临床实验室生物安全

1、 实验室工作实验室工作可能发生职可能发生职业暴露业暴露 职业暴露可职业暴露可能发生感染能发生感染 实验室职业暴露可发生在实验室工作或逗实验室职业暴露可发生在实验室工作或逗留的任何时间留的任何时间 呼吸道吸入呼吸道吸入 经口摄入经口摄入 针刺或锐器刺伤针刺或锐器刺伤 皮肤、粘膜污染皮肤、粘膜污染 叮咬叮咬 呼吸道传播的微生物主要存在于呼吸道传播的微生物主要存在于气溶胶气溶胶中中并可引起人类感染并可引起人类感染 举例：结核分枝杆菌举例：结核分枝杆菌 炭疽杆菌炭疽杆菌 SARS冠状病毒冠状病毒 气溶胶（气溶胶（aerosol)aerosol)是指固体或液体微粒是指固体或液体微粒稳定地悬浮于气体介质中

2、形成的胶溶状稳定地悬浮于气体介质中形成的胶溶状态分散体系态分散体系 其中的气体介质为连续相，通常为空气其中的气体介质为连续相，通常为空气 其中的微粒为分散相，成份复杂，大小其中的微粒为分散相，成份复杂，大小不一不一 按微粒的大小按微粒的大小 粒径粒径1010m m的称为可吸入颗粒，又因的称为可吸入颗粒，又因其重量轻，在空气中漂浮的时间长而称其重量轻，在空气中漂浮的时间长而称为飘尘为飘尘 粒径粒径1010m m的因重力作用而迅速下沉的因重力作用而迅速下沉而成为降尘而成为降尘微生物气溶胶微生物气溶胶 粒子直径粒子直径1010mm，一般被阻留在鼻腔内，一般被阻留在鼻腔内 粒子直径粒子直径5-10m5

3、-10m，可到达支气管，可到达支气管 粒子直径粒子直径5mm，可进入细支气管和肺泡，可进入细支气管和肺泡 粒子直径越小，其到达的部位越深，小于粒子直径越小，其到达的部位越深，小于1m1m的粒子在肺泡内沉积率最高的粒子在肺泡内沉积率最高 粒子直径粒子直径0.4mm可自由进出肺泡可自由进出肺泡 气溶胶可在实验室内长时间漂浮并随气流气溶胶可在实验室内长时间漂浮并随气流在室内流动在室内流动 工作人员在实验室内工作，甚或逗留期间工作人员在实验室内工作，甚或逗留期间通过通过吸入吸入含有致病微生物的气溶胶颗粒发含有致病微生物的气溶胶颗粒发生暴露并可致感染生暴露并可致感染 经消化道摄入传播的微生物主要存在于粪

4、经消化道摄入传播的微生物主要存在于粪便、食物等中，可引起人类消化道感染便、食物等中，可引起人类消化道感染 举例：志贺菌属细菌举例：志贺菌属细菌 沙门菌属细菌沙门菌属细菌 葡萄球菌属细葡萄球菌属细菌菌 经消化道摄入传播的胃肠道感染可发生在经消化道摄入传播的胃肠道感染可发生在 无意识的手无意识的手-口途径污染时口途径污染时 传染性液体喷溅入口时传染性液体喷溅入口时 在实验室进食、饮水时在实验室进食、饮水时 经血传播的微生物是存在于血液中并可引经血传播的微生物是存在于血液中并可引起人类疾病的生物病原体起人类疾病的生物病原体 举例：举例：HBV HCV HIV 疟原虫疟原虫 梅毒螺旋体梅毒螺旋体 被经

5、血传播的病原体感染的患者血液、或有可见被经血传播的病原体感染的患者血液、或有可见的血污染的体液；以及精液、阴道分泌物、的血污染的体液；以及精液、阴道分泌物、 关节关节液、内脏器官周围液体等可传播血传病原体液、内脏器官周围液体等可传播血传病原体 经血传播而致的感染主要发生在经血传播而致的感染主要发生在 针刺意外时针刺意外时 锐器刺伤时锐器刺伤时 蚊虫、动物叮咬时蚊虫、动物叮咬时 破损的皮肤或粘膜污染时破损的皮肤或粘膜污染时 临床实验室由于其规模、建筑布局、周围临床实验室由于其规模、建筑布局、周围环境、内部分隔、环境、内部分隔、设备、人员拥挤程度设备、人员拥挤程度及及通风条件等的不同而有不同的室内

