箱：培养箱：361，42。3显微镜：显微镜：10100。4高压灭菌器。高压灭菌器。5 超净工作台。超净工作台。6 均质器或灭菌乳钵。均质器或灭菌乳钵。7 架盘药物天平：架盘药物天平：0g500g,精确度精确度0.5g。8 灭菌广口瓶：灭菌广口瓶：500mL。9 灭菌锥形瓶：灭菌锥形瓶：500mL、250mL。10 灭菌吸管：灭菌吸管：

16、10mL（具（具0.1 mL刻度）。刻度）。11 天菌培养皿：天菌培养皿：90mm。12 灭菌小试管：内径灭菌小试管：内径3mm50mm。13 灭菌毛细管。灭菌毛细管。第19页/共125页第十九页，共125页。 四、培养基和试剂四、培养基和试剂1缓冲蛋白胨水缓冲蛋白胨水(BP)2氯化镁孔雀绿氯化镁孔雀绿(MM)增菌液增菌液3四硫酸钠煌绿四硫酸钠煌绿(TTB)增菌液增菌液4亚硒酸盐胱氨酸亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液增菌液5亚硫酸铋琼脂亚硫酸铋琼脂(BS)6DHL琼脂琼脂7HE琼脂：按琼脂：按GB/T 4789.282003中中4.21规定。规定。8TSI琼脂琼脂9蛋白胨水、靛基质蛋白胨水、靛基质

17、(j zh)试剂试剂10 尿素琼脂尿素琼脂(pH7.2)11 氨基酸脱羧酶试验培养基氨基酸脱羧酶试验培养基12 沙门氏菌因子血清：按沙门氏菌因子血清：按26种用于初步分型；种用于初步分型；57种用于进一步分型；种用于进一步分型；163种用于详细分型。种用于详细分型。第20页/共125页第二十页，共125页。五、检验样品五、检验样品1 1 鲜猪肉、鲜牛肉；冻猪肉鲜猪肉、鲜牛肉；冻猪肉2 2 鲜牛奶、鲜鱼鲜牛奶、鲜鱼(xin y)(xin y)；冻鱼；冻鱼3 3 香肠、虾仁香肠、虾仁第21页/共125页第二十一页，共125页。六、沙门氏菌六、沙门氏菌(sh mn sh jn)检验流程检验流程 检样

18、检样 前增菌法前增菌法 直接增菌法直接增菌法 冻肉、蛋品、乳品及其它加工食品冻肉、蛋品、乳品及其它加工食品 鲜肉、鲜蛋、鲜乳及其它未经加工的食品鲜肉、鲜蛋、鲜乳及其它未经加工的食品 25g 25g BP 225mL 25g BP 225mL 25g 灭菌生理盐水灭菌生理盐水25mL 25mL 制成检样均质液制成检样均质液 （36361 1） 一般一般 4 h 4 h，干蛋品，干蛋品 18 1824 h24 h10mL10mLMM(MM(或或TTB)100mL 10mLTTB)100mL 10mLSC 100mL SC 100mL 检样均质液的半量检样均质液的半量MM(MM(或或TTB)100m

19、L TTB)100mL 检样均质液的半量检样均质液的半量SC 100mL SC 100mL 42 18 42 1824 h 24 h （36361 1） 18 1824 h 42 1824 h 42 1824 h 24 h （36361 1） 18 1824 h 24 h BS DHL( BS DHL(或或HEHE、WSWS、SS)SS) （36361 1） 40 4048 h 48 h （36361 1） 18 1824 h 24 h 挑取可疑菌落挑取可疑菌落 TSI TSI（斜面、底层、产气、（斜面、底层、产气、H2SH2S）、蛋白胨水（靛基质）、尿素（）、蛋白胨水（靛基质）、尿素（pH7

20、.2pH7.2）、）、KCNKCN、赖氨酸、赖氨酸 H2S H2S靛基质靛基质 H2S H2S靛基质靛基质 H2S H2S靛基质靛基质 非如左述的非如左述的 尿素尿素KCNKCN赖氨酸赖氨酸 尿素尿素KCNKCN赖氨酸赖氨酸 尿素尿素KCNKCN赖氨酸赖氨酸/ / 各种反应结果各种反应结果 甘露醇、山梨醇甘露醇、山梨醇 ONPGONPG 沙门氏菌血清学实验沙门氏菌血清学实验(shyn)(shyn) 沙门氏菌血清学实验沙门氏菌血清学实验(shyn)(shyn) 非沙门氏菌非沙门氏菌 非非沙门氏菌沙门氏菌 报告报告第22页/共125页第二十二页，共125页。 七、操作步骤七、操作步骤 1 1、前增

