肌酸激酶MB型同功酶质量测定SOP_MMB临床意义

1、1检测原理mmb方法是基于“三明治”原理的一步式酶免疫分析法。样本是利用带有具体针对ckb亚基的单 克隆抗体涂层的二氧化珞粒子以及辘合物试剂(标有b 毗喃半乳糖背的具体针对ckmb同功酶的单克 隆抗体)孵育的标木与包被ckb亚基特异的单克隆抗体的二氧化铅颗粒及结合物(被ckmb同功酶特 异的单克隆抗体标记的b半乳糖苜酶)一起孵育。在孵育过程中会形成一个由颗粒/ckmb/结合物组成 的三明治式的结构，没有结合的结合物可通过磁性分离和清洗来清除，结合了三明治的b 毗喃半乳糖 昔与一个发色底物氯酚红-p -d-ott喃半乳糖昔(cprg)结合，cprg水解释放色基(cpr)。患者样本中所呈现的ckm

2、b的浓度直接与由于在577nm处测量的cpr的形成而导致的颜色变化的比率成比例。ckmb + cr02-ab +cro2-ab- ckmb- f (ab7 )2-p-gal + cro2-abaf(abz )2-p-毗喃半乳糖苜+ f(ab l-卩-毗喃半乳糖苜cro2-ab- ckmb- f (ab' )2-3-gal + 清洗液cro2-ab- ckmb- f (ab' )2-0-gal + cro2-ab>cro厂ab + f(ab/ )2-p-毗喃半乳糖昔(转移到比色杯)cprg (在577nm处不吸收)cro厂ab- ckmb- f(abz )2-p-gal c

3、pr (在577nm处吸收)2标本采集与处理2. 1采血方法空腹不抗凝静脉血23ml。2. 2标本保存室温保存，及时送检和检测。样本在室温下可存储12小时，在4°c下可存储3天，在-20 °c下冷冻保存1个月。2. 3注意事项推荐选用血清。标本应避免乳糜、溶血、黄疸。3试剂和设备3. 1试剂采用西门子医学诊断产品(上海)有限公司提供的试剂盒。3. 1. 1试剂组成试剂船12孔为结合物，液体；3 4孔为抗体.cr020.9mg/ml,片剂；56孔为cprg15.7mm,片剂；7孔为底物稀释液缓冲液175 mm,液体；8孔为銘稀释缓冲液200 mm,液体。3. 1.2试剂准备直

4、接使用。3. 1.3试剂保存试剂28°c保存，有效期内稳定。3. 2质控品美国biorad质控液。3.3校准品西门子校准品。3. 4仪器siemens dimension xpand plus/rxl max 全口动生化分析系统。4操作程序4. 1检测过程流程签收样品一离心-> 上机检测一审核报告一签发报告一标本保存。4. 2样品签收严格按照标本接收程序签收标本。4. 3标本处理以25003000r/min,离心6lomin,分离血清上机测定。若标本不能及时检测，将分离的血清冷藏 与2-8 °c的冰箱内。4.4标本检测4.4. 1手工编排测试项目：样品按编号装入样品架

5、，主屏幕按fkenter data,在position处输入样 品所在样品架字母及所在位置号，按enter,在patient name处选择性输入病人名字，按enter,在sample no处输入样品号，按ente在tests处使用检验键或检验组合键选择相应项目，根据需耍选择相应的 按键改变mode （按f7:mext mode选择样品管类型）、priority （按f4:next priority选择样品的 处理模式）、fluid （按f8:next fluid选择标本类型）。4. 4.2双向条形码标本分离血清后直接运行仪器。4. 4.3运行：输入完毕后按f3:load list,确认样品已

6、经装载在样本盘上，按run键，仪器开始进行 样品检测。4. 4. 4检验后标木保存标本检验完成后用采血管原盖盖紧，保存于标本冷藏库内，按日期放好，保存期为7天。5校准程序5. 1校准品准备和储存直接使用，28 °c保存。5. 2校准条件页码：第页共页在室内质控失控、更换试剂批号、更换仪器主要配件或进行大保养后均需校准。无特殊情况校准 周期为3个月。5. 3校准程序主屏幕按 f5:pr0cess ctrl-f1: calibration,按 enter-*f2:set-up&run,按项目键选择所需要 校准的项目名称method,选中相应试剂批号lot,输入操作者姓名opera

7、tor校准液货号calibrator product和批号lot,以及最低值校准液在样品架上的位置start at position,最后把校准液各个水 平的值按照由低到高的顺序输到对应位置，按f4： assign cups指定样品杯，校准液按顺序排列在样 品架上，按f7： load/run-f4： run或“run”运行键运行校准程序。6质量控制程序6. 1质控品准备和储存质控品为液体，可以直接使用。6. 2质控水平和分析批长度每24小至少进行一批，每批2个浓度水平。6.3质控操作程序与4.4标本检测步骤相同，只需要按f4:next priority将routine修改成qc状态。7性能参数

8、本法线性范围为0. 5 - 300ng/ml,对于超过测定线性范围的结果，用样本稀释液进行稀释，输入稀 释因子后再重新检测。8生物参考区间0 3.6 ng/ml。9临床意义血清中ck-mb水平的定量化可以辅助诊断心肌损伤。由于急性心肌梗死(ami),上升的ck-mb水平 与心肌细胞的死亡和损伤有关。心肌损伤在胸痛发作后38h内出现，ck-mb的水平在1224h内达到 高峰浓度，在2448h内通常恢复到基准水平。因此可以检测ck-mb水平。该上升和下降模式指示心肌 细胞损伤，通过在合适的间隔时间分析ck-血样品，可以检测出该典型模式。某些心肌梗死相对微弱， 产生非常少的ck-mbo因而重点是采用灵敏的检测检测ck-mb水平的微弱上升。除心肌梗死以外的情况，特別是冠状动脉旁路移植手术、瓣膜替换术或先天性缺损修补术等心脏 手术，可能导致血清ck-mb水平上升。但在该情况下，ck-mb水平不会表现出以上心肌梗死特有的上升 和下降模式。有时监视病人的ck-mb水平是为了将心肌梗死当作并发症检测。其他情况也可能导致ckmb水平上升，当心肌梗死的诊断不清楚时，应予以考虑。这些情况包括骨胳肌损伤、皮肌炎、杜性肌营养不