src-家族酪氨酸激酶在炎性因子诱导的人晶状体上皮细胞生物学行为变化中的作用-眼科学

1、缩略语表缩略词英文全称中文全称ascanterior subcapsular cataract前囊下型白内障a-smaa-smooth muscle actin(x 平滑肌肌动蛋口cx43connxin43连接蛋白43col ivcollagen type iv四型胶原4,6二眯基2苯基卩引dapi4'6，-diamino-2-phcnylindolc;卩朵dmsodimethyl sulfoxide二甲基亚飒e-cadherinepithelium-cadherin上皮性钙粘附蛋口ecmextracellular matrix细胞外基质egfepidermal growth fact

2、or表皮生长因子emtep it he lia 1- to- mes e nc hyma 1上皮细胞向间充质细transitioncxtracc llu lar s igna l-rc gulatcd胞转化erkkinase细胞外信号调节激酶fgffibrob last growth fee tor成纤维细胞生长因子fitcfluorescein isothiacyanate异硫氧酸荧光素fnfibronectin纤维连接蛋口hlecshuman lens epithelial cells人晶状体上皮细胞h2o2hydrogen peroxide过氧化氢igfinsulin- like gro

3、wth factor胰岛素样生长因子il-lainterleukin 1 alpha口细胞介素lail-lpinterleukin 1 beta白细胞介素1卩il-6interleukin 6口细胞介素6lecslens epithelial cells晶状体上皮细胞mapkmito ge n- activatedprote inkinase促分裂原活化蛋白激 酶mmpmatrix inctalloprotc inascs基质金屈蛋口酶pbsphosphate buffered solution磷酸盐缓冲液pcnaproliferating cell nuclear antigen细胞增殖核抗

4、原pcoposterior capsular opacification后囊混浊pdgfplatelet-derived growth fee tor血小板源性牛长因子pi3kphosphatidylinositol(-3)kinase磷脂酰肌醇（3）激酶ppi4-amino-5 (4-methylphenyl)-7-(t-butyl)pyrazolo3,4-d-pyrimidinesrc 家族酪氨酸激酶 抑制剂rosreactive oxygen species活性氧簇rt-pcrreverse transcription polymerase chain reacation逆转录聚合酶链反

5、应sds-pagesodium dodecyl sulfonate-polyacrylate gel electrophoresis十二烷基硫酸钠聚丙 烯酰胺凝胶电泳sfkssre-family tyrosine kinasessrc家族酪氨酸激酶statsignal transducers and activator of transcription信号转导及转录活化 因子tgf 卩transforming growth factor-卩转化生长因子卩tnf-atumor necrosis factor alpha肿瘤坏死因子trance-rtumor necrosis factor rel

6、ated activation肿瘤坏死因子相关因induced cytokine-receptor子受体uvultraviolet紫外线wbwestern blot蛋白质印迹zo-1zonula occludens-1闭锁小带蛋白src 家族酪氨酸激酶在炎性因子诱导的人晶状体上皮细胞生物学行为变化中的作用硕士研究生:杜敏娟导师：周健教授第四军医大学西京医院眼科，全军眼科研究所，西安710032中文摘要研究背景白内障摘除联合人工晶状体植入术后有约20%的病人发生晶状体后囊 膜混浊即后发性白内障(pco)o术后残余的晶状体上皮细胞增殖，迁移和 纤维化生是pco形成的主要原因。术后房水屏障的破坏以及

7、大量炎细胞和 炎性因子进入前房参与了 pco的形成，有研究表明il-1, il-6和tnf-a参 与了 pco形成的部分细胞生物学行为改变山2。walked】等在体外培养的鸡 胚晶状体囊膜pco模型中发现抑制sc家族酪氨酸激酶(sfks)活性可抑 制晶状体上皮细胞(lecs)从前囊膜向后囊移行，从而抑制pco的发生。 我们的前期研究发现sfks的特异性抑制剂pp1能阻止晶状体上皮细胞的凋 亡、加强上皮细胞与晶状体纤维的连接、保持晶状体上皮细胞的极性，有利 于晶状体上皮细胞在外界刺激的影响下保持其正常的上皮细胞功能从而保 持晶状体的透明。基于以上研究结果，我们推测sfks参与了炎性因子诱导 的人