21、菌和增菌、前增菌和增菌 冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品均应经过前增菌。以无菌冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品均应经过前增菌。以无菌操作取操作取25g25g（mLmL），加在装有），加在装有225mL225mL缓冲蛋白胨水的缓冲蛋白胨水的500mL500mL广口瓶广口瓶内。固体食品可先应用均质器以内。固体食品可先应用均质器以80008000 10000r/min 10000r/min打碎打碎1min1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用灭菌匙或玻棒研磨使乳化或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用灭菌匙或玻棒研磨使乳化(rhu)(rhu)，于，于363611培养培养4h (4h (干蛋品培养干蛋品培养

22、18h18h24h)24h)，移取，移取10mL10mL，转种于，转种于100mL100mL氯化镁孔雀绿增菌液或四硫酸钠煌绿增菌液内，氯化镁孔雀绿增菌液或四硫酸钠煌绿增菌液内，于于4242培养培养18h18h 24h 24h。同时，另取。同时，另取10mL10mL，转种于，转种于100mL100mL亚硒酸盐亚硒酸盐胱氨酸增菌液内，于胱氨酸增菌液内，于363611培养培养18h18h24h24h。 第23页/共125页第二十三页，共125页。 鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工(ji gng)(ji gng)的食品不必经过前增菌。的食品不必经过前增菌。各取各取25g(2

23、5mL)25g(25mL)加入灭菌生理盐水加入灭菌生理盐水25mL25mL，按前法做成检样匀液；取，按前法做成检样匀液；取25mL25mL，接，接种于种于100mL100mL氯化镁孔雀绿增菌液或四硫磺酸钠煌绿增菌液内，于氯化镁孔雀绿增菌液或四硫磺酸钠煌绿增菌液内，于4242培养培养24h24h；另取另取25mL25mL接种于接种于100mL100mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液内，于亚硒酸盐胱氨酸增菌液内，于363611培养培养18h18h24h24h。第24页/共125页第二十四页，共125页。 2 2、分离、分离 取增菌液取增菌液1 1环，划线接种于一个亚硫酸铋琼脂平板和一个环，划线接种于一个亚硫

24、酸铋琼脂平板和一个DHLDHL琼脂平板琼脂平板( (或或HEHE琼琼脂平板、脂平板、WSWS或或SSSS琼脂平板琼脂平板) )。两种增菌液可同时划线接种在同一个平板上。于。两种增菌液可同时划线接种在同一个平板上。于363611分别培养分别培养(piyng)18h(piyng)18h24h(DHL24h(DHL、HEHE、WSWS、SS)SS)或或40h40h48h(BS)48h(BS)，观察各个平板上生长的菌落。观察各个平板上生长的菌落。 第25页/共125页第二十五页，共125页。沙门氏菌属各群在各种选择性琼脂沙门氏菌属各群在各种选择性琼脂(qingzh)平板上平板上的菌落特征的菌落特征 选

25、择性琼脂平板选择性琼脂平板沙门氏菌沙门氏菌、沙门氏菌沙门氏菌（即亚利桑那菌）（即亚利桑那菌） BSBS琼脂琼脂产硫化氢菌落为黑色带有金属光泽，棕产硫化氢菌落为黑色带有金属光泽，棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株不产生硫化氢，形成或棕色；有些菌株不产生硫化氢，形成灰绿色的菌落，周围培养基不变灰绿色的菌落，周围培养基不变黑色带有金属光泽黑色带有金属光泽 DHLDHL琼脂琼脂无色半透明，产硫化氢菌落中心带黑色无色半透明，产硫化氢菌落中心带黑色或几乎全黑色或几乎全黑色乳糖迟缓阳性或阴性的菌株与亚乳糖迟缓阳性或阴性的菌株与亚属属、相同；乳相同；乳糖阳性

26、的菌株为粉红色，中心带糖阳性的菌株为粉红色，中心带黑色黑色 HEHE琼脂琼脂 WSWS琼脂琼脂蓝绿色或蓝色；多数菌株产硫化氢，菌蓝绿色或蓝色；多数菌株产硫化氢，菌落中心黑色或几乎全黑色落中心黑色或几乎全黑色乳糖阳性的菌株为黄色，中心黑乳糖阳性的菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色；乳糖迟缓阳性色或几乎全黑色；乳糖迟缓阳性或阴性的菌株为蓝绿色或蓝色，或阴性的菌株为蓝绿色或蓝色，中心黑色或几乎全黑色中心黑色或几乎全黑色 SSSS琼脂琼脂无色半透明，产硫化氢菌株，有的菌落无色半透明，产硫化氢菌株，有的菌落中心带黑色，但不如以上培养基明显中心带黑色，但不如以上培养基明显乳糖迟缓阳性或阴性的菌株与亚乳糖迟缓