6、小气候，通风条件等的不同而有不同的室内小气候，并可能导致实验室内病原体的浓度增加并可能导致实验室内病原体的浓度增加, ,使使实验室内感染机会明显大于室外实验室内感染机会明显大于室外 临床实验室在工作过程中可能造成实验室临床实验室在工作过程中可能造成实验室环境的污染，如离心、混匀、接种、制片、环境的污染，如离心、混匀、接种、制片、移液、加样等均可产生气溶胶污染，标本移液、加样等均可产生气溶胶污染，标本喷溅等可直接污染皮肤粘膜及实验台面和喷溅等可直接污染皮肤粘膜及实验台面和地面等地面等 另外，啮齿动物、昆虫等也都可携带并传另外，啮齿动物、昆虫等也都可携带并传播微生物病原体，给实验室工作人员健康播微

7、生物病原体，给实验室工作人员健康带来威胁带来威胁 临床实验室的标本或生物材料中可能携带临床实验室的标本或生物材料中可能携带的潜在病原微生物往往是未知而多样的的潜在病原微生物往往是未知而多样的 根据处理和检测的标本不同、检测目的和根据处理和检测的标本不同、检测目的和方法不同，临床实验室藏匿的具有潜在感方法不同，临床实验室藏匿的具有潜在感染能力的微生物的种类、数量和存在形式染能力的微生物的种类、数量和存在形式亦不同亦不同 当建设使用传染性或有潜在传染性材料的当建设使用传染性或有潜在传染性材料的实验室前，必须进行微生物危害评估。实验室前，必须进行微生物危害评估。 确定对象微生物应在那一级的生物安全防

8、确定对象微生物应在那一级的生物安全防护实验室中进行操作。护实验室中进行操作。 制定相应的操作规程，实验室管理制度和制定相应的操作规程，实验室管理制度和紧急事故处理方法，必须形成书面文件并紧急事故处理方法，必须形成书面文件并严格遵守执行。严格遵守执行。 一级防护屏障一级防护屏障 是指生物安全柜和个人防是指生物安全柜和个人防护装备等构成的防护屏障护装备等构成的防护屏障 二级防护屏障二级防护屏障 是指实验室的设施结构和是指实验室的设施结构和通风系统等构成的防护屏障通风系统等构成的防护屏障 根据使用的一级和二级防护屏障的不同，根据使用的一级和二级防护屏障的不同，实验室生物安全防护水平（实验室生物安全防

9、护水平（biosafetybiosafety level,BSLlevel,BSL）分为四级。）分为四级。 按防护水平由低到高排列即：按防护水平由低到高排列即： 一级生物安全水平（一级生物安全水平（BSL-1BSL-1） 二级生物安全水平（二级生物安全水平（BSL-2BSL-2） 三级生物安全水平（三级生物安全水平（BSL-3BSL-3） 四级生物安全水平（四级生物安全水平（BSL-4BSL-4） 不同级别的生物安全防护实验室都是基于不同级别的生物安全防护实验室都是基于确保处理特定传染性病原体时的工作人员确保处理特定传染性病原体时的工作人员和环境的安全而进行设计的和环境的安全而进行设计的 BS

10、L-1BSL-1是围护屏障水平和生物安全级别最低是围护屏障水平和生物安全级别最低的生物实验室，在该级别实验室中进行的的生物实验室，在该级别实验室中进行的操作都是在室内开放空间进行的操作都是在室内开放空间进行的 在其中活动所涉及的生物因子应是已知不在其中活动所涉及的生物因子应是已知不引起健康成人感染的微生物引起健康成人感染的微生物 但是应注意这些微生物也许有可能引起幼但是应注意这些微生物也许有可能引起幼儿、老人或免疫抑制患者的机会感染儿、老人或免疫抑制患者的机会感染 BSL-2BSL-2主要用于处理中度危险的病原体，如主要用于处理中度危险的病原体，如沙门菌属和乙型肝炎病毒等沙门菌属和乙型肝炎病毒

11、等 这些病原体可能通过意外的经口摄入或经这些病原体可能通过意外的经口摄入或经皮肤、粘膜暴露而感染皮肤、粘膜暴露而感染 在遵守标准操作程序的情况下，这些病原在遵守标准操作程序的情况下，这些病原体的处理可在开放实验台进行体的处理可在开放实验台进行 但是，如预期有发生喷溅或可产生气溶胶但是，如预期有发生喷溅或可产生气溶胶时应使用生物安全柜等时应使用生物安全柜等 BSL-3BSL-3是为应对主要通过气溶胶传播的病原是为应对主要通过气溶胶传播的病原微生物如结核分枝杆菌等的实验室操作而微生物如结核分枝杆菌等的实验室操作而设计的设计的 BSL-3BSL-3有严格的操作规程和程序，使用一级有严格的操作规程和程

