人教版高中生物选修1生物技术实践全套学案

1、专题 1 传统发酵技术的应用第 1 课时果酒和果醋的制作一、果酒和果醋的制作原理1果酒制作的原理(1) 酵母菌类型： _ ，具有成形的细胞核。繁殖方式： 出芽生殖和孢子生殖。温度低时形成孢子，进入休眠状态； 温度适宜时， 进行 _，繁殖速度快。代谢类型：异养兼性厌氧微生物。(2) 制作原理在有氧条件下，酵母菌进行_，大量 _，反应式为：c6h12o6 6o2 6co2 6h2o 在无氧条件下，酵母菌进行_，反应式为：c6h12o6 2c2h5oh 2co2 (3) 影响酒精发酵的环境条件有_。发酵温度控制在 _范围内。在 _的发酵液中， 酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物无法适应这一环境

2、而受到抑制。酵母菌生长的最适ph为_。2果醋制作的原理(1) 醋酸菌：又名醋酸杆菌。类型： _ 。繁殖方式：_。代谢类型：_。(2) 果醋制作的原理在氧气充足时，能分别把_ 两种反应物转化为_。当缺少 _时可将乙醇转变成乙醛，并进一步转变成醋酸。反应式： c2h5oh o2 ch3cooh h2o (3) 影响醋酸菌发酵的条件醋酸菌最适生长温度为_。醋酸菌属于需氧型微生物，发酵过程中需要_。最适 ph为_。二、果酒与果醋制作的操作流程1实验流程挑选葡萄 冲洗 榨汁 酒精发酵 醋酸发酵果酒果醋2实验装置充气口：在果醋发酵时连接充气泵，输入氧气。因为酵母菌产生酒精时是厌氧的，所以充气口设开关。排气

3、口：排出果酒发酵时产生的二氧化碳。排气口和一个长而弯曲的胶管连接：防止空气中的杂菌进入。出料口：取样检查和放出发酵液。使用方法：在进行果酒发酵时要关闭充气口；在进行果醋发酵时，充气口要连续充入氧气。3实验操作(1) 材料的选择与处理：选择_的葡萄，榨汁前要先_，再除 _。灭菌： a. 榨汁机要清洗干净，并晾干。b发酵装置要清洗干净，并用_消毒。c装入葡萄汁后，封闭充气口。榨汁将葡萄放入榨汁机中榨取葡萄汁，避免将果核压破；若葡萄未充分成熟，葡萄汁内可加糖。发酵a装置：将葡萄汁装入发酵瓶，留大约_的空间。b制葡萄酒：_充气口；温度应控制在_；时间控制在1012 d 左右。c制葡萄醋： 温度应控制在

4、_；时间控制在78 d 左右； 适时通过充气口充入_ 。4结果分析与评价(1) 实验现象发酵酒精发酵醋酸发酵气味和味道酒香味食醋味气泡和泡沫有泡沫无泡沫发酵液颜色混浊混浊，液面形成白色菌膜(2) 检验果酒的制作是否成功检验方法：发酵是否有酒精产生，可用_溶液来检验。检验原理：酸性条件下，重铬酸钾和酒精反应呈现_。检验步骤：先在试管中加入_2 ml，再滴入物质的量浓度为3 mol/l的_3 滴，振荡均匀，最后滴加常温下饱和的_溶液 3 滴，振荡试管，观察_。(3) 检验果醋的制作是否成功可通过 _进行初步鉴定，再通过检测和比较醋酸发酵前后的_做进一步的鉴定。知识点一果酒和果醋制作的原理1请根据某

5、同学尝试使用罐头瓶在常温(213) 下制作果酒的过程，回答下列问题：(1) 开 始 时 向 消 过 毒 的 罐 头 瓶 中 加 入 了 新 鲜 的 葡 萄 汁 和 酵 母 菌 ， 添 加 酵 母 菌 的 目 的 是_ _，添加葡萄汁的目的是为酵母菌的生长发育提供_。(2) 葡萄汁装入瓶中时要留出大约1/3 的空间，这样做的主要目的是_。在以后的过程中 ， 每 隔12 h 左 右 将 瓶 盖 拧 松 一 次 ( 不 是 打 开 瓶 盖 ) ， 此 后 再 拧 紧 ， 这 样 做 的 主 要 目 的 是_。(3) 加入的新鲜葡萄汁没有进行过灭菌处理，但是在制出的果酒中基本检测不出酵母菌以外的杂菌，

6、从生态学角度分析：一是酵母菌与杂菌之间存在的_关系有利于酵母的生长繁殖；二是由于果酒中的_ 。(4) 在制作果酒时，可以将果酒进一步发酵，获得果醋。在工业生产制作苹果醋时常常先将苹果发酵成酒，再放入醋酸菌发酵成果醋，请写出相关的反应式_ _。(5) 制葡萄醋时，需要适时地通过充气口向容器内充气，原因是_ _。(6) 若酵母菌分解葡萄汁中的葡萄糖36 g ，则可生成酒精_mol 。2下列产醋最多的措施是( ) a在果酒中加入食醋，并通气b在果酒中加入变酸的酒表面的菌膜，并通气c将果酒暴露在空气中d在果酒中加入冲洗葡萄的水，并通气知识点二果酒与果醋的制作过程3如图是果酒和果醋制作的实验流程和某同学

7、设计的果酒和果醋的发酵装置。根据图示回答下列问题：(1) 完成图 1 中的实验流程。(2) 冲洗的主要目的是_，冲洗应特别注意不能_，以防止菌种的流失。(3) 图 2 装置中的充气口在_时关闭，在_ 时连接充气泵，并连续不断地向内_ 。(4) 排 气 口 在 果 酒 发 酵 时 排 出 的 气 体 是 由 _ 产 生 的 _ ， 在 果 醋 发 酵 时 排 出 的 是_ _ 。(5) 若在果汁中就含有醋酸菌，在果酒发酵旺盛时，醋酸菌能否将果汁中的糖发酵为醋酸？说明原因。_ _。(6) 在酒精发酵时瓶内温度一般应控制为_。醋酸发酵时温度一般应控制为_。4关于用塑料瓶制果酒和果醋的叙述，正确的是(