27、阳性或阴性的菌株与亚属属、相同；乳相同；乳糖阳性的菌株为粉红色，中心黑糖阳性的菌株为粉红色，中心黑色，但中心无黑色形成时与大肠色，但中心无黑色形成时与大肠埃希氏菌不能区别埃希氏菌不能区别第26页/共125页第二十六页，共125页。 3 3、生化试验、生化试验 自选择性琼脂平板上直接挑取数个可疑菌落，分别接自选择性琼脂平板上直接挑取数个可疑菌落，分别接种三糖铁琼脂、蛋白陈水种三糖铁琼脂、蛋白陈水( (供做靛基质供做靛基质(j zh)(j zh)试验试验) )、尿素琼脂尿素琼脂(pH7.2)(pH7.2)、氰化钾、氰化钾(KCN)(KCN)培养基和赖氨酸脱竣酶试培养基和赖氨酸脱竣酶试验培养基及对照

28、培养基各验培养基及对照培养基各1 1管，于管，于363611培养培养18h18h24h24h，必要时可延长至必要时可延长至48h48h，按生化反应初步鉴定表判定结果。按，按生化反应初步鉴定表判定结果。按反应序号分类，沙门氏菌属的结果应属于反应序号分类，沙门氏菌属的结果应属于A1A1、A2A2和和B1B1，其，其他他5 5种反应结果均可以排除。种反应结果均可以排除。 第27页/共125页第二十七页，共125页。 肠杆菌科各属在三糖铁琼脂肠杆菌科各属在三糖铁琼脂(qingzh)内的反内的反应结果应结果 斜面斜面底层底层产气产气硫化氢硫化氢可能的菌属和种可能的菌属和种/ /沙门氏菌属、弗劳地氏柠檬酸

29、沙门氏菌属、弗劳地氏柠檬酸杆菌、变形杆菌属、缓慢爱德杆菌、变形杆菌属、缓慢爱德华氏菌华氏菌/ /沙门氏菌沙门氏菌、弗劳地氏柠檬酸、弗劳地氏柠檬酸杆菌、普通变形杆菌杆菌、普通变形杆菌沙门氏菌属、大肠埃希氏菌、沙门氏菌属、大肠埃希氏菌、蜂窝哈夫尼亚菌、摩根氏菌，蜂窝哈夫尼亚菌、摩根氏菌，普罗菲登斯菌属普罗菲登斯菌属伤寒沙门氏菌，鸡沙门氏菌、伤寒沙门氏菌，鸡沙门氏菌、志贺氏菌属、大肠埃希氏菌、志贺氏菌属、大肠埃希氏菌、蜂窝哈夫尼亚菌、摩根氏菌，蜂窝哈夫尼亚菌、摩根氏菌，普罗菲登斯菌属普罗菲登斯菌属/ /大肠埃希氏菌、肠杆菌属、克大肠埃希氏菌、肠杆菌属、克雷伯氏菌属、沙雷氏菌属、弗雷伯氏菌属、沙雷氏菌

30、属、弗劳地氏柠檬酸杆菌劳地氏柠檬酸杆菌注：阳性；阴性；注：阳性；阴性；/ / 多数阳性，少数阴性多数阳性，少数阴性第28页/共125页第二十八页，共125页。反应序号反应序号硫化氢硫化氢（H H2 2S S）靛基质靛基质pH7.2pH7.2尿素尿素氰化钾氰化钾（KCNKCN）赖氨酸脱羧酶赖氨酸脱羧酶判定结果判定结果A1A1沙门氏菌属沙门氏菌属A2A2沙门氏菌属（少见）缓慢爱沙门氏菌属（少见）缓慢爱德华氏菌德华氏菌A3A3弗劳地氏柠檬酸杆菌、奇异弗劳地氏柠檬酸杆菌、奇异变形杆菌变形杆菌A4A4普通变形杆菌普通变形杆菌B1B1沙门氏菌属、大肠埃希氏沙门氏菌属、大肠埃希氏菌、甲型副伤寒沙门氏菌菌、甲

31、型副伤寒沙门氏菌大肠埃希氏菌、志贺氏菌属大肠埃希氏菌、志贺氏菌属B2B2大肠埃希氏菌大肠埃希氏菌大肠埃希氏菌、志贺氏菌属大肠埃希氏菌、志贺氏菌属B3B3/ /克雷伯氏菌族各属阴沟肠杆克雷伯氏菌族各属阴沟肠杆菌、弗劳地氏柠檬酸杆菌菌、弗劳地氏柠檬酸杆菌B4B4/ /摩根氏菌，普罗菲登斯菌属摩根氏菌，普罗菲登斯菌属注注1 1：三糖铁琼脂底层均产酸，不产气者可排除；斜面产酸与产气与否均不限。：三糖铁琼脂底层均产酸，不产气者可排除；斜面产酸与产气与否均不限。注注2 2：KCNKCN和赖氨酸可选作其中一项，但不能判定结果时，仍需补做另一项。和赖氨酸可选作其中一项，但不能判定结果时，仍需补做另一项。注注3