12、序，使用一级和二级防护屏障，同时对于诸如通风系统和二级防护屏障，同时对于诸如通风系统都有特殊的要求都有特殊的要求 BSL-4BSL-4用于可引起致命疾病的病原体的处理和实验用于可引起致命疾病的病原体的处理和实验操作操作 这些病原体（如出血热病毒）可能通过气溶胶传这些病原体（如出血热病毒）可能通过气溶胶传播的或者没有有效的疫苗预防或没有有效的治疗播的或者没有有效的疫苗预防或没有有效的治疗方法方法 BSL-4BSL-4实验室的实验操作一般地应在实验室的实验操作一般地应在级生物安全级生物安全柜内进行，或由身着正压防护服的工作人员进行柜内进行，或由身着正压防护服的工作人员进行操作处理操作处理 BSL-

13、4BSL-4实验室应是完全独立的实验室，其通风系统实验室应是完全独立的实验室，其通风系统和废弃物处理亦应完全独立和废弃物处理亦应完全独立 实验室生物安全防护可粗略的分为实验室生物安全防护可粗略的分为 呼吸道传播微生物的防护（主要指对气溶呼吸道传播微生物的防护（主要指对气溶胶的防护）胶的防护） 其他途径传播微生物的防护（主要指经血其他途径传播微生物的防护（主要指经血液、经消化道或经啮齿动物等途径传播的液、经消化道或经啮齿动物等途径传播的微生物的防护）微生物的防护） 鞋套、帽子、合适的口罩、手套、护目镜、鞋套、帽子、合适的口罩、手套、护目镜、常规实验服、背开式隔离衣、连体防护服常规实验服、背开式隔

14、离衣、连体防护服等等 穿工作服（衣、裤）穿工作鞋 戴（防护）口罩穿隔离衣戴第一层手套 戴第二层手套戴帽子必要时洗手必要时戴防护眼镜、面罩BSL-2实验室个体防护实验室个体防护 摘外层手套脱隔离衣 摘帽子摘里层手套脱工作服、鞋摘（防护）口罩必要时消毒手套若有摘防护眼镜、面罩规范洗手 采血岗位采血岗位: :针刺、喷溅、针刺、喷溅、气溶胶污染气溶胶污染污染污染 呼吸道标本采集岗位：飞沫和气溶胶污染呼吸道标本采集岗位：飞沫和气溶胶污染 标本运送、标本运送、接收接收岗位：容器表面污染、标岗位：容器表面污染、标本泄露和泼洒污染本泄露和泼洒污染 标本离心岗位：离心管破碎或盛装过满造标本离心岗位：离心管破碎或

15、盛装过满造成标本泄漏、离心结束前的制动过程中、成标本泄漏、离心结束前的制动过程中、可产生大量具有潜在感染性的气溶胶颗粒可产生大量具有潜在感染性的气溶胶颗粒 其他岗位：标本污染、泄露、气溶胶污染其他岗位：标本污染、泄露、气溶胶污染酶联免疫吸附试验、胶体金免疫试验、免疫酶联免疫吸附试验、胶体金免疫试验、免疫凝集试验检测岗位凝集试验检测岗位 气溶胶污染气溶胶污染 使用加样枪或滴管加样时使用加样枪或滴管加样时可产生气溶胶粒子，特别在吹出最后一滴可产生气溶胶粒子，特别在吹出最后一滴液体时；手工洗涤时可产生气溶胶粒子液体时；手工洗涤时可产生气溶胶粒子 泄露和泼洒污染泄露和泼洒污染 手工加样可发生样本手工加

16、样可发生样本滴落污染台面等；加样时可发生反应板表滴落污染台面等；加样时可发生反应板表面污染；洗板时可发生洗液污染反应板表面污染；洗板时可发生洗液污染反应板表面；标本管破裂、倾倒可产生血液外泄面；标本管破裂、倾倒可产生血液外泄细菌学标本接种、鉴定岗位细菌学标本接种、鉴定岗位 泄露和泼洒污染泄露和泼洒污染 容器破裂可造成标本泄露；容器破裂可造成标本泄露；容器倾倒可造成标本泼洒；临床采集标本时可发容器倾倒可造成标本泼洒；临床采集标本时可发生容器外表面污染；接种时可造成标本滴落污染生容器外表面污染；接种时可造成标本滴落污染台面等；在手工开盖时可发生标本污染手指或环台面等；在手工开盖时可发生标本污染手指