8、 ) a为了提高果酒的产出量，果汁应尽量装满发酵瓶b醋酸发酵阶段应封闭瓶口，防止杂菌污染c制果酒过程中每天需适时打开瓶盖d果酒制成后，可将装置转移至温度较高的环境中制果醋第 2 课时腐乳的制作一、腐乳的制作原理1主要微生物毛霉(1) 毛霉的生物学特征：腐乳制作过程中发挥作用的微生物主要是_，属于 _，同化作用类型是 _。(2) 毛霉的作用：毛霉等微生物产生的_酶等能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的_ 和_；产生的 _酶能将豆腐中的脂肪水解为_和_。2腐乳制作的发酵机理制作腐乳的过程主要是豆腐所含的蛋白质发生生物化学反应的过程。酿造腐乳的主要生产工序是将豆腐进行_和_。(1) 前期发酵主要变化：毛

9、霉在豆腐( 白坯 ) 上的生长。条件：发酵温度为_。作用： a. 使豆腐表面由一层菌膜包住，形成_。b. 毛霉分泌以 _为主的各种酶，有利于将豆腐所含有的蛋白质水解为小分子的_ 。(2) 后期发酵实质：酶与微生物协同参与生化反应的过程。主要变化二、腐乳的制作过程1实验流程让豆腐上长出毛霉加盐腌制加卤汤装瓶密封腌制2具体操作(1) 让豆腐上长出毛霉选材：所用豆腐的含水量为_左右最适宜，水分过多腐乳不易成形，过少则不利于毛霉的生长。切块：将所选择的豆腐切成3 cm3 cm1 cm的小块，若切的过小_，过大则中间部分很难形成腐乳。接种：将切好的豆腐块等距离排放，周围留有一定空隙，并将温度控制在_。该

10、温度下 _生长迅速， _等其他微生物生长较缓慢。为了提高毛霉的纯度，也可以将优良毛霉菌种直接接种在豆腐上。(2) 加盐腌制：将长满毛霉的豆腐块分层加盐，加盐量要随着层数的加高而_，近瓶口的表层要_。加盐的目的是使_，利于后期制作时成形；同时盐也能 _的生长，避免豆腐块腐败变质。长满毛霉的豆腐块与盐的质量分数比为_。(3) 加卤汤装瓶：卤汤中酒精的含量应控制在_左右，它能 _微生物的生长，同时与腐乳独特的 _形成有关。香辛料可以调制腐乳的_，也具有 _的作用。(4) 密封腌制：将用盐腌制好的豆腐块迅速小心地装入洗刷干净并用沸水消毒的玻璃瓶中，并整齐摆放，然后加入卤汤。将瓶口通过酒精灯的火焰后，用

11、胶条将瓶口密封。在此过程中时刻注意防止杂菌污染。3影响腐乳品质的因素(1) 卤汤直接关系到腐乳的色、香、味卤汤是由 _和_配制而成的。卤汤中的酒可以选用料酒、黄酒、米酒、高粱酒等，含量一般控制在 _。加酒可以 _，同时能使腐乳具有独特的香味。香辛料种类很多，如胡椒、花椒、八角、桂皮、姜、辣椒等，香辛料可以调制腐乳的_，也具有 _的作用。(2) 控制好材料的用量用盐腌制时， 若盐的浓度过低，不足以抑制微生物生长，可能导致 _ ；若盐的浓度过高，会影响 _。卤汤中酒的含量应控制在12% 左右。酒精含量过高，腐乳成熟的时间会延长；酒精含量过低，不足以抑制微生物生长，可能导致豆腐腐败。(3) 掌握好发

12、酵温度和时间毛霉的最适生长温度为1518，保持其生长适宜温度，可缩短发酵时间。温度过低或过高会影响毛霉的 _和_，从而影响发酵的进程和发酵质量；时间过短，发酵不充分；时间过长，豆腐会软化不易成形，从而影响_。知识点一腐乳的制作原理1腐乳是通过微生物发酵制成的食品，其制作流程如下，请回答有关问题：让豆腐上长出毛霉 加盐腌制 加卤汤装瓶 密封腌制(1) 民间制作腐乳时，豆腐块上生长的毛霉来自空气中的毛霉孢子，现代的腐乳生产是在严格的无菌条件下， 将优良的毛霉 菌种直接接种 在豆腐上，这 样做的目的是什么？_ _。(2) 制作腐乳的原料中哪种有机物含量比较高？_；毛霉可利用体内的酶将其分解成哪些小分

13、子有机物？ _ 。(3) 在用盐腌制腐乳的过程中，若盐的浓度过低会出现什么现象？_ _。(4) 卤汤中酒的含量为什么要控制在12% 左右？ _ _ _。2毛霉的新陈代谢类型为异养需氧型，下列哪项措施与其需氧有关( ) a豆腐含水量控制在70% 左右b控制温度为1518c用塑料袋罩住发酵盘时不要太严d与上述a、c项措施有关知识点二腐乳的制作过程3请回答下列有关腐乳制作的问题：(1) 腐乳制作过程中有多种微生物的参与，其中起主要作用的是_，其菌落特征是_。现代的 腐 乳 生 产 是 在 严 格 无 菌 的 条 件 下 ， 将 优 良 的 菌 种 直 接 接 种 到 豆 腐 上 ， 优 点 是_ _