8、晶状体上皮细胞生物学行为改变，本研究将利用炎性因子刺激体外培养 的人晶状体上皮细胞，研究sre的激活参与pco形成的细胞机制。冃的探讨src家族酪氨酸激酶异常激活在炎性因子诱导的晶状体上皮细胞行 为改变中的作用。方法体外培养人晶状体上皮细胞hle b-3,当细胞达到刺激要求后加入含 0.5%胎牛血清的培养液作为空白对照组，处理组分别加入10 ng/ml的 il-la> il1卩、il6、tnf-a和这四种炎性因子的混合物，pp1干预组是在加 入各炎性因子z前用10 |1m pp1预孵育细胞,30 min后吸弃含pp1的培养液， 再加入含相应炎性因子的培养液。用细胞活力检测实验和细胞计数法

9、检测 lecs的增殖变化，细胞划痕实验和transwcll实验检测lecs迁移能力的变 化，细胞免疫荧光染色和wes tern-blotting实验分别定性检测和半定量分析 lecs增殖核抗原pcna,上皮细胞向间充质细胞转分化(emt)的标志分 子 a-sma> fn、collagen iv和 zo-1 的变化，以及 src 活性、mmp-9 的 表达变化。结 果1) il-la, il-ip, il-6和tnfa刺激晶状体上皮细胞src界常激活，src家 族酪氨酸激酶特异性抑制剂pp1能抑制这种变化。2) il-la, il-lp, il-6, tnf-a和四种炎性因子混合物使晶状体

10、上皮细胞活 力增加，促进细胞增殖。pp1能有效抑制这种变化，抑制细胞增殖。3) il-ip, tnf-a和四种炎性因子混合物促进晶状体上皮细胞移行，pp1能 有效抑制这些炎性因子诱导的晶状体上皮细胞移行。4) il-ip和tnfa促进晶状体上皮细胞mmp-9高表达，pp1抑制这些炎性 因子诱导的mmp-9的表达。5) il-ip tnf-a使晶状体上皮细胞a-sma, fn, collagen iv高表达，降 低zo-1的表达，促进晶状体上皮细胞转分化。pp1能阻止il-lp和tnf-a 诱导的品状体上皮细胞转分化。结论src家族酪氨酸激酶的异常激活参与炎性因子illa, il1卩，il6和

11、tnf-a诱导的晶状体上皮细胞增殖，src通过激活mmp-9途径参与il-lp和 tnf-a诱导的晶状体上皮细胞移行，src的异常激活还参与il-ip和tnf-a 诱导的晶状体上皮细胞转分化。抑制src的异常激活能有效阻断炎性因子对 晶状体上皮细胞的影响，抑制pco的形成。关键词：src家族酪氨酸激酶；抑制剂；炎性细胞因子；晶状体；上皮细胞; 细胞增殖；细胞移行；上皮细胞向间充质细胞转分化；白内障the role of src-family tyrosine kinase on thecellular behavior changes of human lens epithelialcells

12、 induced by inflammatory cytokinescandidate for master: du min-juansupervisor: zhou jiandepartment of ophthalmology, xijing hospitalfourth military medical university,xfan 710032, chinaabstractbackgroundposterior capsule opacification (pco) develops in 20% to 40% of patients after cataract surgery r

13、esulting from proliferation, migration and epithelial- to mesenchymal transition (emt) of residual lens epithelial cells (lecs). it has been reported that il-la, il-lp, il-6 and tnf-a involved in pco-related changes1,21. the src- femily tyros in kinases play roles on regulating some kinds of cell pr

14、oliferation and differentiation4,5 suppression of src activity by ppi, the specific inhibitor of src, prevented migration of lens epithelial cells to the center part of posterior capsule in a chicken embryonic lens capsule culture model.these evidences suggested that src may involve in the pathogene

15、sis of pco. however, it is still unknown whether src participates in proliferation, migration, and emt of lecs induced by inflammatory cytokines.aimto detect the activation of src and its roles in cell prolife rat ion, migration and emt of lecs induced by inflammatory cytokines.methodshuman lens epi

16、thelial cells hle b-3, were used and treated with interleukin 1 alpha (il-la), interleukin 1 beta (il-1p), interleukin 6 (il-6), and tumor necrosis fector alpha (tnf-a) at the dose of 10 ngml for 24 hours with or without pretreatment of 10(1m/l ppi, the specific inhibitor of src, for 30 min. for cel

17、l proliferation, cell viability assay and cell count assay were used. wound-scratch assay and trans we 11 monolayer periwability assay were employed to evaluate cell migration induced by the inflammatory cytokines- to investigate emt, the molecular markers of a-sma, fibronectin (fn), collagen iv and

18、 zo-1 were determined by immuno fluoresce nee staining and western blot analysis. for further explanation of cell migration, the expression of mmp-9 was determined by western blot analysis.resultsproliferation was increased in response to all four inflammatory cytokines. the amounts of migrated cell

