控制菌检查用培养基适用性检查操作规程

1、1目的建立一个控制菌检查用培养基检查操作程序0文件批准表职责部门及职责姓名签名日期起草部相关部门审核qa审核质量管理部部门审核部批准质量负责人文件复审日期2适用范围控制菌检查中用的培养基。检查项目包括培养基的促牛长、指示和抑制特性能力。3发放范围质量部4职责责任人职责质量部负责起草执行该文件。5内容5. 1菌种和菌液制备5. 1. 1控制菌检查用培养适用性检查试验用菌株。大肠埃希菌(escherichia coli) cmcc(bo 44102金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus) cmcc (bo 26003乙型副伤寒沙门菌铜绿假单胞菌(pseudomonas aeru

2、ginosa) cmcc(b) 10104牛梭菌(clostridium sporgenes) cmcc (b) 64941白色念珠菌 candida albicans) cmcc(b) 980015.1.2将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌分别接种于胰酪大豆豚 液体培养基中或在胰酪大豆月东琼脂培养基上，30-35°c培养18-24小时，将白色念珠菌 接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上或沙氏葡萄糖液体培养基中，20-25°c培养2-3天，将生抱梭菌接捉于梭菌增菌培养基中置厌氧条件下30-35°c培养24-48小时或接种于硫乙 醇酸盐液体培养基中30-35

3、°c培养18-24小时。5. 2各种培养基需要测试的能力及判断指标5.2.1液体培养基促生长能力检查，取不大于loocfu的试验菌分别接种于被检查培养 基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的最短培养时间下 培养。增菌培养基多澄清液体培养基，与对照培养基比较，被检查培养基中试验菌应生 长良好，表现为液体培养基浑浊。固体培养基促生长能力检查：取试验菌液（含菌数不大于loocfu）分别涂布于被检查 培养基和对照培养基上，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的最短时间下 培养，与对照培养基比较，被检查培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应 一致。若被检查

4、培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落数的比值应在50-200%, 且菌落形态、大小与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基的适用性检查促生长 能力符合规定。5. 2.2培养基抑制能力检查：取不少于loocfu的试验菌分别接种于被检查培养基和对 照培养基，在相应控制菌检查规定的培养温度及不不小于规定的最长培养基时间下培 养，试验菌应不得生长。5.2.3液体培养基指示能力检查：取不大于loocfu的试验菌分别接种于被检培养基和 对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的最短培养时间下培 养。与对照培养基比较，被检查培养基中试验菌应生长情况/指示剂反应等应与对照培 养基一致。固体

5、培养基指示能力检查：取试验菌液（含菌数不大于loocfu）分别涂布于被检查培 养基和对照培养基上，在和应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的时间下培养， 与对照培养基比较，被检查培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征、菌落颜 色及指示剂反应等应一致。5. 3控制菌检查用培养基能力测试列表控制菌检查涉及的14种培养基特点各异味，表中概述培养基检查的具体项冃，具体操 作在其后说明。表1控制菌检查用培养基的促生长能力、抑制能力和指示特征控制菌的检查培养基特征试验菌株耐明盐革兰阴性菌肠道菌增菌液体培养基促生长能力人肠埃希菌、铜绿假单胞菌抑制能力金黄色葡萄球菌紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基促生长能力+

6、指示特征大肠埃希菌、铜绿假单胞菌大肠埃希菌麦凯康液体培养基促生长能力大肠埃希菌抑制能力金黄色葡萄球菌麦凯康琼脂培养基促生长能力+指示特征大肠埃希菌rv沙门菌增菌液体培养 基促生长能力乙型副伤寒沙门菌抑制能力金黄色葡萄球菌木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基促生长能力+指示特性乙型副伤寒沙门菌三糖铁琼脂培养基指水能力乙型副伤寒沙门菌漠化十六烷基三甲鞍琼脂培养基促生长能力铜绿假单胞菌抑制能力大肠埃希菌甘露醇氯化钠琼脂培养基促生长能力+指示特性金黄色葡萄球菌抑制能力大肠埃希菌梭菌增菌培养基促生长能力生砲梭菌哥伦比亚琼脂培养基促生长能力生抱梭菌沙氏葡萄糖液体培养基促生长能力白色念珠菌沙氏葡萄糖琼脂培养基促生

7、长能力+指示特性白色念珠菌念珠菌显色培养基促生长能力+指示能力白色念珠菌抑制能力大肠埃希菌5. 4控制菌培养基适用性检查的具体操作过程：5.4. 6木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基：新鲜配制对照木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基，121°c灭菌15分钟，备用。取含沙门菌的rv沙门增菌液体培养物划线接种于木糖赖氨酸脫氧胆酸盐琼脂培养基平板上30-35°c培养18-48小时，被检培养基同法操作。 培养18小时，被检培养基菌落大小、形态特征及颜色应与对照培养基上的菌落一致， 培养48小时，空白平板和接种金黄色葡萄球菌的平板应不得生长。5. 4.7三糖铁琼脂培养基新鲜配制对照三糖铁琼脂培