14、。(2) 腐乳制作的流程中需要严格消毒的阶段是_、_。(3) 加盐腌制的过程中，要注意的是_ _。(4) 配制卤汤时加酒的作用是_ _。其中酒的含量应控制在_ 左右，酒精含量过高，_ ，酒精含量过低则_ _ 。香辛料的作用是_ _。(5) 用来腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干净后要_ ，加入卤汤后，要用胶条密封，密封时最好将瓶口通过酒精灯火焰，防止_ 。4下列关于腐乳制作过程中食盐和酒精用量的说法，正确的是( ) a食盐不能抑制微生物生长，只会影响腐乳口味b酒精含量过高促进微生物生长c酒精含量过低可能导致豆腐腐败d以上说法均不对第 3 课时制作泡菜并检测亚硝酸盐含量一、泡菜的制作1乳酸菌(1) 生物学

15、特征乳酸菌是由原核细胞构成的_；繁殖方式是分裂生殖；新陈代谢类型是_，有氧时发酵 ( 无氧呼吸 ) 受到抑制。(2) 乳酸菌的作用在_条件下，乳酸菌可将_分解成 _。反应式： c6h12o6 2c3h6o3( 乳酸) 2泡菜坛的选择标准是_、_、_、_、 _，否则容易引起蔬菜腐烂。3实验流程4操作步骤(1) 将新鲜蔬菜预先处理成_。(2) 泡菜盐水按清水和盐的质量比为_的比例配制，_备用。(3) 预处理的新鲜蔬菜装至半坛时放入蒜瓣、生姜、香辛料等佐料，并继续装至八成满。(4) 倒入配制好的_，使盐水浸没全部菜料。(5) 盖上泡菜坛盖子，并用水_。发酵时间长短受室内温度的影响。5腌制的条件(1)

16、 在泡菜的腌制过程中，需要控制的条件包括腌制的_、_和_的用量。(2) 温度过高、食盐用量不足10% 、腌制时间过短，容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加。6泡菜腌制过程中乳酸菌和乳酸的变化泡菜发酵可分为三个阶段：(1) 发酵初期：以不产酸的_和_活动为主，同时还有一部分_活动。该时期利用了氧气，产生了缺氧环境，乳酸菌才开始活动。乳酸菌和乳酸的量都比较少。(2) 发酵中期： 由于乳酸菌产生了大量乳酸，其他细菌活动受到抑制，只有乳酸菌活动强烈。此时期 _数量达到高峰，_的量继续积累。(3) 发酵后期：由于乳酸的积累，酸度继续增长，乳酸菌活动也受到抑制，乳酸菌数量下降。乳酸菌和乳酸在整个发酵过程

17、中的含量变化趋势为：二、测定泡菜中亚硝酸盐的含量1亚硝酸盐(1) 亚硝酸盐为 _色粉末，易溶于_，在食品加工中用作_。(2) 分布：亚硝酸盐在蔬菜中平均含量约为_ mg/kg ；咸菜中平均含量为_ mg/kg 以上；而豆粉中的平均含量可达_ mg/kg 。(3) 危害：膳食中的亚硝酸盐一般不会危害人体健康，但是，当人体摄入的亚硝酸盐总量达到_ g时，会引起中毒；当摄入总量达到_ g 时会引起死亡。(4) 在人体内的代谢特点：正常情况下亚硝酸盐可以_；只有在特定条件下( 适宜的 _、_和 _作用 ) ，才会转变为致癌物_。(5) 卫生标准：我国卫生标准规定，亚硝酸盐的残留量在肉制品中不得超过_

18、mg/kg ，酱腌菜中不超过 _ mg/kg ，而婴儿奶粉中不得超过_ mg/kg 。2实验原理在 _ 条 件 下 ， 亚 硝 酸 盐 与 _ 发 生 _ 后 ， 与_ 结合形成 _ 。将显色反应后的样品与已知浓度的_进行 _，可大致估算出泡菜中亚硝酸盐的含量。3操作过程(1) 配制 _ (2) 制备 _ (3) 制备 _ (4) 比色：观察样品颜色的变化，并与标准显色液比较，找出与_最相近的颜色，记录对应的亚硝酸钠含量，并按照下面的公式进行计算。亚硝酸盐含量样品中亚硝酸盐含量取样量滤液的质量，4结果记录每隔 2 天测一次，将结果记录在下表。泡菜腌制过程中亚硝酸盐含量变化(mg/kg) 腌制天

19、数1 号坛2 号坛3 号坛封坛前2 天4 天6 天8 天5. 结论分析泡菜发酵可分为三个阶段：发酵初期，由于硝酸盐还原菌的活动，亚硝酸盐含量_。发酵中期：由于硝酸盐还原菌受抑制；同时形成的亚硝酸盐又被分解，因而亚硝酸盐_ 。发酵后期，硝酸盐还原菌完全受抑制因而亚硝酸盐含量_ 。亚硝酸盐在整个发酵过程中的含量变化趋势如图所示。知识点一泡菜的制作1据所学泡菜的制作过程，回答下面的问题：(1) 制作泡菜所利用的乳酸菌，从其结构上分析，属于哪类生物？_ 。(2) 请用反应式表示出乳酸菌发酵的原理。_。(3) 制作泡菜的坛子必须密封，试说明其道理。_。(4) 试讨论制作泡菜的过程中应注意的问题及原因。_

20、 _。2在泡菜的制作过程中，不正确的是( ) a按照清水与盐的质量比为41 的比例配制盐水b按照清水与盐的质量比为51 的比例配制盐水c盐水入坛前要煮沸冷却，以防污染d在坛盖边沿的水槽中要注满水，以保证坛内的无氧环境知识点二泡菜制作过程中亚硝酸盐含量的测定3如图是泡菜的制作及测定亚硝酸盐含量的实验流程示意图，请据图回答：(1) 制作泡菜宜选用新鲜蔬菜的原因是_ 。(2) 制备泡菜的盐水中清水与盐的质量比约为_ ， 盐水需煮沸并冷却后才可使用， 原因是 _ 试说明盐在泡菜制作中的作用：_ 。(3) 泡菜风味形成的关键在于_的加入。(4) 泡 菜 的 制 作 方 法 不 当 ， 很 容 易 造 成