32、 3：表示阳性；表示阴性；：表示阳性；表示阴性；/ /表示多数阳性，少数阴性。表示多数阳性，少数阴性。第29页/共125页第二十九页，共125页。沙门氏菌检验沙门氏菌检验(jinyn)几点注意几点注意 冷冻样品解冻需在冷冻样品解冻需在4545以下，有自动调温器自控的水浴锅内以下，有自动调温器自控的水浴锅内不断搅拌进行不断搅拌进行15min15min或在或在2-82-8，1818小时内软化小时内软化(runhu)(runhu)。 为保证检验的准确性，必须在选择性培养基上挑取足够数量的为保证检验的准确性，必须在选择性培养基上挑取足够数量的菌落进行生化和血清学鉴定。菌落进行生化和血清学鉴定。 进行生

33、化反应时，应以纯培养物进行试验，如出现血清学阳性，进行生化反应时，应以纯培养物进行试验，如出现血清学阳性，而生化反应特征不符合时，应对接种物进行纯化，用纯化后的而生化反应特征不符合时，应对接种物进行纯化，用纯化后的培养物重新进行生化试验。培养物重新进行生化试验。 测试中应同时接种阳性对照菌株。测试中应同时接种阳性对照菌株。第30页/共125页第三十页，共125页。金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(p to qi jn)细菌细菌学及其检验学及其检验 第31页/共125页第三十一页，共125页。1 生物学性状生物学性状(xngzhung) 自然分布：自然分布： 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(qijn)

34、分布广泛，存在于环境、空气、水、牛奶、食品、污分布广泛，存在于环境、空气、水、牛奶、食品、污水及人和动物等。与人关系密切，构成人体皮肤、鼻腔、咽部等处的正常细菌群，对人有致水及人和动物等。与人关系密切，构成人体皮肤、鼻腔、咽部等处的正常细菌群，对人有致病性，是临床医学中常见的化脓性球菌病性，是临床医学中常见的化脓性球菌(qijn)之一，也是污染食品造成食物中毒的细菌之一，也是污染食品造成食物中毒的细菌之一。之一。第32页/共125页第三十二页，共125页。 形态与染色：形态与染色： 典型典型(dinxng)金黄色葡萄球菌呈球形，直径金黄色葡萄球菌呈球形，直径0.51.0微米，较非致病性葡萄球菌

35、略小，各个菌体的大小及排列较整微米，较非致病性葡萄球菌略小，各个菌体的大小及排列较整齐。细菌繁殖时呈多个平面的不规则分裂，堆积成葡萄串状排列。齐。细菌繁殖时呈多个平面的不规则分裂，堆积成葡萄串状排列。在脓汁或液体培养基中生长，常呈双球或短链排列，易误为链球在脓汁或液体培养基中生长，常呈双球或短链排列，易误为链球菌。金黄色葡萄球菌无鞭毛，故不能自由移动，一般不形成荚膜，菌。金黄色葡萄球菌无鞭毛，故不能自由移动，一般不形成荚膜，不产生芽孢。革兰氏染色为阳性，衰老、死亡或被白细胞吞噬的不产生芽孢。革兰氏染色为阳性，衰老、死亡或被白细胞吞噬的菌体，常转呈革兰氏阴性，故须注意。菌体，常转呈革兰氏阴性，故

36、须注意。第33页/共125页第三十三页，共125页。 培养特性：培养特性： 本菌为需氧或兼性厌氧，对营养要求不高，在普通培养基上生长良好，本菌为需氧或兼性厌氧，对营养要求不高，在普通培养基上生长良好，最适宜最适宜(shy)生长温度为生长温度为37，最适宜，最适宜(shy)pH为为7.4，耐盐性强，在含，耐盐性强，在含10-15%氯氯化钠培养基中能生长，利用这一特性，可有利于金葡菌的检出。化钠培养基中能生长，利用这一特性，可有利于金葡菌的检出。第34页/共125页第三十四页，共125页。 在普通琼脂培养基上形成圆形、凸起、表面光滑、湿润、在普通琼脂培养基上形成圆形、凸起、表面光滑、湿润、边缘整齐

37、、不透明的菌落。直径一般为边缘整齐、不透明的菌落。直径一般为1-2mm，密集生，密集生长的菌落较小，稀散或生长较久着，长的菌落较小，稀散或生长较久着， 直径可达直径可达4-5mm。 在 普 通 肉 汤 培 养 基 中 生 长 迅 速 ， 一 般 呈 均 匀 混 浊在 普 通 肉 汤 培 养 基 中 生 长 迅 速 ， 一 般 呈 均 匀 混 浊(hnzhu)生长，如培养基中的糖类被分解后，产生较生长，如培养基中的糖类被分解后，产生较多的酸性物质即可发生酸性沉淀。培养时间较长，多的酸性物质即可发生酸性沉淀。培养时间较长，2-3日后常有菌膜形成而出现粘性沉淀。日后常有菌膜形成而出现粘性沉淀。 第3