17、或环境；制备涂片时可污染手指或环境境；制备涂片时可污染手指或环境 气溶胶污染气溶胶污染 取菌环接种可产生气溶胶粒子污取菌环接种可产生气溶胶粒子污染；制备涂片和悬液可产生气溶胶粒子污染；标染；制备涂片和悬液可产生气溶胶粒子污染；标本处理过程中的离心、重悬浮等可产生气溶胶粒本处理过程中的离心、重悬浮等可产生气溶胶粒子污染子污染 推荐使用肘动式或者自动式洗手开关推荐使用肘动式或者自动式洗手开关 流动水冲洗手部多次，然后用液体皂滴在手上，反复撮手，流动水冲洗手部多次，然后用液体皂滴在手上，反复撮手，在用水彻底冲洗在用水彻底冲洗 清洗完毕再用干净的纸巾或手巾擦干清洗完毕再用干净的纸巾或手巾擦干 可用可用

18、75%75%的酒精擦手来清除双手的轻度污染的酒精擦手来清除双手的轻度污染 在没有洗手池的地方，可以使用含酒精的在没有洗手池的地方，可以使用含酒精的“免洗免洗”手部清手部清洁产品代替洁产品代替 保持镇静，立即停止实验，脱掉手套。保持镇静，立即停止实验，脱掉手套。 用清水或肥皂水清洗伤口。用清水或肥皂水清洗伤口。 尽量挤出伤口处的血液，取出急救箱，用碘酒或尽量挤出伤口处的血液，取出急救箱，用碘酒或75%75%的酒的酒精擦洗伤口适当的包扎。精擦洗伤口适当的包扎。 及时就医，告知医生受伤原因及可能的微生物污染，必及时就医，告知医生受伤原因及可能的微生物污染，必要时要进行医学处理。要时要进行医学处理。

19、向实验室安全员报告，进行事故记录。向实验室安全员报告，进行事故记录。 处理溢洒物时不要将头伸入安全柜内，也不要将脸直接处理溢洒物时不要将头伸入安全柜内，也不要将脸直接面对前操作口，而应处于前视面板的后方。面对前操作口，而应处于前视面板的后方。 选择消毒剂时需要考虑消毒剂对生物安全柜的腐蚀性。选择消毒剂时需要考虑消毒剂对生物安全柜的腐蚀性。 如果溢洒的量不足如果溢洒的量不足1ml1ml时，可直接用消毒剂浸湿的纸巾擦时，可直接用消毒剂浸湿的纸巾擦拭。拭。 如溢洒量大或容器破碎，按操作规程消毒。如溢洒量大或容器破碎，按操作规程消毒。 如果溢洒物流入生物安全柜内部，则视情况，如需要可如果溢洒物流入生物

20、安全柜内部，则视情况，如需要可对生物安全柜进行熏蒸。对生物安全柜进行熏蒸。 尽快脱掉最外层防护衣，并注意防止感染物质进一步扩尽快脱掉最外层防护衣，并注意防止感染物质进一步扩散。散。 将已污染的防护服放入黄色垃圾袋内，待高压灭菌将已污染的防护服放入黄色垃圾袋内，待高压灭菌 脱掉手套，到污染区出口洗手脱掉手套，到污染区出口洗手 更换防护服和手套更换防护服和手套 必要时对发生污染及脱防护服的地方进行消毒处理必要时对发生污染及脱防护服的地方进行消毒处理 如果内衣被污染，应立即脱掉易污染的衣物，消毒处理如果内衣被污染，应立即脱掉易污染的衣物，消毒处理 感染性液体外溢到皮肤感染性液体外溢到皮肤 （1 1）

21、立即停止工作，脱掉手套）立即停止工作，脱掉手套 （2 2）用）用75%75%的酒精进行皮肤消毒的酒精进行皮肤消毒 （3 3）再用大量水冲洗）再用大量水冲洗 感染性液体溅入眼睛感染性液体溅入眼睛 （1 1）立即停止工作，脱掉手套）立即停止工作，脱掉手套 (2 ) (2 ) 迅速到缓冲区用洗眼器冲洗迅速到缓冲区用洗眼器冲洗 （3 3）用生理盐水冲洗）用生理盐水冲洗 两种情况都应做适当的预防治疗和医学观察，并报告实验两种情况都应做适当的预防治疗和医学观察，并报告实验室安全员进行事故记录室安全员进行事故记录 离心机正在运行时发生破裂或怀疑发生破裂，应关闭电离心机正在运行时发生破裂或怀疑发生破裂，应关闭