21、 泡 菜 变 质 ， 甚 至 发 霉 变 味 ， 试 分 析 可 能 的 原 因 ：_ _ _。(5) 发酵过程中应定期测定亚硝酸盐的含量，原因是_ _。(6) 测定亚硝酸盐含量的方法是_ 。4下列关于亚硝酸盐的叙述，错误的是( ) a亚硝酸盐为白色粉末，易溶于水b亚硝酸盐分布广泛，其中蔬菜中亚硝酸盐的平均含量约为4 mg/kg c咸菜中亚硝酸盐的平均含量在7 mg/kg 以上，所以尽量少吃咸菜d亚硝酸盐不会危害人体健康，并且还具有防腐作用，所以在食品中应多加些以延长食品的保质期专题 2 微生物的培养与应用第 1 课时微生物的实验室培养一、培养基与无菌技术1培养基(1) 概 念 ： 人 们 按

22、 照 微 生 物 对 _ 的 不 同 需 求 ， 配 制 出 供 其 _ 的_。(2)成分：一般含有 _、 _、 _、 _， 此外还要满足微生物对_(即生长因子 )、_以及氧气的需求。拓展深化营养物质定义作用主要来源碳源能提供所需_的物质构成生物体的_和一些 _，有些是异养生物的_ 无 机 化 合 物 ： co2 、nahco3等；有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等氮源能提供所需_的物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机化合物： n2、nh3、铵盐、硝酸盐等；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等特 殊 营 养 物质(生长因子 ) 生长必 不可 少的_ 酶和核酸的组成成分维生素、氨基酸

23、、碱基等水在生物体内含量很高，在低等生物体内含量更高不仅是优良的溶剂，而且可维持生物大分子结构的稳定无机盐为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素细胞内的组成成分，生理调节物质，某些化能自养菌的能源，酶的激活剂(3)培养基的种类划分标准培养基种类特点用途物理性质_培养基加凝固剂，如琼脂_ 半固体培养基观察微生物的运动、分类、鉴定_培养基微生物 _、_、活菌计数、保藏菌种化学成分_培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产_培养基培养基成分明确(用化学成分已知的化学物质配成) 分类、鉴定用途_培养基培养基中加入某种化学物质，以_不需要的微生物的生长，_培养、 _出特定微生物(如培养酵母菌和霉菌，可在

24、培养基中加入青霉素或链霉素；培养固氮菌可用所需要的微生物的生长无氮培养基，如阿须贝培养基) _培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品_不同种类的微生物，如可用伊红美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽) 注意病毒目前不能利用人工培养基来培养，需接种在动、植物组织细胞中才能繁殖。常用于培养病毒的是活鸡胚。2无菌技术(1)概念：防止一切外来杂菌的侵入，并保持灭菌物品及无菌区域不再被污染的方法，称为无菌技术。注意在微生物的实验室培养中，无菌技术的核心是_，_。(2)无菌技术的具体内容对实验操作的_、操作者的 _进行清洁和消毒。将用于微

25、生物培养的_、接种用具和培养基等进行_。为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在_进行。实验操作时应避免已_处理的材料用具与周围的物品相接触。(3)消毒和灭菌的概念消毒：消毒是指使用_的物理或化学方法杀死物体表面或内部的_(不包括芽孢和孢子 )。灭菌：灭菌是指使用_的理化因素杀死物体内外_，包括 _。消毒与灭菌的区别：两者最大的区别是_。拓展深化某些细菌在其生长发育后期，可在细胞内形成一个圆形的抗逆性休眠体，称为芽孢。每个细菌细胞仅形成一个芽孢，故它无繁殖功能。芽孢有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压的能力。芽孢的休眠能力十分惊人，可保持几年到几十年的生活力。孢子是微生物产生的一种有繁

26、殖或休眠作用的细胞。一般是单细胞，个体微小，通常是适应于从不利环境条件中存活下来，并在条件改变时产生新的营养体，能直接发育成新个体。(4)消毒与灭菌的常用方法方法条件作用对象消毒_ _ 100，煮沸56 min 杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢_ _ _ 7075煮 30 min 或 80煮 15 min 不耐高温的液体_ _ _ 70% 的酒精对双手消毒50% 的石炭酸、来苏水对空气消毒一定浓度的乳酸、食醋通过熏蒸对空气进行消毒紫外线法紫外线照射30 min 物体表面或空气中的微生物灭菌_ _ 在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧对接种环、接种针或其他金属工具灭菌，也可以对试管口、瓶口灭菌_ _ 在

27、干热灭菌箱内，160170条件下，加热 1 2 h 耐高温且需保持干燥的物品，如玻璃器皿和金属用具等_ _ _ 在高压蒸汽灭菌锅内，121， 100 kpa，灭菌 1530 min _ _ _ 30 w 照射 30 min 小型接种室、接种箱等二、实验操作(一)配制培养基1配制原则(1)_( 根据微生物的种类、培养目的等)，如培养基可由简单的无机物组成；生产用培养基内可加入化学成分不明确的天然物质，而分类鉴定用培养基内必须加入已知化学成分的物质。(2)_，注意各种营养物质的浓度和比例。(3)_，各种微生物适宜生长的ph 范围不同，细菌6.57.5、放线菌7.58.5、真菌 5.06.0。注意不

28、同微生物对营养需求不同，因此，首先根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。营养物质浓度过低不能满足微生物营养需要，过高对微生物的生长有抑制作用，另外，培养基中各营养物质浓度比直接影响微生物的生长繁殖和代谢产物的形成和积累，其中碳氮比(c/n) 的影响较大。例如，在谷氨酸生产中，当培养基中的碳源与氮源的比为41 时，菌体大量繁殖，而产生的谷氨酸少；当碳源与氮源的比为3 1 时，菌体繁殖受抑制，但谷氨酸合成量大增。2配制方法 (以制备牛肉膏蛋白胨固体培养基为例) (1)培养异养菌的牛肉膏蛋白胨固体培养基的营养构成培养基组分提供的主要营养物质牛肉膏 5.0 g 碳源、磷酸盐和维生素蛋白胨 10