19、s on both scratched areas and trans membranes were significantly increased in the groups of il-lp and tnf-a, conparcd with the contro 1 group, respectively (p<0.01)，but there were no significant differences between the groups of il-la, il-6 and the control grop (p>0.05) the protein expressions

20、 of mmp-9, a-sma, fn, collagen iv were increased after exposure to il-lp and tnf-a, and the expression and location of zo-1 in hle b-3 were decreased and disappeared partially activity of src was also increased by these four inflammatory cytokines. with pre treatment of ppi, the cell proliferation,

21、migration, emt related protein changes and mmp9 expression induced by theses inflammatory cytokines were prevented significantly (p<0.05).conclusionsinflammatory cytokines, il-la, il13, il6，and tnfa may stimulate lens epithelial cell proliferation il-1 卩 and tnf-a induce cell migration and epithe

22、lial-to- lwsenchymal transition. activation of src may participate in the signaling pathways of these changes in lecs induced by these inflammatory cytokines. inhibiting src activation can prevent lecs proliferation, migration, emt and finally may prevent formation of pco.key words： src-femily tyros

23、ine kinases; inhibitor; inflammatory cytokines ; lens; epithelial cells; cell proliferation; cell migration; epithelial-to- mesenchymal transition; cataract刖白内障是目前世界范围内第一位致盲眼病。目前手术摘除混浊的晶状体 和植入人工品状体(iol)仍是治疗白内障和恢复视力唯一的有效方法，但 是术后约20%的病人在术后两年发生后囊膜混浊导致视力再次丧失即pcoo 术后残留的晶状体上皮细胞增殖，沿着囊膜迁移到后囊膜中央以及发牛上皮 细胞向间充质

24、细胞转分化是pco发生的主要原因。研发抑制pco形成的药物的关键是针对pco发病机制。白内障术后血 房水屏障的破坏以及大量炎性因子的释放是pco的始动因素，为控制术后眼 内炎症反应，白内障术后常规使用24周糖皮质激素和或非丝体类抗炎药, 体外研究表明抗炎药物的使用能有效影响晶状体上皮细胞发牛类pco的细 胞生物学行为，口能在兔的pco动物模型中有效降低pco的形成。src家族酪氨酸激酶(src-family tyrosine kinases, sfks)是一种非受体 蛋口酪氨酸激酶，它是炎症反应、氧化应激、渗透压应激、紫外线辐射等 多种应激反应信号转导通路中的关键因子刃。我们前期研究发现sfk

25、s的特 异性抑制剂pp1能阻止晶状体上皮细胞的凋亡、保持晶状体上皮细胞的极 性、 加强上皮细胞与晶状体纤维的连接、增强晶状体上皮细胞中na+-k+ atp 酶 al催化亚基的表达和上皮细胞间缝隙连接蛋白cx43的细胞间交通功能、阻 止 氧化损伤引起晶状体上皮细胞的c#+内流，这些改变有利于晶状体上皮细 胞 在外界刺激的影响下保持其正常的上皮细胞功能，维持内环境的稳定， 从而 保持晶状体的透明。在前期研究的基础上，我们推测src的异常激活可能参 与炎症诱导的晶状体上皮细胞的一些变化，参与pco的形成。文献回顾、白内障1概述晶状体是一个无血管和神经分布、透明的器官，由前囊膜下单层晶状体 上皮细胞及

26、在赤道部由上皮细胞不断分化成的晶状体纤维细胞构成。晶状体 上皮细胞是晶状体遭受外界刺激的首发部位，也是首要的防御部位，其功能 的正常、结构的完整对保持晶状体的透明性和屈光力至关重要。晶状体的结 构、成分、细胞代谢异常等引起病理性改变，均会导致品状体混浊，即形成 白内障。白内障是世界第一位致肓眼病，占肓人总数的48%。目前有效的治疗措 施是手术摘除混浊的品状体，联合人工晶状体植入恢复视力。但是由于手术 后会残留一部分晶状体上皮细胞，这些细胞被异常激活造成难以避免的术后 并发症一pco,使患者视力再次下降，甚至需要再次手术治疗。目前防治pco 主要集中在人工晶状体的设计上，试图通过晶状体光学区边缘

