A群轮状病毒检测操作规程

1、杭州余杭邦尔医院检验科临检室项目SoP文件文件编号：YHBEJYK-LJS-44标准操作规程A群轮状病毒检测编制人：王渊生效日期：2018年1月1日审核人：钟剑版本号/修订号：1/3批准人：张延亮发布部门：检验科共3页1 检验目的轮状病毒是在全世界范围内造成婴幼儿急性肠胃炎的主要因素。在我国，每年春秋冬季均有一个婴幼儿腹泻的发病高峰，病原学研究证实，这些病例的 40%-60%是由轮状病毒引起的。通过检测粪便标本中A群轮状病毒抗原，适用于临床婴幼儿腹泻患者A群轮状病毒感染的辅助诊断。2 方法原理以抗A群轮状病毒多克隆抗体包被硝酸纤维素膜、以胶体金标记的小鼠 抗A群轮状病毒VP6单克隆抗体为结合物

2、，利用免疫层析原理来检测粪便标 本中的轮状病毒抗原。（胶体金法）将试纸条插入用稀释液稀释好的标本中后，胶体金结合物与标本一起移 动，当移动至硝酸纤维膜上的抗轮状病毒多抗时，如果标本中含有轮状病毒， 则胶体金-轮状病毒结合物会与抗轮状病毒多抗结合，5-10分钟出现红色的检测线。多余胶体金结合物继续移动，将与包被在膜上的羊抗鼠IgG抗体结合，形成另外一条红色的对照线。3 标本采集与处理3.1在症状出现以后尽快收集粪便标本，无特殊要求。3.2样本应该当天立即检测，如果不立即检测可在28C冰箱保存1-2天。长时 间保存需要于-20C冷冻，使用前彻底解冻并回复到室温再检测。4. 分析系统4. 1分析试剂

3、：北京万泰生物药业股份有限公司提供的 配套的A群轮状病毒 诊断试剂盒，规格为10test盒，2-30C干燥贮存，有效期18个月；在效期内 使用试剂。5. 操作方法如果在冰箱保存试剂盒，在使用前将试剂盒回复至室温。5.1旋开滴管，取出采便勺，收取粪便1勺（100mg）,放入有样本稀释液（生 理盐水0.5ml）的滴管中，旋紧。5.2振荡混匀，折断滴管上的盖帽5.3垂直而缓慢滴加2-3滴混匀后的样本（80ul）至测试卡加样中心。5.4 5-10分钟内判读结果，不可超过10分钟。6 结果判定质量控制：出现对照线试验有效，反之，试验无效，应重新检测。6.1阳性：出现两条红色线。6.2阴性：只出现一条对照

4、线。7.结果解释7. 1对于检测结果阳性的标本，临床医生须结合临床信息和试验结果综合评 价。7. 2由于反应原理的限制，对于阴性结果不排出 A群轮状病毒感染可能。8 注意事项8.1本试验仅能检测粪便标本中A群轮状病毒抗原，不能检测其他轮状病毒; 仅能定性检测，不能定量检测；8.2仅供体外诊断用；8.3开启后要放置在干燥的环境中贮存，尽量在15周内用完；8.4不同批号的组分不要混用；8.5操作标本时请遵照GLP的要求进行。8.6不要使用放置时间过长，长菌或反复冻融的样本，以避免这些非特异性的 反应。8.7采样过量，过稠，导致稀释后的样本堵塞检测卡，请取上清液检测。8.8在规定的时间内，即使检测线

5、的色带非常弱也判为阳性。8.9试剂盒，在使用前将试剂盒回复至室温。8.10测试卡在打开包装20分钟内使用，过长会影响结果。8.110分钟后的结果无临床意义。8.12样本视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。9 安全防护9. 1对任何一份标本（包括质控品、标准品及检测试剂等）都应视其为具有 传染性，操作人员在工作时应戴乳胶手套、穿工作服。9. 2 一旦发生标本容器划破手或身体、液体溅进眼睛等粘膜处，应立即用大 量的水冲洗，同时向上级医师或科领导报告，必要时施以丙种球蛋白预防。10. 常见的误差源10. 1试剂原因：试剂过期等。10. 2标本原因：标本处理、收集不符合要求等。10. 3人为原因：结果填写错误等。11. 引用文件北京万泰生物药业股份有限公司提供的配套的A群轮状病毒诊断试剂盒说明 书。【操作规程修改