38、5页/共125页第三十五页，共125页。 在血琼脂平板上形成较大菌落，有色素产生，由于本菌产生的色素为脂溶在血琼脂平板上形成较大菌落，有色素产生，由于本菌产生的色素为脂溶性不溶于水，故色素只局限于菌落内，不透入培养基中。该菌产生溶血毒性不溶于水，故色素只局限于菌落内，不透入培养基中。该菌产生溶血毒素，使菌落周围红细胞溶解而形成透明的溶血环，非致病性葡萄球菌素，使菌落周围红细胞溶解而形成透明的溶血环，非致病性葡萄球菌(p to qi jn)无此现象。无此现象。 第36页/共125页第三十六页，共125页。在Bairdparker琼脂平板上，菌落呈圆形凸起(t q)，表面光滑湿润，直径23mm，灰

39、黑色至黑色，有光泽，常有浅色的边缘，周围绕以不透明圈，其外常有一清晰带，菌落有黄油样粘稠感。从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落，其黑色常较典型菌落浅些，且外观可能较粗糙，质地较干燥。第37页/共125页第三十七页，共125页。抵抗力：抵抗力： 葡萄球菌抵抗力较强，在干燥的脓汁中能存活数月，有些菌株需加热葡萄球菌抵抗力较强，在干燥的脓汁中能存活数月，有些菌株需加热(ji r)80 3060分钟才被杀死。在分钟才被杀死。在5%石炭酸中石炭酸中15分钟死亡。分钟死亡。第38页/共125页第三十八页，共125页。2 致病性致病性 金黄色葡萄球菌为潜在性的病原菌，它所产金黄色葡萄球菌为潜在性的病原菌

40、，它所产生的多种胞外蛋白质对人和动物组织有害，生的多种胞外蛋白质对人和动物组织有害，其中一类是各种酶类，如脂酶、蛋白酶、青其中一类是各种酶类，如脂酶、蛋白酶、青霉素酶、凝固酶和耐热霉素酶、凝固酶和耐热(nai r)DNA酶等，另酶等，另一类为毒素，它们是溶血素（一类为毒素，它们是溶血素（、 ）、）、溶白细胞素、肠毒素（溶白细胞素、肠毒素（A 、B、 C、 D、E、TSS）及化脓性毒素等。）及化脓性毒素等。 第39页/共125页第三十九页，共125页。2 致病性致病性 虽然人体对金葡菌感染具有一定的抵抗力，但当机体抵抗力下降或皮肤粘膜受损时易被感染，可引起(ynq)局部或全身炎症，侵入血流可引起

41、(ynq)败血症及脓毒血症。金葡菌污染食品之后可能产生大量的肠毒素，肠毒素是该菌引起(ynq)食物中毒的主要因素之一。第40页/共125页第四十页，共125页。 金葡菌肠毒素具有极强的稳定性，能抵抗许多蛋白金葡菌肠毒素具有极强的稳定性，能抵抗许多蛋白酶的消化，只有在小于酶的消化，只有在小于pH2的条件下蛋白酶才能使其的条件下蛋白酶才能使其失去活性。这一点可以解释，为什么摄入肠毒素在胃失去活性。这一点可以解释，为什么摄入肠毒素在胃中有蛋白酶时，仍然引起食物中毒，因为胃液的酸度中有蛋白酶时，仍然引起食物中毒，因为胃液的酸度大于大于pH2，所以不能消化肠毒素。肠毒素还相当耐热，所以不能消化肠毒素。肠

42、毒素还相当耐热，经煮沸经煮沸30分钟后仍不能完全破坏分钟后仍不能完全破坏(phui)其毒性。其毒性。当含肠毒素为当含肠毒素为20/ml 的牛肉汤（的牛肉汤（pH6.2），在），在121 加热需要加热需要37分钟以上，才能灭活毒素。分钟以上，才能灭活毒素。 第41页/共125页第四十一页，共125页。 金葡菌肠毒素的产生因菌株不同而有所差异，有资料显示，金葡菌肠毒素的产生因菌株不同而有所差异，有资料显示，食品中存在的金葡菌几乎都产生肠毒素，以食品中存在的金葡菌几乎都产生肠毒素，以SEA型为最多。型为最多。以往认为凝固酶阳性的金葡菌能产生肠毒素，但不是都产以往认为凝固酶阳性的金葡菌能产生肠毒素，但

43、不是都产生肠毒素。后有实验证实，有些产生肠毒素的金葡菌株产生肠毒素。后有实验证实，有些产生肠毒素的金葡菌株产生耐热生耐热DNA酶却不产生凝固酶，即一些凝固酶阴性菌株也酶却不产生凝固酶，即一些凝固酶阴性菌株也产生肠毒素，要鉴定是否是产毒株，需同时进行产生肠毒素，要鉴定是否是产毒株，需同时进行(jnxng)凝固酶和耐热凝固酶和耐热DNA酶测定试验。而耐热酶测定试验。而耐热DNA酶和肠毒素酶和肠毒素的耐热力相近似，由此可见耐热的耐热力相近似，由此可见耐热DNA酶的产生与肠毒素的酶的产生与肠毒素的关系较凝固酶更为平行。所以常用耐热关系较凝固酶更为平行。所以常用耐热DNA 酶试验代替酶试验代替肠毒素测定