27、的设计机械性 阻断晶状体上皮细胞向后囊膜中央移行。冃前还没有有效的防治pco的临 床用药，在影响晶状体上皮细胞牛物学行为改变的信号通路上寻找关键分 子，有望找到新的药物治疗靶点。2后发性白内障后发性白内障是指白内障囊外摘除术后，或外伤性白内障部分皮质吸收 后所形成的晶状体后囊膜混浊。囊外白内障摘除术后残留的晶状体上皮细胞 可增生，形成elsching珠样小体，这些上皮细胞可发生肌成纤维细胞样分化 及收缩，使晶状体后囊膜发牛皱褶、混浊，导致视力再次下降。白内障囊外 摘除术后pco的发生率约为20%,儿童期白内障术后发生pco机率更高 且与患儿手术时的年龄密切相关，年龄越小发生率越高。口内障术后残

28、留的晶状体上皮细胞发生增殖、迁移和纤维化生是形成 pco的主要病理过程。可能发生增殖的细胞是具有有丝分裂活性、位于赤道 部的上皮细胞。残留的晶状体上皮细胞沿着囊袋内表面增生、迁移到后囊膜 中央引起后囊膜混浊，或从前囊切开边缘向人工晶状体光学区前表面扩展， 导致视力下降。参与pco的病理过程包括术后炎症反应、iol异物反应和品 状体上皮细胞参与的创伤愈合反应。参与这一过程的分子有房水屏障破坏后 进入前房的因子如生长因子、细胞活素类（包括炎性因子）和胞外基质的改 变，最终导致晶状体上皮细胞的生物学行为改变（图1） fl，1o图1白内障术后创伤愈合反应最终导致pco（wormstone i m, w

29、ang l, liu c s. posterior capsule opacification.未改动）2.1细胞增殖1995年li等研究发现晶状体上皮细胞凋亡是多种非先天性白内障共同 的细胞学基础，但参与凋亡的分子生物学机制尚不全清楚。不仅凋亡参与 了白内障的发生，细胞增殖也可出现在此过程中，尤其在前极性片内障和 pco中扮演重要角色cjuergen kampmeiel3等在体外培养的人晶状体上皮细 胞sra01/04的实验屮发现，外源性的bfgf、egf、igf-1和tgf-p2都能 诱导细胞增殖。白内障术后pco的发生过程中，由于炎症和创伤，房水中炎 细胞（单核细胞、巨噬细胞）、炎性因子

30、（il-k il-6和tnf-a等）以及生 长因子（fgf、pdgf、efg、igf、tgf ）的变化可能参与晶状体上皮细胞 的增殖。另外，手术创伤造成的高度分化的晶状体纤维细胞和晶状体上皮细 胞的分离有可能启动上皮细胞的增殖i。凋亡与增殖在白内障形成中同时出 现这并不矛盾，由于刺激因素的存在，正常的凋亡与增殖平衡被打破造成细 胞牛长失衡，在糖性白内障的发牛过程中，细胞增殖和凋亡都参与白内障的 形成。在细胞增殖调节信号通路中，牛长因子与其受体结合激活信号通路，主 要通过下游分子pi3k/akt, src/stat3/c-myc以及ras通路发挥促增殖作用, 而且有报道pi3k也是src的下游分

31、子。转录因子c-jun> c-fos和c-myc被认 为在调节细胞增殖和存活中发挥重要作用，其中cjun和c-fos是核转录因子ap-1的组成元件。最初的研究表明收到ap1信号可宜接刺激细胞进入s 期 或激活促进细胞生长周期的基因间接发挥促增殖作用，之后的研究提出 促有丝分裂ap-1的组件，特别是与cjim相连，完成促生长功能可能是通 过抑制肿 瘤抑制基因，如p53, p21和p16（图2） vi。还有报道cjun可能是 永久激活jnk后促凋亡效应的重要介质，但是il1和tnfa激活jnk却不引 起细胞凋亡卩忙图2ap-1蛋白在细胞生长周期调节中的作用(joehum w, passegu

32、e e, wagner e f. ap1 in mouse development and tumorigenesis 未 改动）2.2上皮细胞向间充质细胞转分化上皮细胞向间充质细胞转分化(epithelial to mesenchymal transition, emt)是一个复杂的过程，在此过程中上皮细胞丢失极性和特有的细胞连接 结构，重塑细胞骨架，转化成具有间充质细胞形态和功能特点的细胞，甚至 在某些情况下可合成细胞外基质(ecm)的水解酶，促进细胞的运动和侵袭 活性，使之具有穿过基底膜游走至间质或远端其他组织的能力，这是emt 的 共性。根据emt在生理和病理状态下的不同作用可分为三型