29、.0 g 氮源和维生素nacl 5.0 g 无机盐h2o 定容至 1 000 ml 氢元素、氧元素(2)实验流程提醒合格的培养基必须灭菌效果好。培养基配制好后，要放在恒温箱中保温1 2 d，若无菌落生长则说明制备的培养基是合格的。(二)纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌就是为了获得大肠杆菌的纯种菌落，这需在培养时，尽量使菌落中的菌体来自于一个大肠杆菌的分裂，即这个菌落的细菌群体由一个大肠杆菌繁殖而来，这就需接种时尽量接种单个的大肠杆菌。1微生物接种的方法微生物接种的方法最常用的是_和 _两种。(1)_通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。将 _放在酒精灯火

30、焰上灼烧，直到接种环烧红。在火焰旁冷却接种环，并打开盛有菌液的试管的_。将试管口通过酒精灯的_。将已冷却的接种环伸入菌液中，_一环菌液。将试管口通过酒精灯的火焰，并迅速塞上棉塞。_将培养皿皿盖打开一条缝隙，_将沾有菌种的接种环迅速伸入_，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将_的划线与 _相连。将 _，放入培养箱中培养。(2)_ 则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。系列稀释操作a取盛有9 ml 水的 6支试管灭菌

31、，并按101106 的顺序编号。b用 _吸取 1 ml 培养的菌液，注入101 倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。c从 101 倍稀释的试管中吸取1 ml 稀释液，注入102 倍稀释的试管内吹吸均匀，获得102倍液。依此类推。涂布平板操作a将 _浸在盛有酒精的烧杯中。b取不超过0.1 ml 的_，滴加到培养基表面。c将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却810 s。d用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀。2注意事项(1)平板划线法操作第一步即取菌种之前及每次划线之前都需要进行_，划线操作结束时，仍需灼烧

32、_。从第二次以后的划线操作总是从_开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。(2)稀释涂布平板法稀释涂布平板的操作比较复杂，且各个细节均需保证“_” ，应特别注意：酒精灯与培养皿的距离要合适。吸管头不要接触任何其他物体。吸管要在酒精灯火焰周围使用。3微生物分离纯化培养的结果作出分析与评价(1)培养未接种培养基的作用是对照，若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底。(2)在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。(3)培养 12 h 和 24 h 后的菌落大小不同，菌落分布位置相同。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大，而菌落

33、的位置不动，只是菌落数增多。(4)频繁使用的菌种利用临时保藏法保存，长期保存菌种的方法是甘油管藏法。前者利用固体斜面培养基培养后，保存在4冰箱中，第36 个月转种培养一次，缺点是保存时间较短，菌种容易被污染或产生变异；后者将菌种与无菌甘油等量混合后保存在20的冷冻箱中。4菌种的保存为了保持菌种的纯净，需对菌种进行保藏。对于频繁使用的菌种，我们可以采用_法；对于 需 要 长 期 保 存 的 菌 种 ， 可 以 采 用 _ 法 。 将 菌 种 放 在 低 温 环 境 中 保 藏 的 目 的 是_，但时间长了菌种还是要老化的，因此对临时保存的菌种_个月后需重新接种。知识点一培养基与无菌技术1不同的微

34、生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以co2 为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不正确的是() a氮源物质为该微生物提供必要的氮素b碳源物质也是该微生物的能源物质c无机盐是该微生物不可缺少的营养物质d水是该微生物的营养要素之一2下列说法正确的是() a培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质b培养基只有两类：液体培养基和固体培养基c除水以外的无机物只能提供无机盐d无机氮源不可能提供能量知识点二大肠杆菌的纯化培养3有关平板划线操作的叙述，不正确的是() a第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物b每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上的菌种c在第二区

35、域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液d划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者4下列为某同学在培养金黄色葡萄球菌实验中的部分操作步骤，其中正确的是() a培养基中蛋白胨、牛肉膏溶化后，直接补充蒸馏水至100 ml b培养基配制完毕可直接使用c加压至100 kpa 之前，要彻底排出锅内的冷空气d将接种环放在酒精灯火焰上灼烧，灭菌后立即伸入菌液试管内挑取少量菌种第 2 课时土壤中分解尿素细菌的分离与计数一、研究思路1筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理人为提供有利于_生长的条件 (包括营养、 温度、 ph 等)，同时 _或_其他微生物生长。(2)选择培养

36、基在微生物学中，将允许_种类的微生物生长，同时_或_其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。(3)分离分解尿素的细菌的选择培养基在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是_，提供氮源的是_，琼脂的作用是凝固剂。该培养基对微生物具有选择作用。其选择机制是_ 才能在该培养基上生长。 土 壤 中 的 细 菌 之 所 以 能 分 解 尿 素 ， 是 因 为 它 们 体 内 能 合 成 _ ， 将 尿 素 分 解 的 反 应 式 是_ 。taq 细菌能忍受93左右的高温，是在美国黄石国家公园的一个热泉中发现的，这说明， 在寻找目的菌株时，要根据 _ 。2统计菌落数目的方法(1)稀释涂布平板法(也叫

37、活菌计数法) 原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的_，通过统计平板上的_，就能推测出样品中大约含有多少活菌。操作第一，设置重复组，增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列10 倍稀释，然后选择_稀释度的菌液，分别取0.1 ml 接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布整个平板表面，放在适宜的温度下培养并计算菌落数。为使结果接近真实值，可将同一稀释度涂布到三个或三个以上的平板上，培养并计算出_。第二，为了保证结果准确，一般选择菌落数在_的平板进行计数， 若设置的重复组中结果相差太远，意味着操作有误，需重新实验。计算公式：每克样品中的菌株数cv