8、养基，121°c灭菌15分钟，制成 高底层（2-3cm）短斜面，备用，用接种针挑取在木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基平 板上生长的疑似菌落于三糖铁琼脂培养基高层斜面上进行斜面和高层穿刺接种，培养 18-24小时，被检培养基同法操作。培养18小时，被检培养基菌落大小、形态特征及 颜色与对照培养基上的菌落一致;培养24小吋，空白平板应无菌落生长。5.4.8漠化十六烷基三甲鞍琼脂培养基 新鲜配制对照漠化十六烷基三甲鞍琼脂培养 基，121°c灭菌15分钟，备用。冷却至60°c倾注平皿，35°c培养箱预培养8小时后备 用。取7个无菌琼脂平板，分别涂布接种铜绿假单胞菌

9、和大肠埃希菌各3皿，接种菌 液0. 1ml （含菌50-100cfu）,另一平板不接种菌作为空白对照,涂布均匀后于规定温 度30-35°c倒置培养18-72小时，被检培养基同法操作。培养18小时，被检培养基菌 落大小、形态特征及颜色应与对照培养基上的菌落一致，培养72小时，空白平板和接 种大肠埃希菌的平板应无菌落牛长。5.4.9廿露醇氯化钠琼脂培养基 新鲜配制对照廿露醇氯化钠琼脂培基，121°c灭菌15 分钟，冷却至60°c冷却至60°c倾注平皿，35°c培养箱预培养8小时后备用。取5个无 菌琼脂平板，分别涂布接种金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌各2

10、皿，接种菌液0. lnil （含 菌50-100cfu）,另一平板不接种菌作为空白对照,涂布均匀后于规定温度30-35°c倒 置培养18-72小时，被检培养基同法操作。培养18小时，被检培养基菌落大小、形态 特征及颜色应与对照培养基上的菌落一致，培养72小吋，空白平板和接种大肠埃希菌 的平板应无菌落生长。5. 4.10梭菌增菌培养基 新鲜配制对照梭菌增菌培养基2瓶，121°c灭菌15分钟，备 用，接种生砲梭菌1瓶，接种菌液51 （不大于loocfu）,另一瓶不接种菌株作为空白对 照，置规定温度30-35°c厌氧条件下培养48小时，检培养基同法操作。培养48小时，

11、空白培养瓶应不得浑浊，与对照培养基比较，被检培养基中试验菌应生长良好，表现 为液体培养基变浑浊。5.4. 11哥伦比亚琼脂培养基 新鲜配制对照哥伦比亚琼脂培养基，121°c灭菌15分钟, 冷却至60°c倾注平皿，35°c培养箱预培养8小时后备用。取3个哥伦比亚琼脂平板， 涂布接种生孑包梭菌各2 1111,接种菌液0. 1ml （含菌50-100cfu）,另一平板不接种菌作 为空白对照，涂布均匀后于规定温度30-35°c的厌氧条件倒置培养48-72小时，被检 培养基同法操作。培养48小时，被检培养基菌落大小、形态特征及颜色应与对照培养 基上的菌落一致，培养

12、72小时，空白平板和接种大肠埃希菌的平板应无菌落生长。哥伦比亚琼脂培养基营养丰富，适宜多数需氧菌的生长，为了消除其它杂菌生长对 检查结果的影响，可在每升灭菌后培养基中按无菌操作添加含有相当于20mg庆大霉素 的硫酸庆大霉素。添加庆大霉素的哥伦比亚琼脂可参照上述方法进行培养基适用性考 察。5.4. 12沙氏葡萄糖液体培养基 新鲜配制对照 沙氏葡萄糖液体培养基2瓶，21°c灭菌 15分钟，备用，接种白色念珠菌1瓶，接种菌液51（不大于loocfu）,另一瓶不接种菌 株作为空白对照，置规定温度30-35°c培养3-5天，检培养基同法操作。培养3天，与 对照培养基比较，被检培养基中

13、试验菌应生长良好，表现为液体培养基变浑浊。培养5 天，空白培养瓶和接种大肠埃希菌的培养瓶应不得浑浊。5. 4. 13沙氏葡萄糖琼脂培养基 新鲜配制对照沙氏葡萄糖琼脂培养基，121°c灭菌15 分钟，冷却至60°c倾注平皿，35°c培养箱预培养8小时后备用。取3个沙氏葡萄糖琼 脂平板，涂布接种白色念珠菌各2皿，接种菌液0. 1ml （含 菌50-100cfu）,另一平板 不接种菌作为空白对照,涂布均匀后于规定温度30-35°c倒置培养24-48小时，被检 培养基同法操作。培养24小时，被检培养基菌落大小、形态特征、颜色及气味应与对 照培养基上的菌落一致，培养48小时，空白平板和接种大肠埃希菌的平板应无菌落牛 长。5. 4. 14念珠菌显色培养基新鲜配制对照念珠菌显色培养基，加热充分溶解，冷却至 60°c倾注平皿，35°c培养箱预培养8小时后备用。念珠菌显色平板使用前避光保存，取 5个无菌念珠菌显色平板，分别涂布接种白色念珠菌和大肠埃希菌各2皿，接种菌液 0. lml （含菌50-100cfu）,另一平板不接种菌作