33、，一型：在 组织胚胎发育过程中参与胚胎发育和器官形成；二型：参与创伤修复和组 织器官纤维化；三型：与癌症进展和转移有关逆。白内障手术创伤和外伤刺激作用于晶状体启动的是二型emt。细胞的 表型转化在急性病变和慢性病变的早期是其对致病因子的反应性变化，通 过促 进增殖或分泌ecm等进行创伤愈合和组织修复，对机体有益。而在慢 性损伤和炎症反应中，由于损伤持续存在，机体emt失控以及分泌及降解 ecm的能力失衡甚至产生一些因子，导致组织和器官纤维化。emt的发生 主要是细胞受到生物学效应信号分子刺激后，例如生长因子、细胞活素类、 胞外基质改变、缺氧以及自由基等，首先紧密连接如z0-1消失，其次是 粘附

34、连接如 e-cadherin和桥粒连接消失，细胞解离，细胞形态改变呈纺锤状，运动能力 增加呈离散分布。这种形态学改变伴随着e-cadherin蛋口表达的下降和多种 间充质细胞特异标志分子的增加，如波形蛋白vimentin.纤维粘连蛋白 fibronectin (fn)> 肌动蛋白 a-smooth muscle actin (asma)、纤维胶原 (collagen) i型、iii型和iv型以及分解这些胶原的基质金屈酶mmps (mmp-2. mmp-3和mmp9)(图3)叫 而最终证明emt发生后提高了 细胞的迁移能力，这也是创伤愈合必不可少的环节。 phenotype & f

35、unctional markers of emt spindle shape - fibroblastoid like phenotype increased migratory capacity increased resistance to anoikis/apoptosis stability of phenotype after removal oftriggering stimulic emt triggering signals ecm components (through integrins) growth factors & cytokines: hgf,fgf$,t

36、gfp wnt proteins, notch hypoxiaaestablished markers of emt proteins that should decrease in emt e-cadherin cytokeratins- zo-1 occludin desmoplakin proteins that should increase during emt fsp-1, ddr2. hsp47 ecm proteins: vimentin, fibronectin, nodherina-sma matrix metalloproteinases: wimp2, mmp3, mm

37、p-9 integrin ovf6 proteins and transcription factors that translocate into nuclei snai1 slug twist p catenin nf-kb smad 2/3图3检测emt推荐使用的主要标志分子(cannito s, novo e, di bonzo l v, et al. epithelia 1-mesenchymal transition: from molecular mechanisms, redox regulation to implications in human health and di

38、sease 未改 动)激发emt的胞外信号分子与胞内酪氨酸受体结合，启动emt信号通 路罔(图4) 18o %ng19等人认为snaik snai2和twist1调节阻滞上 皮表型转录子，jun和fos作为间充质细胞表型激活转录子都参与到emt过 程中，最终促进了细胞的移行行为。这些调控细胞间粘附连接的emt触发 信号通路包括tgfp-smad信号通路，可调节细胞增殖、凋亡、移行和转分 化；ras-raf( rafi )-mekl (map2k1-erk1/2cmapk1, mapk3) - snai2,snai2作为e-cadherin的抑制因子下调它的表达；pi3k-akt-gsk-3p-

39、snail 和卩-catenin, snai1和p-catenin可以促进emt的发展，pi3k-akt还可以 激活rho gtpases与第一条通路协同作用促进emt； src磷酸化黏着斑激酶 fak, fak反过来激活mapk和肌球蛋口轻链激酶(mylk),从而破坏 e-cadherin细胞连接使细胞获得间充质细胞表型和迁移能力；整合素激酶 ilk-fak下调e-cadherin表达。这几条通路不是独立作用的，而是相互交联 作用，互相影响。其中对tgfp-smad-emt信号通路研究的最多最详细，研究发现tgf卩破坏正常晶状体上皮细胞使其丢失上皮表型包括e-cadherin> pax

40、6、zo1、cx43和crystallin,而使成纤维/肌成纤维细胞表型表达增加 包括 asma、collagen k collagen iii> fn 和 a5pl 整联蛋白20 (a5piintegrin)oecmhgffgf. pdgfi ritegrinsrtk«1(smurfj)adheqos lioct»onstiqk lunctionscytoskeletoncsnail§>图4调控细胞粘附连接的emt触发信号通路z间的交互作用(cannito s, novo e, di bonzo l v, et al. epithelial-mese

41、nchymal transition: from molecular mechanisms, redox regulation to implications in human health and disease 未改 动)2.3细胞移行晶状体上皮细胞发牛主动迁移实际上是细胞由上皮细胞向纤维细胞转 化的一种表现，因为正常上皮细胞并没有迁移能力，只有在发生上皮向间质 转分化emt时，细胞内部出现a-sma,细胞才可能迁移和收缩。所以细胞 移行在pco形成过程中的作用不能与晶状体上皮细胞发生emt独立开来， 细胞移行是伴随着emt发生或者说emt的发生促进了细胞移行。白内障术 后晶状体囊残留的晶