38、 m ，其中c代表 _ ， v代表_(ml) ，m 代表 _。(2)显微镜直接计数法原理：此法利用特定的_或_，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量，但不能区分细菌的死活。计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积1 mm2 和高 0.1 mm 的计数室， 在 1 mm2 的面积里又被划分成25 个(或 16 个)中格，每个中格进一步划分成16 个(或 25 个)小格，计数室由 _个小格组成。操作：将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计数4 5 个中格中的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按公式求出每毫升样品中所含的细菌数。计数公式：每毫升原液所含细菌数每小格

39、平均细菌数 400 10 000 稀释倍数。(3)设置重复和对照设置重复：培养过程中应设置重复组，同一稀释度下应涂布_个平板，才能增强实验的说服力与准确性。设置对照：实验中应设置对照，主要目的是_对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。如_对照组，观察培养物中是否有杂菌污染；设置_培养基，观察选择培养基是否具有 _作用。二、实验设计实验步骤1 土壤取样：从肥沃、湿润的土壤中， 用无菌小铁铲铲去表层土3 cm 左右，迅速取土壤并装入_密封或事先准备好的_中。2制备培养基：制备_培养基作为对照组，尿素为唯一氮源的培养基作为_，用来判断选择培养基是否具有_。放宽稀释范围，如稀释倍数为103107 范

40、围内的要分别涂布，而每个稀释度下需要_个选择培养基、 _个牛肉膏蛋白胨培养基，因此需要15 个选择培养基和5 个牛肉膏蛋白胨培养基。两种培养基应各有一个作为_对照，此外还需准备8 个灭菌的试管和1 个灭菌的移液管。3样品的稀释与涂布平板：参考下面的实验流程示意图，将10 g 土样加入盛有90 ml 无菌生理盐水的锥形瓶中 (锥形瓶体积为250 ml) ，充分摇匀，吸取上清液1 ml，转移至盛有_ ml 生理盐水的无菌大试管依次等比稀释至107 稀释度，并按照由 107103 稀释度的顺序分别吸取_ml 进行平板涂布操作。按照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必更换移液管。说明：图中的1、 2、3

41、平板是 _，4 为_作对照，判断选择培养基是否具筛选作用，还有两个空白对照，即不涂布稀释后菌液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基，验证培养基中是否 _。4将涂布好的培养皿放在30温度下培养，及时观察和记录。5挑选选择培养基上不同形态的菌落接入含_培养基的斜面中，观察能否产生颜色反应。6细菌的计数当菌落数目稳定时，选取菌落数在_的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3 个平板进行重复计数，然后求出_，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。同时仔细观察所分离到的菌落，并记录菌落特征。7统计表格表一平板上的菌落数记录表稀释倍数103 104 105 106 107 1 2 3 4 1 2 3

42、 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 ?表二菌落特征记录表菌落种类形状大小隆起程度颜色1 2 3 ?注：一般来说，在一定的培养条件下(相同的培养基、温度及培养时间)，_表现出 _的菌落特征。三、操作提示1取土样用的小铁铲和盛土样的信封在使用前都要_。2应在 _旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入_中，塞好棉塞。3在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在_旁操作。4实验时要对_做好标记。注明_ 等。5为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当_。四、结果分析与评价内容结论分析有无杂菌污染的判断对照的培养皿中_菌落生长 未被杂菌污染培养物中菌落数_ 被杂菌污染菌落形态多样，

43、菌落数偏高培养物中混入_ 选择培养基的筛选作用牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目_选择培养基的数目 选择培养基具筛选作用，已筛选出一些菌落样品的稀释操作得到 2 个或 2 个以上菌落数目在_的平板 操作成功，能进行菌落的计数重复组的结果若选取同一种土样，统计结果应_；如果结果相差太远，说明实验操作过程中出现操作失误，需要找出产生差异的原因五、课题延伸在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的 _将尿素分解成了_。 氨会使培养基的碱性增强，_升高。因此，我们可以通过检测培养基_来判断该化学反应是否发生。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入_指示剂，培养某种细菌后， 如果 ph 升高， 指示剂将 _，这样，我们

44、就可以准确地鉴定该种细菌能够分解尿素。知识点一研究思路1下表为本课题使用的培养基，分析培养基配方，回答下面的问题。kh2po4 1.4 g na2hpo4 2.1 g mgso4 7h2o 0.2 g 葡萄糖10.0 g 尿素1.0 g 琼脂15.0 g 用蒸馏水定容到1 000 ml (1)在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是_。(2)按物理性质划分该培养基属于_培养基， 理由是培养基中含有_；该类培养基常用于微生物的_等。(3)由于 _ ，所以该培养基只能用于能够合成_的微生物的培养。 用此培养基培养土壤浸出液能够从土壤中筛选出 _的细菌。(4)在微生物学中，将_ _的

45、培养基，称作选择培养基。2广东省是我国甘蔗生产区之一。甘蔗是一种高光效的c4 植物，单位面积产量很高，种植面积日益扩大，目前已成为南方地区燃料酒精生产的重要原料。利用甘蔗生产燃料酒精的一般工艺流程为：甘蔗 榨汁 (蔗糖 ) 酵母发酵 蒸馏 成品 (燃料酒精 )。(1)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：步骤 1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。步骤 2：制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注意_和_，加琼脂后灭菌，制成固体平板。步骤 3：将紫外线照射后的菌液稀释涂布平板。步骤 4：根