44、。自肠毒素测定。自1982年起有些国家就提出进口方便食品中年起有些国家就提出进口方便食品中不得检出含有耐热不得检出含有耐热DNA酶的金葡菌。酶的金葡菌。第42页/共125页第四十二页，共125页。结核结核(jih)分枝杆菌分枝杆菌第43页/共125页第四十三页，共125页。分枝杆菌属分枝杆菌属Mycobacterium一类直或微弯曲的杆菌，有分枝生长趋势，可呈丝一类直或微弯曲的杆菌，有分枝生长趋势，可呈丝状或菌丝样生长。细胞壁脂质含量高（分枝菌酸），状或菌丝样生长。细胞壁脂质含量高（分枝菌酸），耐酸，抗酸染色阳性。对氧和营养要求高，生长慢。耐酸，抗酸染色阳性。对氧和营养要求高，生长慢。不产生毒

45、素和侵袭酶类，引起慢性疾病。不产生毒素和侵袭酶类，引起慢性疾病。又称抗酸杆菌又称抗酸杆菌(acid-fast bacillus)-不易着色，可抵抗盐酸酒精的脱色作用不易着色，可抵抗盐酸酒精的脱色作用分类属放线菌科，本属有分类属放线菌科，本属有80多种，可分三类：多种，可分三类： 结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌和麻风结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌和麻风(mfng)分枝杆菌。分枝杆菌。 细菌的细菌的DNA G+Cmol%为为6270第44页/共125页第四十四页，共125页。 临床标本(biobn) 抗酸染色+ L-J分离培养 +7天 +7天 缓生菌 速生菌 PNB + - - T2H + + - 非

46、典型分枝杆菌 人型结核分枝杆菌 牛型分枝杆菌 光反应性试验 光产色菌 暗产色菌 不产色菌 分枝杆菌的鉴定程序 第45页/共125页第四十五页，共125页。结核结核(jih)分枝杆菌分枝杆菌一、分类一、分类结核分枝杆菌（结核分枝杆菌（MycobacteriumTuberculosis，TB）复合群：）复合群： 人结核分枝杆菌人结核分枝杆菌(M.tuberculosis) 牛分枝杆菌牛分枝杆菌(M.bovis) 非洲非洲(fi zhu)分枝杆菌分枝杆菌 田鼠分枝杆菌田鼠分枝杆菌第46页/共125页第四十六页，共125页。二、细菌特性二、细菌特性形态染色形态染色(rns)(rns) TB TB菌细长

47、略弯曲，有时可见分枝，呈单、成堆或成束排列，菌细长略弯曲，有时可见分枝，呈单、成堆或成束排列，无鞭毛、无芽胞，有荚膜。可出现多形性，在陈旧的病灶无鞭毛、无芽胞，有荚膜。可出现多形性，在陈旧的病灶和培养物中，形态常不典型，可呈颗粒状，串球状，短棒和培养物中，形态常不典型，可呈颗粒状，串球状，短棒状，长丝形等。状，长丝形等。TBTB菌革兰染色菌革兰染色(rns)(rns)阳性。阳性。 荧光染料金胺荧光染料金胺O O染色染色(rns)(rns)，在荧光下菌体呈橘黄色。，在荧光下菌体呈橘黄色。 萋尼氏抗酸性染色萋尼氏抗酸性染色(rns)(rns)法染色法染色(rns)(rns)，菌体染成红，菌体染成红

48、色。色。 第47页/共125页第四十七页，共125页。第48页/共125页第四十八页，共125页。第49页/共125页第四十九页，共125页。第50页/共125页第五十页，共125页。第51页/共125页第五十一页，共125页。第52页/共125页第五十二页，共125页。第53页/共125页第五十三页，共125页。培养特性培养特性 专性需氧菌，专性需氧菌，3%5%的的CO2能促进生长能促进生长(shngzhng)。最适。最适ph 6.56.8 ，最适温度为，最适温度为37，低于，低于30难生长难生长(shngzhng)，营养要求高，在，营养要求高，在含有蛋黄、马钤薯、甘油和天门冬素等的固体培含

49、有蛋黄、马钤薯、甘油和天门冬素等的固体培养基上才能养基上才能生长生长(shngzhng)，且生长，且生长(shngzhng)缓缓慢。慢。 固体培养基固体培养基-典型菌落为干燥、坚硬、表面呈典型菌落为干燥、坚硬、表面呈颗粒状、颗粒状、 乳酪色或淡黄色，形似菜花样。乳酪色或淡黄色，形似菜花样。 液体培养基液体培养基-生长生长(shngzhng)较快呈粗糙较快呈粗糙皱纹状菌膜生长皱纹状菌膜生长(shngzhng)，有毒株可，有毒株可 呈索状生长呈索状生长(shngzhng)（吐温干扰）。（吐温干扰）。第54页/共125页第五十四页，共125页。菜花样(huyng)菌落第55页/共125页第五十五页，