42、状体上皮细胞沿着囊袋内表面增生迁移，到达后囊膜中 央使后囊膜皱缩，或者从前部晶状体囊切开口边缘向人工晶状体视区前表面 扩展，造成视功能再次丧失。基质金属蛋白酶(mmps)是一类结构与功能同源的锌离子依赖性蛋白水解酶，是细胞外基质ecm降解的主要介质，其活性受基质金属蛋白酶组 织抑制因子timps特异性调节。mmps和timps与皮质性口内障、囊膜下 型白内障和pco的关系密切，先就pco着重介绍。kawashima211等用免疫 组化法检测出人眼在白内障囊外摘出及人工晶体植入术后18个月内品状体 后囊膜,ecm 和 lecs 均有 mmps 包括 mmp-1 > mmp-2. mmp-3

43、 > mmp-9, timps包括timp-1和timp-2的表达，此后这些表达则消失。口内障术后 早期两者变化同步升高，仅以炎性损伤为主的血房水屏障破坏和纤维蛋口 反应出现在眼内组织；在白内障术后后期眼内出现ecm的沉积和晶状体囊 膜纤维化是由于这两者非同步变化，出现比例失衡。ecm在晶状体后囊膜 上积聚不但可作为晶状体上皮细胞生长增殖的支架，而且为lecs增殖、转 化以及向后囊膜迁移和黏附提供了适宜的内环境。广泛表达在眼部的mmps家族成员主要是明胶酶，分布在房水和玻璃体 中，尤其是mmp-2和mmp-9 （分别为明胶酶a和明胶酶b） 22o wonnstone 等研究证实机械性损伤

44、和白内障手术都可诱导mmp-2和mmp-9的表达 增加，但是这种升高是一过性的，而tgf卩诱导的mmp-2和mmp9水平 升高是持久的。之后wong卩4等又在晶状体囊袋上证实mmps抑制剂能抑 制晶状体上皮细胞的移行以及晶状体囊袋收缩。mmps抑制剂还能消除 tgf-p诱导的前囊下型白内障（asc）的形成以及晶状体上皮细胞的emt 过程，mmps抑制剂与tgf-p共同作用于体外培养的晶状体可以明显减少培 养液上清屮tgf卩诱导生成的e-cadherin残片,这些证据说明mmps作为 tgf-p的下游分子在白内障的形成中扮演着重要的角色qi。根据tholozan26l 等研究报道mmps可促进晶

45、状体囊膜释放生长因子fgf,cerra27等报道fgf 可加剧tgf卩诱导的改变，可以推测tgf-p诱导mmps表达增加，mmps 进一步诱导囊膜分泌fgf,共同加剧创伤愈合反应，参与pco的形成。 seomun28等认为lecs中mmp-2的转录活性被tgf卩1诱导增加，导致 mmp-2 量表达，并呈tgf-pi时间和剂量依赖性诱导。mmp-2的表达增 强可进一步诱导lecs发生emt,表现为类成纤维细胞的典型特征，细胞伸 长呈多层排列、a-sma表达增加，且细胞增殖和迁移能力增强。mmp-2还 可进一步激活mmp-9共同参与纤维化过程。mmp-2和mmp- 9主要底物是 变性的胶原和基底膜

46、的主要成分iv型胶原等，mmp-2还可以分解纤连蛋白 和层黏连蛋口。这些都参与了 pco的形成过程。二、炎症1概述机体在遭受感染或组织损伤时，急性炎症反应启动，中性粒细胞募集以 及单核细胞从血液屮迁移到损伤部位参与宿主抗感染和组织损伤修复，以保 持内环境稳定。如果致炎因子不能在短期清除，在机体内持续起作用，不断 地损伤组织造成炎症迁延不愈，转变成慢性炎症。炎症反应通路(图5) 29j 包括诱导物(感染或组织损伤)、感受器(表达toll样受体)、炎症介质(包 括炎性因子、化学活素类、活性胺、类花牛酸类物质和缓激肽等)以及靶器 官。图5炎症通路元素(medzhitov r. inflammatio