46、据 _ ，筛选出突变菌。(2)上述步骤2、 3 和 4 的依据分别是_ _ _ 。知识点二实验设计3用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106 的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是() a涂布了1 个平板，统计的菌落数是230 b涂布了2 个平板，统计的菌落数是215 和 260，取平均值238 c涂布了3 个平板，统计的菌落数分别是21、212 和 256，取平均值163 d涂布了3 个平板，统计的菌落数分别是210、240 和 250，取平均值233 4在本实验操作中对使用的平板和试管要进行标记，以下说法正确的是() a对培养皿仅需注明培养基的种类即可b一般在

47、使用之后进行标记c由于试管用的较多，只需对试管进行标记即可d标记的目的主要是为了防止实验中平板、试管等的混淆专题 3 植物的组织培养技术第 1 课时菊花的组织培养一、基础知识1植物组织培养的基本过程(1) 细 胞 全 能 性 的 表 达 ： _ 的 植 物 组 织 或 细 胞 ， 在 一 定 的 _ 、 _ 和_ 的作用下，发育成完整植株的过程。(2) 细胞分化： 在植物的 _过程中，细胞在 _、 _和_上都会出现 _的差异，形成这些差异的过程叫做细胞分化。(3) 植物组织培养的基本过程离体的植物器官、组织或细胞 ( 又叫 _)愈伤组织胚状体、 丛芽等生长新个体愈伤组织的特点： 细胞 _， 是

48、一群 _的呈 _ 的薄壁细胞。脱分化 ( 去分化 ) ：由 _的植物组织或细胞产生_的过程。再分化：由_重新分化成根或芽等器官的过程。(4) 条件： _的植物组织或细胞，在一定的_、_和其他外界条件的作用下就可能表现出全能性，发育成完整植株。离体的植物组织或细胞叫做_。2影响植物组织培养的因素(1) 培养材料的影响：不同的植物组织，培养的难易程度_。对于同一种植物材料，材料的_、 _等也会影响实验结果。因此菊花的组织培养，一般选择_的茎 _部_的侧枝。(2) 营养物质的影响：常用的_培养基，主要成分包括_、_、_以及蔗糖等。其中_和_提供植物细胞所必需的无机盐；_提供碳源，维持细胞渗透压。(3

49、) 植物激素的影响：ms培养基常需添加植物激素。其中_和_是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素，这两种激素的_、_以及 _等，都会影响实验结果。下表是关于两种植物激素在组织培养过程中的作用。使用顺序或用量比实验结果先使用生长素，后使用细胞分裂素有利于 _，但细胞 _ 先使用细胞分裂素，后使用生长素细胞 _ 同时使用分化频率 _ 生长素用量 / 细胞分裂素用量，比值高有利于 _的分化、抑制_的形成生长素用量 / 细胞分裂素用量，比值低有利于 _的分化、抑制_的形成生长素用量 / 细胞分裂素用量，比值适中促进 _的形成(4) 环境因素的影响：_、_、_等条件也能影响植物组织培养。二、植物组织

50、培养的操作流程1制备 ms固体培养基：将各种营养成分按比例配制成_。利用母液配制菊花组织培养所需要的培养基，菊花的组织培养比较容易，因此可以不加激素，而如果是其他植物的组织培养，则要配制成三种培养基，即_、_和_。配制菊花的组织培养的培养基时先将称好的琼脂加入800 ml 蒸馏水中，加热使_熔化；然后加入_30 g ，加入一定量的 _，充分混匀后加蒸馏水定容至1 000 ml ，调节 _；最后分装到锥形瓶中，每瓶分装 50 ml或100 ml 。用包在纱布中的棉塞封严瓶口，外面包一层牛皮纸。将配制好的培养基放入_ 锅，在 121下灭菌15 min 。2外植物体消毒：选取生长旺盛的菊花的嫩枝，先

51、用清水洗净，再用体积分数为_浸泡67 s 后，立即取出并用无菌水清洗，取出后吸干水分再放入质量分数为_中浸泡 1 2 min。取出后，在无菌水中至少清洗3 次，漂净消毒液。3接种：在超净工作台上铺上无菌滤纸，将已消毒的菊花茎段切成小段( 长 0.5 1.0 cm) ，迅速接种到培养基上。插入时应注意方向，使嫩茎的形态学下端接触培养基，不要_。每瓶接种68 块嫩茎。接种后，将锥形瓶的瓶口在酒精灯火焰上转动灼烧一遍，将封口膜重新扎好，贴上标签，做好记录。4培养：接种后的锥形瓶放在_中培养。培养温度应控制在1822，并且每日用日光灯光照12 h ，并定期进行_，保持适宜的 _和_。5移栽：当小苗长到

52、56 cm，基部形成根原基的时候，即可进行移栽。试管苗是在无菌、充分营养供给、适宜的光照和温度以及100% 相对湿度环境中生长的。刚出瓶的试管苗对外界环境不太适应。将试管苗培养瓶的瓶口敞开一半，放置在2025的遮阴环境中，适应714 d。若试管苗不萎蔫、有新生长的趋势，便可将试管苗取出，小心洗净粘在根上的培养基，植入盛有_等材料的花盆中，浇足水分，罩上带孔的塑料薄膜，将花盆放置在2025的阴凉处35 d 。待幼苗长出新叶时，揭去塑料薄膜，再过710 d ，幼苗即可移栽到土壤里。6栽培：将幼苗移载后，每天观察并记录幼菌生长情况，适时浇水、施肥，直至开花。提醒(1) 植物组织培养一定要采用无菌技术

53、。(2) 实验选材是实验成功的关键。知识点一植物组织培养的基本过程及影响因素1请回答下列有关植物组织培养的几个问题。(1) 离 体 植 物 组 织 和 细 胞 培 养 常 用 的 一 种 培 养 基 是 _ ， 其 主 要 成 分 中 的 大 量 元 素 有_ ，培养基中常用的两种植物激素是_和_，两者使用时的_、_、 _等，都会影响实验的结果。(2) 下图表示植物组织培养的部分过程：离体的器官、组织或细胞a 植物体过程是 _，过程是 _，a是_。(3) 组织培养过程中还需要维持一定的外界条件，一是要有适宜的_，二是 _。2下列关于影响植物组织培养因素的说法，正确的是( ) a不同植物组织培养