50、共125页。生化反应生化反应 生化不活泼。不发酵糖类，多数菌株触酶阳生化不活泼。不发酵糖类，多数菌株触酶阳性，热触酶性，热触酶阴性，非结核分枝杆菌正好相反。阴性，非结核分枝杆菌正好相反。结核分枝杆菌烟酸和硝酸盐试验阳性，耐噻吩结核分枝杆菌烟酸和硝酸盐试验阳性，耐噻吩2羧酸羧酸肼肼(T2H)，牛型则相反。有毒株中性红试验阳，牛型则相反。有毒株中性红试验阳性。性。变异性变异性 TB菌易发生形态、菌落、最适生长菌易发生形态、菌落、最适生长(shngzhng)温度、毒力和耐药性的变异。温度、毒力和耐药性的变异。如卡介苗、如卡介苗、Much颗粒和多重耐药菌株出现等。颗粒和多重耐药菌株出现等。第56页/共

51、125页第五十六页，共125页。 抵抗力抵抗力 TB TB菌细胞壁含大量脂类，抵抗力较强菌细胞壁含大量脂类，抵抗力较强 干痰中存活干痰中存活6-86-8个月，粘附个月，粘附(zhn f)(zhn f)尘埃上保持尘埃上保持传染性传染性8-108-10天。天。 3%HCL 3%HCL或或4%NaOH4%NaOH、6%H2SO46%H2SO4溶液中能耐受溶液中能耐受3030分钟分钟 常以酸碱中和处理严重污染的检材，杀死杂菌和常以酸碱中和处理严重污染的检材，杀死杂菌和消化粘稠物质，提高检出率消化粘稠物质，提高检出率 对一定浓度的孔雀绿有抵抗力。对一定浓度的孔雀绿有抵抗力。 对湿热、紫外线、酒精的抵抗力

52、弱。对湿热、紫外线、酒精的抵抗力弱。 ( (如在液体中加热如在液体中加热60306030分钟，直射日光下分钟，直射日光下2 23 3小小时，时，75%75%酒精内数分钟即死亡。酒精内数分钟即死亡。) )第57页/共125页第五十七页，共125页。三、临床意义三、临床意义TBTB菌引起结核病。对人类致病的有人菌引起结核病。对人类致病的有人(yu rn)(yu rn)结核分枝杆菌、牛型结核杆菌和非洲结核分枝杆菌、牛型结核杆菌和非洲分枝杆菌，人型结核杆菌感染引起的发病率最高。成为全球性重大公共卫生问题。分枝杆菌，人型结核杆菌感染引起的发病率最高。成为全球性重大公共卫生问题。所致疾病所致疾病TBTB菌

53、的致病作用可能是细菌在细胞内增殖引起炎症反应，以菌的致病作用可能是细菌在细胞内增殖引起炎症反应，以及诱导机体产生免疫反应性损伤有关。通过呼吸道、消化道及诱导机体产生免疫反应性损伤有关。通过呼吸道、消化道和破损的皮肤粘膜进入机体，侵犯多种组织器官，引起相应和破损的皮肤粘膜进入机体，侵犯多种组织器官，引起相应器官，其中以肺结核最常见。可分原发感染和继发感染。器官，其中以肺结核最常见。可分原发感染和继发感染。第58页/共125页第五十八页，共125页。免疫性TB菌的感染率很高，发病率却较低，这表明人体感染结核杆菌可获得一定的抗结核免疫力，这种免疫称为有菌免疫或传染性免疫。TB菌的免疫原rRNA和变应

54、原结核菌素诱发机体产生(chnshng)由T淋巴细胞介导细胞免疫反应。第59页/共125页第五十九页，共125页。 致病物质致病物质1.1.脂质脂质占菌体干重的脂质脂质占菌体干重的202040%40%，占胞壁干重的，占胞壁干重的60%60%。磷脂：能刺激单核细胞增生，并可抑制蛋白酶的分解磷脂：能刺激单核细胞增生，并可抑制蛋白酶的分解作用作用(zuyng)(zuyng)，使病灶形成干酷样坏死。，使病灶形成干酷样坏死。 索状因子：是分枝菌酸与海藻糖的复合物，具有破索状因子：是分枝菌酸与海藻糖的复合物，具有破坏细胞线粒体膜，毒害微粒体酶类，抑制中性粒细胞游坏细胞线粒体膜，毒害微粒体酶类，抑制中性粒细