47、n 2010: new adventures of an old flame.未改动) 巨噬细胞源于血液中的单核细胞，炎症刺激吋单核细胞从循环中进入损 伤部位活化为巨噬细胞，分泌多种因子如白细胞介素1 (il1)、白细胞介素 -6 (il6)、白细胞介素(il-8)s肿瘤坏死因子-alpha (tnfa)、tgf卩、血管内皮牛长因子（vegf）和碱性成纤维细胞牛长因子（bfgf）、mmps-2, 7, 9, 12以及丝氨酸蛋白酶等，扩大炎症反应沏。巨噬细胞长期存在可促 进局部胞外基质ecm发生改变、血管生成和纤维化等。无明显炎症刺激因 素时，少量巨噬细胞在局部器官常驻，起维持微环境稳定、营养及

48、免疫等功 能。tnf-a和il-1是由激活的巨噬细胞产生的多肽类细胞因子，具有多重生 物活性，也是重要的炎性介质。tnf-a受体在除红细胞以外的所有体细胞上 表达，在病理浓度下可引起多种口细胞功能活化，可诱导il1的产生，并作 用于一些细胞使之产生il6,导致多器官组织损伤】。促炎性因子tnf-a 和il6决定炎症反应状态的程度和持续吋间，而抗炎性因子il-10> il-4和 il-13等在终结炎症反应的过程中扮演重要角色卩习。tnf-a还可介导细胞生 长调节、炎症、细胞毒性、免疫调节、神经内分泌等多方面的效应。il1是 细胞内信号的基本介质，il1能够极大地促进il1、il2、il-6

49、和tnfa的 分泌，il1, il-2, tnf-a本身又可以促进il1的分泌，这些因子在体内 不是孤立的发挥作用，而是互相影响形成细胞因子网络，加重术后炎症反应 33o il-1除介导炎症反应，影响组织代谢外，还具有垂要的免疫调节作用和 促进细胞有丝分裂的能力。在细胞牛长和维持内环境稳定方面起着重要作用 的炎性介质还有前列腺素pg,除此之外它在新生血管的形成、血眼屏障的 破坏以及视网膜血流的调节方面也发挥重要作用。2炎症与脉络膜新生血管cnvgrossniklaus, green®】将cnv的进展分为初始期、炎症活动期和炎症 非活动期，炎症的作用贯穿在cnv形成的整个过程。在初始期

50、发挥主要作 用的是炎细胞，它发生趋化、浸润和活化，同时释放多种炎症因子。在此过 程中炎细胞还与视网膜色素上皮（rpe）细胞和血管内皮细胞等细胞相互作 用，促使bruch膜破裂，并促进rpe细胞和血管内皮细胞增生移行。在炎症 活动期，炎症进一步破坏周围正常组织结构，参与cnv中纤维组织的生成， 从而促进新生血管的生长。在炎症非活动期，伴随着刺激因素的消失和平衡 的重新建立，cnv呈现胶原化和瘢痕化。cnv发生过程屮rpe细胞、巨噬 细胞和中性粒细胞相互作用，有多种炎性因子参与其中，包括il1卩、tnf-a. mcp-1 和 il-8 等。3炎症与白内障对炎症在白内障发牛过程中的作用的了解是有限的

51、，而且这些有限的了 解还不一致。葡萄膜炎患者常由于慢性炎症的持续刺激和长期使用类固醇激 素而并发白内障。白内障手术创伤和外伤都能引起创伤性炎症反应，植入眼 内的人工晶状体作为一种异物会引起异物性炎症反应，导致巨噬细胞粘附和 许多巨噬细胞融合成异物巨细胞，浸润细胞如巨噬细胞分泌细胞因子，这些 细胞因子影响lecs的牛物行为，进而促成了 pco的形成3,36。有证据表 明在成功的白内障囊外摘除术联合iol植入术后存在急性的炎症过程和慢 性的炎症反应37-391,且术后血房水屏障的破坏导致大量炎细胞和炎性分子 进入前房，房水屮单核细胞、巨噬细胞和il1、il-6和tnf-a等炎性因子 以及牛长因子（

52、fgf、pdgf、efg、igf、tgf ）的水平都是升高的。抗炎药物的使用可以以不同的方式影响晶状体上皮细胞发生类pco的细胞 学行为变化，而且在兔pco实验模型中能减少pco的发生。sawhneyle 等发现地塞米松可以使fn和四型胶原collagen iv表达降低，但symonds421 等发现在鼠品状体摘除模型中使用地塞米松和双氯芬酸钠可使a-sma的表 达增加，一型胶原collagen i沉积。但是也有研究发现笛体类（saids）和 非笛体类抗炎药（nsaids）都增加了 pco的发生率。在外伤障和pco形成过程中，炎症释放的许多因子当中il1、肿瘤坏 死因子tnf-a是最初释放的因