54、的难易程度不同，同一种植物材料培养的难易程度相同b在植物组织培养中，培养基中必须添加植物激素c植物激素中，生长素和细胞分裂素的作用是相互独立的dph、温度、光照条件等对植物组织培养也特别重要知识点二植物组织培养操作过程3下列哪组符合菊花组织培养的基本步骤( ) a制备 ms培养基外植体消毒接种培养移栽栽培b制备 ms培养基外植体消毒接种培养栽培移栽c制备 ms培养基外植体消毒接种栽培培养移栽d制备 ms培养基外植体消毒接种移栽培养栽培4关于植物组织培养的内容，以下说法错误的是( ) a一般来说容易进行无性繁殖的植物，也容易进行组织培养b对菊花茎段进行组织培养，不加植物激素也能成功c接种后的锥形

55、瓶放入无菌箱中，给予适宜的温度和光照即可d移栽生根的试管苗之前，先打开瓶口，让试管苗在培养间生长几日第 2 课时月季的花药培养一、月季花药培养的基础知识1被子植物的花粉发育过程(1) 被子植物的花粉是在花药中由花粉母细胞经过_形成的，是 _的生殖细胞。(2) 发育历程：被子植物花粉的发育要经历_、_和_等阶段。提醒(1) 花粉萌发进行受精作用时，每个花粉粒可释放出两个_，从而完成被子植物的_。(2) 被子植物的花粉发育要经过小孢子四分体时期、单核期、双核期三个阶段，其中单核期又分单核居中期和单核靠边期两个时期，双核期包括花粉管细胞核和生殖细胞核两个核。(3) 被子植物花粉发育过程中的“四分体”

56、是指由一个花粉母细胞经过减数分裂产生的连在一起的4 个_(4 个小孢子 ) ；而减数分裂中的“四分体”是指在联会状态下的一对同源染色体，因为含有四条染色单体，所以叫做“四分体”。2产生花粉植株的两种途径(1) 通过花药培养产生花粉植株的两种途径一种是花粉通过_阶段发育成植株；另一种是花粉在诱导培养基上先形成_，再将其诱导分化成植株。花药中的花粉脱分化胚状体分化丛芽花药中的花粉脱分化愈伤组织再分化丛芽诱导生根移栽通 过 花 药 培 养 产 生 花 粉 植 株 的 两 种 途 径 并 没 有 绝 对 的 界 限 ， 主 要 取 决 于 培 养 基 中_ 。(2) 单倍体育种的过程在花药培养的基础上

57、，用_继续处理单倍体幼苗，染色体加倍，重新恢复为二倍数。因为它们的二倍数染色体是由单倍数染色体本身加倍而来的，所以都是纯系，不会发生性状分离。详见下图：单倍体育种的优点后代都是 _，自交产生的后代不会发生性状分离；明显地缩短了_；另外为新品种的培育开辟了新途径。3影响花药培养的因素(1) 诱导花粉植株能否成功及诱导成功率的高低，受多种因素影响， 其中 _和_是主要的影响因素。(2) 不同植物的诱导成功率_。同一种植物_ 对诱导成功率也有直 接 影 响 。 选 择 适 宜 的 _ 也 是 提 高 诱 导 成 功 率 的 重 要 因 素 ； 不 同 生 物 的 适 宜 的_ 不同，但对绝大多数植物

58、而言，适宜花药培养的时期是_期。二、花药培养的实验操作流程1材料的选取确定花粉发育时期的最常用的方法是_ 法，对一些花粉细胞核不易着色的植物，需采用_法。2材料的消毒通常将选取的材料先用_ 浸泡约 _ s，在无菌水中清洗，然后用质量分数为_溶液消毒24 min，最后用无菌水冲洗_次。3接种和培养先在 _条件下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。花药培养的第一步是接种的花药开裂， 长出 _或释放出 _。 下一步将 _及时转移到 _培养基上培养，或将大量的幼小植株分开，分别移植到新的培养基上培养。培养温度控制在25左右，不需要_。_形成后才需要光照。4鉴定和筛选在花药培养中，特别是通过愈伤

59、组织形成的花粉植株，常常会出现染色体组的数目的变化。因此还需要对培养出来的植株作进一步的鉴定和筛选。提醒(1) 花药培养的第一步成功的标志是接种的花药长出愈伤组织或释放胚状体。下一步将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便愈伤组织或胚状体进一步分化成再生植株。(2) 选材是否成功是花药培养成功的关键，因此学生应学会通过显微镜观察处于适宜发育期的花粉。(3) 花蕾的选择要符合实验的要求，过早过晚都是不利的。(4) 培养基灭菌、花蕾消毒或接种等都应严格按无菌技术的要求进行操作，否则会导致培养对象被污染。知识点一月季花药培养的基础知识1回答下列有关花药培养的问题：(1) 通过花药培养产生单倍体植株一般

60、有两种途径：一种是花粉通过_阶段发育为植株；另一种是在诱导培养基上先形成_ ，再将其诱导分化成植株。这两种途径主要取决于培养基中_的种类及浓度配比。(2) 通 过 上 述 两 种 途 径 得 到 的 单 倍 体 植 株 具 有 的 特 点 是 _ 。 应 如 何 解 决 ？_。2如图表示某植物的花药培养过程，请据图判断下列说法中错误的是( ) aaf 不能体现细胞的全能性bc中是高度液泡化的薄壁细胞c植株 a和 f中的染色体组数不同d植株 f 一般不能直接应用于生产知识点二月季花药培养的实验流程3下列关于花药培养过程的说法，正确的是( ) a花药中的花粉在培养基上发育成胚状体还是愈伤组织是随机