55、胞游走和吞噬作用走和吞噬作用(zuyng)(zuyng)，引起慢性肉牙肿。具有该物质，引起慢性肉牙肿。具有该物质的的TBTB菌毒株，在液体培养基中能紧密粘成索状。菌毒株，在液体培养基中能紧密粘成索状。 蜡质蜡质D D：是一种肽糖脂与分枝菌酸复合物，能引起：是一种肽糖脂与分枝菌酸复合物，能引起迟发型变态反应，并具有佐剂作用迟发型变态反应，并具有佐剂作用(zuyng)(zuyng)。 硫酸脑苷脂：硫酸脑苷脂：TBTB菌毒株胞壁中含有，能抑制吞噬细菌毒株胞壁中含有，能抑制吞噬细胞中的吞噬体与溶酶体融合，使结核杆菌在细胞内存活。胞中的吞噬体与溶酶体融合，使结核杆菌在细胞内存活。第60页/共125页第六

56、十页，共125页。2.2.荚膜主要为多糖，少量脂质和蛋白荚膜主要为多糖，少量脂质和蛋白质。质。 粘附和入侵分解物质提供营粘附和入侵分解物质提供营养防止有害物质入侵养防止有害物质入侵3.3.蛋白质蛋白质TBTB菌菌体内都含有数种蛋白菌菌体内都含有数种蛋白质，其中重要的蛋白质是结核菌素。结质，其中重要的蛋白质是结核菌素。结核茵素与蜡质核茵素与蜡质D D结合，能引起较强的迟结合，能引起较强的迟发型变态反应发型变态反应(bin ti fn yng)(bin ti fn yng)。其他蛋白质可引起机体产生相应的抗体，其他蛋白质可引起机体产生相应的抗体，但无保护作用。但无保护作用。第61页/共125页第六

57、十一页，共125页。 四、微生物学检验四、微生物学检验临床标本临床标本涂片检查分离培养核酸检测抗体检测涂片检查分离培养核酸检测抗体检测直接直接(zhji)(zhji)涂片集菌涂片处理标本或无污染标本涂片集菌涂片处理标本或无污染标本染色液体培养基固体培养基动物试验染色液体培养基固体培养基动物试验（罗氏或米氏）（罗氏或米氏）抗酸抗酸.金胺金胺O. O. 3737， 涂片镜检涂片镜检仪器培养仪器培养 7 7天生长天生长7 7天生长天生长快速生长菌慢生长菌菌种鉴定快速生长菌慢生长菌菌种鉴定抗酸染色菌落特点抗酸染色菌落特点鉴定试验药敏试验鉴定试验药敏试验第62页/共125页第六十二页，共125页。 标本

58、采集标本采集 感染部位不同，取不同的标本，宜用能抑制污染菌的方法感染部位不同，取不同的标本，宜用能抑制污染菌的方法 常见标本：痰、尿、胸腹水等常见标本：痰、尿、胸腹水等 检查方法检查方法 1.显微镜检查显微镜检查 1）直接涂片：用萋尼氏法染色）直接涂片：用萋尼氏法染色(rns)，若镜检找到抗酸性杆菌，通常应报告：，若镜检找到抗酸性杆菌，通常应报告：“查到抗酸性杆菌查到抗酸性杆菌”，需进一步分离培养鉴定。，需进一步分离培养鉴定。 2）浓缩集菌涂片：如标本中菌量少，杂菌和杂质多时，用离心沉淀法将菌浓缩聚）浓缩集菌涂片：如标本中菌量少，杂菌和杂质多时，用离心沉淀法将菌浓缩聚集，再取沉淀物涂片作抗酸染

59、色集，再取沉淀物涂片作抗酸染色(rns)检查检查 第63页/共125页第六十三页，共125页。 分离培养分离培养 TB TB菌接种前处理液化和处理杂菌菌接种前处理液化和处理杂菌 4%NaOH 4%NaOH、6%H2SO46%H2SO4、胰酶、胰酶 15- 15-20min20min培养基选择培养基选择罗氏培养基罗氏培养基 鉴别培养基鉴别培养基(PNB(PNB、T2HT2H、NAP)NAP)仪器培养仪器培养Bacte460Bacte460、BacT/ALERT3D BacT/ALERT3D 液体培养基液体培养基 培养时间培养时间长长 一般一般6-86-8周周 鉴定鉴定1.1.染色性染色性; 2.

60、; 2.菌落特征菌落特征; 3.; 3.生长速度生长速度; ; 4.4.色素产生色素产生; 5.; 5.生化生化(shn hu)(shn hu)试验试验 第64页/共125页第六十四页，共125页。 鉴别鉴别(jinbi)试验：试验： NAP(p-nitro-acetylamino-hydroxy-propiophenome)抑制试验抑制试验 结核分枝杆菌结核分枝杆菌 NAP- 非结核分枝杆菌非结核分枝杆菌 NAP+ 第65页/共125页第六十五页，共125页。 免疫学检测免疫学检测 1.结核菌素试验：结核菌素试验：OT或或PPD 迟发型超敏反应。迟发型超敏反应。 2.全血干扰素测定全血干扰素