53、子卸。直接证据显示体外培养的人晶状体上 皮细胞可以分泌产生il-1, il-1除了促进晶状体上皮细胞的有丝分裂及胶原 合成中】，还能刺激合成多种蛋白和炎性因子，蛋白包括细胞外基质的金属蛋 白酶、晶状体囊膜的主要成分iv型胶原和层粘连蛋白1等；前列腺素合成 也增加，从而加重血房水屏障的破坏和细胞外基质沉积及囊膜纤维化，最 终形成pcoo tnf-a能引起牛晶状体上皮细胞增殖。tnf-a和il6在肝脏 可以引起肝细胞增殖和转分化，还可以在人子宫颈腺癌传代细胞系hela屮 通过上调emt信号通路中的snai1、snai2和twist1来增加其移行能力 叫tnf-a能促进血管平滑肌、肺血管内皮细胞、心

54、肌纤维细胞、巨噬细胞 移行，还能促进晶状体上皮细胞的粘附移行作用邓,il-6对心肌纤维细胞移 行和巨噬细胞移行没有促进作用，但却能加强tnf-a对血管平滑肌细胞移行 的促进作用亿创。这些炎性因子对人晶状体上皮细胞的细胞学行为改变的影 响能力还不十分清楚。4炎症与src家族酪氨酸激酶从发现脂多糖（lps）介导的巨噬细胞激活能促进src家族酪氨酸激酶 hck, lyn和fgr的表达，近20年来对炎症与src家族酪氨酸激酶的关系一 直在不断地研究屮【辺。在鼠和人的巨噬细胞系，src家族酪氨酸激酶特异性 抑制剂pp1和pp2能抑制lps诱导的tnf分泌go】。最近，在lps诱导的 体内肺损伤模型中，p

55、p2的应用能有效降低lps诱导的tnf-a和il-6的高 表达和减轻肺组织损伤，且jak激酶/stat作为src的下游分子参与到这一 过程中】。在炎性因子、lps和tnf-a引起的缝隙连接信息交流的中断中， 是通过c-src依赖的信号转导途径（如c-src-mapk途径）使cx43磷酸化来 实现。以上实骑证据都说明sfks在炎症信号通路中发挥着重要的作用。src除与核受体结合外,还可辅助激活其他转录因子（如nf-kb和ap-1） 从而激活许多炎症因子的表达，包括tnf-a, il-6,单核细胞趋化蛋白1 （mcp-1）等。src的作用非常广泛，它可辅助过氧化物酶体增生物激活受 体（rppar-

56、r）和糖皮质激素受体（gr）发挥抗炎作用，也可结合nfkb 和ap-1发挥致炎作用。src的作用决定于上游的配体，信号通路和转录因子 类型，并在不同的组织细胞中表现出一定的特异性和复杂性初。5炎症和mmpstnf-a和ilip在肾近端肾小管细胞中介导了 mmp-9和timp1的表达 调节网。tnf-a通过erk1/2途径使mmp-9表达升高并呈剂量依赖效应， 而il-lp则通过p38mapk途径抑制了 tnf-a诱导的mmp-9高表达otnf-a 和il-lp都可以使timp-1表达降低，而口两者作用有叠加效应，pkc的激 活在此过程中扮演关键作用。在脑周细胞体外培养过程中，tnf-a通过 m

57、apk和pi3k通路诱导mmp-9释放增加，参与血脑屏障的破坏，介导周 细胞的移行，这些作用能被mmp-9抑制剂阻断，而其他炎性因子包括il1卩、 干扰素-y> il-6和lps都不能诱导周细胞释放mmp-954o il-18诱导动脉平 滑肌细胞增殖，并通过激活nf-kb和ap-1诱导mmp-9高表达促进了动脉 平滑肌细胞移行，并参与形成动脉狭窄旳。三、src家族酪氨酸激酶1概述src作为一个癌基因蛋白，首先由peyton rous在rous肉瘤逆转录病毒 屮发现，随后人们发现在细胞屮普遍存在着高度保守并与其同源的病毒癌基 因v-src编码的蛋白。原癌基因c-src存在于细胞中，与v-src基因同源。src- 家族酪氨酸激酶（src femily kinases, sfks）是一种非受体型酪氨酸蛋白激 酶，它有9个家族成员包括src, hck, fyn, lyn, fgr, lek, blk, ws和 yrk, src> fyn 和 yes 表达于多数组织，而 lyn> lck> hck> fgr blk 和 yrk 选择性表达于特殊组织。src家族酪氨酸激酶成员具有相似的结构组成，从n端至c端分别是豆 蔻酰化序列（m）、单一序列（u）、sh3和sh2结构域、ptk功能域（催