22、电源，源， 密闭密闭3030分钟使气溶胶沉淀，离心机停止后发生破裂，分钟使气溶胶沉淀，离心机停止后发生破裂，应立即盖上盖子密闭应立即盖上盖子密闭3030分钟。分钟。 带结实的手套或口罩（避免吸入气溶胶）带结实的手套或口罩（避免吸入气溶胶） 使用镊子清理玻璃碎片，或用镊子夹着的棉花来清理。使用镊子清理玻璃碎片，或用镊子夹着的棉花来清理。 破碎的离心管及离心筒、转轴或转子都应放在无腐蚀性破碎的离心管及离心筒、转轴或转子都应放在无腐蚀性的、对相关微生物具有杀灭作用的消毒剂内浸泡的、对相关微生物具有杀灭作用的消毒剂内浸泡6060分钟以分钟以上。上。 实验室如果发现微生物污染了实验环境应立即停实验室如果

23、发现微生物污染了实验环境应立即停下实验，用实验前备好的消毒剂进行消毒处理。下实验，用实验前备好的消毒剂进行消毒处理。 如实验室被空气和气溶胶传播的微生物污染，应如实验室被空气和气溶胶传播的微生物污染，应立即关闭实验室进行消毒处理。立即关闭实验室进行消毒处理。 盛装污染微生物实验耗材的容器应有足量的消毒盛装污染微生物实验耗材的容器应有足量的消毒剂，用过的耗材立即侵泡在消毒剂中。剂，用过的耗材立即侵泡在消毒剂中。 实验结束后应立即对实验环境进行消毒处理，擦实验结束后应立即对实验环境进行消毒处理，擦洗、消毒工作台面、地面，开启紫外线灯等照射洗、消毒工作台面、地面，开启紫外线灯等照射1 1小时以上。小

24、时以上。 实验废弃物应立即进行灭菌或消毒灯无害化处理。实验废弃物应立即进行灭菌或消毒灯无害化处理。 实验人员在实验结束后应立即清洗消毒双手，必实验人员在实验结束后应立即清洗消毒双手，必要时应洗澡，更衣。要时应洗澡，更衣。 对需消毒的物品应采取彻底的消毒措施，不留死对需消毒的物品应采取彻底的消毒措施，不留死角。角。 用消毒剂浸泡消毒时要保证消毒物品全部浸没在用消毒剂浸泡消毒时要保证消毒物品全部浸没在消毒剂中。消毒剂中。 用消毒剂擦拭消毒时要用消毒剂擦拭消毒时要 保证所有需要消毒的表面保证所有需要消毒的表面都被均匀的擦拭到都被均匀的擦拭到 所有消毒方法均应保证消毒时间所有消毒方法均应保证消毒时间A

25、.实验室内空气的消毒：实验室内空气的消毒： 1.1.一般可加强开窗通风换气，条件许可时采用排一般可加强开窗通风换气，条件许可时采用排气扇人工机械通风，做到每小时换气气扇人工机械通风，做到每小时换气10-1510-15次。次。 2.2.紫外线灯管适用于室内空气，物体表面的消毒。紫外线灯管适用于室内空气，物体表面的消毒。常用的室内悬吊式紫外线灯对室内空气消毒时安常用的室内悬吊式紫外线灯对室内空气消毒时安装的数量为平均装的数量为平均1.5W1.5W每立方米，照射时间不少于每立方米，照射时间不少于3030分钟。分钟。 B.B.实验室地面物体表面消毒：实验室地面物体表面消毒： 实验室、办公室等场所地面要湿式拖扫，实验室、办公室等场所地面要湿式拖扫，禁止禁止 干拖干扫。可用干拖干扫。可用0.1%0.1%过氧乙酸拖地或过氧乙酸拖地或0.2%-0.2%-0.5% 0.5% 过氧乙酸喷洒或拖地消毒剂的用量不少于过氧乙酸喷洒或拖地消毒剂的用量不少于100ml100ml每立方米，拖把应专用，污染区和清洁区不每立方米，拖把应专用，污染区和清洁区不得混用。得混用。C.C.物体表面的消毒物体表面的消毒： 1.1.实验台面、桌子、椅子、凳子、